Фунгицидное действие различных системных антимикотиков на грибы рода Candida in vitro

01.08.2010
2882

Учреждение Российской академии медицинских наук НИИ вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова РАМН

Статья посвящена сравнительному анализу фунгицидной активности препаратов, содержащих флуконазол в качестве действующего вещества, на тест-штаммах 3 видов дрожжей рода Candida: C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata in vitro.Работу проводили двойным слепым методом. Были использованы дифлюкан, оригинальный препарат, содержащий флуконазол, и 5 его дженериков. Дрожжи высевали на среду Сабуро и ПГДА. В работе использовали луночно-диффузионный метод. Препараты в капсулах исследовали в суспензии в концентрациях 150 и 2 мг/мл. Контролем служил дифлюкан для внутривенного введения. Эксперименты проводили в 15-кратной повторности по 3 раза. Результаты оценивали по величине зоны ингибиции роста дрожжей (в мм).
При сравнительном изучении препаратов, содержащих флуконазол, наибольшую статистически достоверную фунгицидную активность на всех трех модельных штаммах дрожжей при максимальной (150 мг/мл) и минимальной (2 мг/мл) концентрации показал дифлюкан. Фунгицидная активность капсулированной формы дифлюкана (2 мг/мл) и жидкой для внутривенного введения (2 мг/мл) статистически достоверно не отличалась как на C.albicans, так и на C.parapsilosis. Наиболее чувствительными к препарату оказались C.albicans и C.parapsilosis. Дифлюкан подавляет рост C. glabrata статистически достоверно более выраженно, чем другие препараты, содержащие флуконазол.

Флуконазол является антимикотиком для системного применения, особенно хорошо зарекомендовавшим себя в лечении микозов, вызванных дрожжами рода Candida. По биохимической структуре флуконазол является производным триазола и функционально относится к высокоактивным селективным ингибиторам синтеза стероидов в клетках грибов. В низких концентрациях флуконазол нарушает биосинтез клеточной мембраны грибов, что приводит к развитию фунгистатического эффекта (задержка роста). При высоких концентрациях вследствие перекисного окисления и других процессов в клетке происходит гибель гриба (фунгицидный эффект). В отличие от других азольных препаратов флуконазол обладает высокой специфичностью по отношению к ферментам гриба, зависимым от цитохрома р=450 [6].

Молекула флуконазола была синтезирована и запатентована компанией Pfizer (США). Позднее, после окончания срока действия патента на фармакологическом рынке появились дженерики, в состав которых также входит флуконазол. Известно, что препараты-дженерики по разным параметрам (биоэквивалентность, биодоступность, фармакинетика и др.) сравнивают с оригинальным препаратом [9].

Цель нашего исследования — оценить фунгицидную активность различных антимикотиков, в состав которых входит флуконазол, на лабораторных культурах различных дрожжей рода Candida.

Материал и методы исследования

В работе использованы оригинальный препарат, содержащий флуконазол — дифлюкан (Pfizer, США) и дженерики флуконазола: дифлазон (KRKA, Словения), флюкостат (Фармстандарт-Лексредства, Россия), микосист (Gedeon Richter, Венгрия), флуконазол (Hemofarm, Сербия), микомакс (Zentiva, Чешская республика). В опытах использовано не менее 5 упаковок препарата одного наименования из различных аптек Москвы. Препараты исследовали в концентрациях 150 и 2 мг/мл. В качестве контроля использовали дифлюкан для внутривенного введения в концентрации 2 мг/мл. Для исследования были использованы тест-штаммы Candida albicans (ВКПМY-3108), Candida glabrata (КБП 3049) и Candidа рarapsilosis (КБП 3050), среда Сабуро и пептонно-глюкозо-дрожжевой агар.

Применен луночно-диффузионный метод. В чашку петри вносили 20 мл агаризованной среды. В центре делали лунку на 2/3 толщины слоя агара. После этого газоном засевали штаммы дрожжей, в лунку вносили препараты в двух концентрациях, как указано выше. инкубацию производили при 37°С в течение 24 ч, после чего проводили измерение зоны подавления роста дрожжевых грибов и фотографирование чашек (рис. 1, см. на вклейке).

Зоны ингибиции роста грибов (полное подавление роста колоний) измеряли в мм. Для контроля зон ингибиции роста проводили микроскопирование фрагментов агара (рис. 2, 3, см. на вклейке).

Результаты исследования и обсуждение

Все исследованные препараты флуконазола тормозили рост трех видов дрожжей в концентрации как 150 мг/мл, так и 2 мг/мл. При этом зоны ингибиции роста дрожжей, образующиеся вследствие воздействия дифлюканом, были, как правило, достоверно больше, чем таковые при воздействии другими препаратами, содержащими флуконазол (см. таблицу).

Во всех экспериментах с C.albicans зоны торможения роста были достоверно больше при воздействии дифлюканом, чем другими препаратами.

Что касается C.parapsilosis, то при концентрации препаратов, равной 150 мг/мл, зоны торможения роста дрожжей были статистически достоверно больше при воздействии дифлюканом, чем другими препаратами. При концентрации препаратов 2 мг/мл оказалось статистически недостоверным различие величины зоны торможения роста при воздействии дифлюканом и микосистом.

В экспериментах с C.glabrata при концентрации препаратов, равной 150 мг/мл, зоны торможения роста дрожжей были статистически достоверно большими при воздействии дифлюканом, чем другими препаратами. При концентрация препаратов 2 мг/мл зоны торможения роста статистически достоверно больше оказались при воздействии дифлюканом по сравнению с флуконазолом, микосистом, микомаксом и флюкостатом.

При сравнительном изучении фунгицидной активности дифлюкана на различные виды дрожжей наиболее чувствительными оказались C.albicans и C.parapsilosis (рис. 4, см. на вклейке).

Различные виды рода Candida, и в первую очередь, Candida albicans, могут вызывать поражения кожного покрова, желудочно-кишечного тракта и половых органов. Кандидозные вульвовагиниты — одна из наиболее частых причин обращения женщин к гинекологу [2]. По данным ряда авторов [1,3,5,8], C.albicans выделяют у 73—90% больных кандидозным вульвовагинитом, C.glabrata — у 15-35%, другие виды дрожжей, в том числе C.parapsilosis, — у 4—19% [8—11]. Этими данными и был обусловлен выбор модельных видов дрожжей для наших экспериментов, в которых исследовалась антимикотическая активность флуконазола.

Важным является вопрос, как интерпретировать полученные результаты. Разница в размере зоны ингибиции роста дрожжей в 1 мм — это много или мало? Особенно при сравнении антимикотической активности препаратов, в состав которых входит флуконазол. В настоящее время единого мнения среди микологов нет. Однако этот вопрос хорошо изучен на примере бактерий. Так, например, если при воздействии на Pseudomonas aeruginose тикарциллином зона торможения роста микроорганизмов ≤14 мм — этот штамм резистентен, а если ≥15 мм — штамм чувствителен к этому препарату [7].

При изучении in vitro фунгицидной активности дифлюкана и его различных дженериков было показано, что этим свойством обладают все исследуемые препараты. Однако проявляется эта активность в различной степени. Наибольшей статистически достоверной фунгицидной активностью на всех трех модельных штаммах как при максимальной, так и при минимальной концентрации обладает дифлюкан. Кроме того, очень важно, что этот препарат тормозит рост штаммов не только C.albicans, но и других видов дрожжей. Достоверно более чувствительными к дифлюкану оказались C.albicans и C. parapsilosis, чем устойчивый к различным антимикотикам C.glabrata [2,10]. Полученные нами данные доказывают, что дифлюкан подавляет рост C.glabrata статистически достоверно более выраженно, чем другие исследуемые препараты, содержащие флуконазол. Сходные результаты при сравнительном изучении фунгицидной активности дифлюкана и некоторых его дженериков были получены и на других видах дрожжей рода Candida и, что важно, другими методами [4].

Таким образом, фунгицидная активность флуконазола в различных препаратах неодинакова. Наибольшей статистически достоверной фунгицидной активностью на всех трех модельных штаммах дрожжей при максимальной (150 мг/мл) и минимальной (2 мг/мл) концентрациях обладает дифлюкан.

Наиболее чувствительными к препарату видами оказалась C.albicans и C.parapsilosis. Он подавляет рост C.glabrata статистически достоверно более выраженно, чем другие препараты.

Список литературы

1. Анкирская А.С., Муравьева В.В., Миронова Т.Г. и др. Генитальный кандидоз в структуре оппортунистических инфекций влагалища. Принципы лабораторной диагностики и значение мониторинга чувствительности грибов к антимикотикам //Акуш. и гин. — 2009. — № 5. — С. 31—37.

2. Анкирская А.С., Муравьева В.В., Фурсова С.А. Мониторинг видового состава и чувствительности к антимикотикам дрожжеподобных грибов, выделенных из влагалища женщин репродуктивного возраста. //Клин. микробиол. антимикроб. химиотер. — 2006. — Т. 8, № 1. — С. 87—95.

3. Бурова С.А. Особенности возникновения и комплексного лечения кандидозных вульвовагинитов. // Лечащий врач. — 2003. — № 4. — С. 53—56.

4. Васильева Н.В., Выборнова И.В., Елинов Н.П. Чувствительность Candida species к флуконазолуи некоторым его дженерикам в испытаниях in vitro// Проб. мед. микол. — 2002. — Т.4, № 2. — С. 43—44.

5. Кунгуров Н.В, Герасимова Н.М., Вишневская И.Ф. Современные представления о лечении урогени­тального кандидоза // Лечащий врач. — 2004. — № 6 . — С. 46—48.

6. Кунельская В.Я. Опыт применения микофлюкана (флуконазола) при лечении фарингомикоза. // Лечащий врач. — 2005. — № 1. — С. 67—69.

7. Сидоренко С.В., Колупаев В.Е. антибиотикограмма: дискодиффузионный метод. интерпретация результатов// http://www.rusmedserv.com/microbiology/standard/article_5html.

8. Сметник В.П., Марченко Л.А., Чернуха Г.Е. Опыт применения микофлюкана (флуконазола) для лечения кандидозного вульвовагинита// Лечащий врач. — 2004. — № 2. — С. 73—76.

9. Талибов О.Б. Дженерики и эквивалентность лекарственных препаратов. http://www.rusmg.ru.

10. Pfaller M.A., Diekema D.J., Rinaldi M. et al. Gibbs and the Global Antifungal Surveillance Group.Results from the ARTEMIS DISK Global Antifungal Surveillance Study: a 6.5 — Year Analysis ofSusceptibilities of Candida and Other Yeast Species to Fluconazole and Voriconazole by Standardized Disk Diffusion Testing. //J. Clin. Microbiol. —2005. — Vol. 43, № 12. — P. 5848–5859.

Об авторах / Для корреспонденции

Желтикова Татьяна Михайловна, д-р биол. наук, зав. лаб. Учреждения Российской академии медицинских наук НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН
Адрес: 105064, Москва, Малый Казенный пер., д.5а
Телефон: 8(495)917-42-55
E-mail: t-zhelticova@yandex.ru

Нет комментариев

Комментариев: 0

Вы не можете оставлять комментарии
Пожалуйста, авторизуйтесь