Функциональная активность лейкоцитов в семенной жидкости при патоспермии

Цель исследования: оценить активность лейкоцитов как основного источника активных форм кислорода (АФК) в семенной жидкости пациентов с нормо- и пато(зоо)спермией. Материалы и методы. Исследованы образцы нативного эякулята от 95 мужчин репродуктивного возраста, обратившихся для спермиологического обследования. Продукцию активных форм кислорода (АФК) в лейкоцитах семенной жидкости определяли по оригинальной методике, основанной на методе кинетической хемилюминесценции, адаптированной к исследованию эякулята. Результаты. Выявлены статистически значимые (p<0,05) различия по продукции АФК лейкоцитами по амплитуде как базального, так и стимулированного ответа между группами «нормозооспермия», «патозооспермия» и «патозооспермия+лейкоспермия»: медиана уровня базальной хемилюминесценции, нормированного на число лейкоцитов, составила 0,13; 0,71 и 1,78 соответственно; медиана уровня стимулированной хемилюминесценции, нормированного на число лейкоцитов, – 0,62; 2,14; 5,94 соответственно. При нормозооспермии уровень стимулированного ответа не превышал 0,5 усл. ед., в группах c патозооспермией примерно по трети случаев характеризовались низким, умеренным и высоким уровнями стимулированного ответа соответственно. Выводы. Уровень базальной продукции АФК лейкоцитами в группах «патозооспермия», «патозооспермия+лейкоспермия» был примерно в 5 и 15 раз выше, чем в группе «нормозооспермия», уровень стимулированной продукции АФК – в 3,5 и 9,5 раз соответственно. Это свидетельствует об активации процессов окислительного стресса в семенной жидкости пациентов с патозооспермией за счет повышенной активности лейкоцитов даже при нормальной их концентрации.

Введение. Около 8% супружеских пар в России не имеют детей из-за нарушения репродуктивной функции мужчины. С учетом неблагоприятной демографической ситуации в стране проблема бесплодия требует особого внимания. Одной из причин нарушения мужской фертильности служит избыточная продукция активных форм кислорода (АФК), встречающаяся среди 30–80% мужчин из супружеских пар с бесплодием [1]. Наиболее значимыми причинами окислительного стресса в семенной жидкости считаются инфекционно-воспалительные заболевания половых органов у мужчины, в частности хронический бактериальный простатит, а также варикоцеле, аутоиммунные реакции против сперматозоидов, действие неблагоприятных экологических факторов репротоксикантов [2]. Для обеспечения нормального функционирования сперматозоидов важен баланс АФК [3]. В низких (физиологических) концентрациях они регулируют такие ключевые процессы, как подвижность и гиперактивация сперматозоидов, капацитация, акросомная реакция, слияние мембраны сперматозоида с оолеммой. Через АФК-зависимые сигнальные пути регулируется экспрессия генов и активация белков, необходимые для пролиферации и дифференцировки незрелых мужских половых клеток, для созревания сперматозоидов [4]. В случаях когда возможностей антиоксидантной системы недостаточно для нейтрализации негативного влияния повышенного уровня АФК, возникает окислительный стресс, приводящий к нарушению работы редокс-сигнальных систем, к прямому повреждению белков, липидов и ДНК, а также к инициации апоптоза [5].

В семенной жидкости основным источником АФК служат лейкоциты и незрелые сперматозоиды, продукция супероксида которыми осуществляется либо системой НАДФН-оксидазы, либо в результате утечки из дыхательной цепи митохондрий [6, 7]. В норме концентрация лейкоцитов в семенной жидкости в среднем варьируется от 0,1 до 0,5 млн/мл (референсное значение, согласно ВОЗ (2010), до 1 млн/мл). Лейкоциты примерно в равной степени представлены нейтрофилами и макрофагами, и оба типа клеток активно продуцируют свободные радикалы. Наличие данных клеток в эякуляте необходимо для элиминации неполноценных форм сперматозоидов и незрелых половых клеток, а также для противомикробной защиты. Повышенная продукция АФК лейкоцитами стимулирует продукцию супероксидного анион-радикала самими сперматозоидами, таким образом, лейкоцитарные свободные радикалы действуют не только напрямую, но и опосредованно, а также через продукцию провоспалительных цитокинов, причем важен не показатель концентрации лейкоцитов, а именно количество АФК, который ими продуцируется.

Существует ряд методик, позволяющих оценивать кислородный метаболизм нейтрофилов. Наиболее широко используемым ввиду простоты исполнения и отсутствия необходимости применения дорогостоящего оборудования стал НСТ-тест в различных вариациях, однако имеющий ряд недостатков: он не позволяет зарегистрировать выработку АФК в динамике, регистрация результатов посредством визуальной микроскопии увеличивает количество субъективных ошибок и не позволяет проводить много исследований [8].

Для оценки функциональной активности лейкоцитов более перспективен метод хемилюминесценции в присутствии хемилюминесцентных активаторов, т...

Е.В. Проскурнина, Н.А. Мельников, В.Б. Черных, С.Ю. Чистякова, Д.А. Охоботов, А.А. Камалов