Характеристика изменений протеомного состава цервиковагинальной жидкости при заболеваниях шейки матки, ассоциированных с ВПЧ-инфекцией

Цель исследования. Характеристика изменений протеомного состава цервиковагинальной жидкости для оценки степени тяжести ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки у пациенток репродуктивного возраста.
Материал и методы. В исследовании приняли участие 30 пациенток, имеющих различные формы ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки (ASCUS, LSIL и HSIL). Из образцов цервиковагинальной жидкости (ЦВЖ) выделялись белки для дальнейшего протеомного анализа методом тандемной хромато-масс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС/МС). Полуколичественный анализ данных, включающий идентификацию и аннотацию белков, осуществлялся с использованием программных пакетов MaxQuant и Perseus.
Результаты. Были определены белковые панели, специфичные для различных форм ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки (ASCUS, LSIL и HSIL). Первая группа белков (P4HB, HSPA8, C4BPA и др.) характеризует ранние изменения, ассоциированные с ВПЧ-инфекцией и связанные с поражением эпителия шейки матки, в том числе проникновение вируса в клетку и его транскрипцию, нарушение функции системы комплемента. Вторая группа белков (PRDX5, YWHAE, LRG1 и др.) принимает непосредственное участие в развитии неоплазий шейки матки и их прогрессировании, характеризует поздние изменения, в частности, снижение процесса апоптоза, нарушение дифференцировки и созревания эпителия, трансформацию атипических клеток.
Заключение. Таким образом, анализ протеома ЦВЖ позволяет изучать молекулярные механизмы патогенеза ВПЧ-ассоциированных заболеваний шейки матки и дифференцировать изменения эпителия на ранних этапах развития.

Вирус папилломы человека (ВПЧ) высокого онкогенного риска является главным этиологическим фактором развития неоплазий и рака шейки матки (РШМ) [1]. Известно, что РШМ занимает одну из лидирующих позиций в структуре онкологических заболеваний и смертности у женщин, что является важной медицинской и социальной проблемой. По данным ВОЗ, ежегодно в мире выявляются 493,2 тысячи новых случаев РШМ [2].

Известно, что в большинстве случаев ВПЧ способно самостоятельно элиминироваться из организма. При персистенции ВПЧ в течение 3 лет у 27% женщин развиваются цервикальные интраэпителиальные неоплазии (ЦИН) тяжелой степени [3]. Это обуславливает важность диагностики ВПЧ-ассоциированных заболеваний шейки матки на ранних этапах их развития [4]. В связи с этим особое значение приобретают различные исследования и анализ молекулярного состава биологических жидкостей (цервиковагинальная жидкость, фоликулярная жидкость, кровь, моча и др.) и тканей современными точными и высокоспецифичными методами, в частности, методом масс-спектрометрии (МC). МС – это метод качественного и количественного определения веществ в пробе. Масс-спектрометрия позволяет изучать молекулярные механизмы патогенеза неоплазий и злокачественных заболеваний репродуктивной системы и выявлять изменения на ранних этапах [5].

Диагностический потенциал протеомного состава цервиковагинальной жидкости (ЦВЖ) обусловлен тем, что помимо продуктов жизнедеятельности микроорганизмов, населяющих нижний отдел женского генитального тракта, ЦВЖ включает в себя отслоившиеся эпителиальные клетки, шеечную слизь, секрет желез эндометрия и маточных труб, воду, муцин, белки, углеводы и неорганические вещества [6]. ЦВЖ имеет огромное значение в поддержании гомеостаза и в иммунной защите женского полового тракта. В виду простоты забора материала для исследования и благодаря изобилию молекулярного состава, ЦВЖ представляет большой интерес для изучения. Ранние исследования доказали роль ЦВЖ в защите организма от вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) в связи с наличием в ее составе ряда белков и пептидов, в частности кальгранулина А/В, лизоцима, человеческого нейтрофильного пептида, елафина и некоторых гистонов [7, 8]. Белковый состав ЦВЖ подвергается изменению при различных заболеваниях генитального тракта женщины, в том числе при поражении эпителия шейки матки, ассоциированные с папилломовирусной инфекцией.

Целью данной работы была характеристика изменений протеомного состава цервиковагинальной жидкости при ВПЧ-ассоциированных поражениях шейки матки различной степени тяжести у пациенток репродуктивного возраста.

Материал и методы исследования

В одномоментное проспективное исследование было включено 30 женщин, в возрасте от 21 до 45 лет (средний возраст 30,5 года), обратившихся в научно-поликлиническое отделение ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, по поводу наличия патологии шейки матки.

Критерии включения: ВПЧ-инфекция, ВПЧ-ассоциированные заболевания шейки матки, регулярный менструальный цикл, подписанное информированное согласие на участие в исследовании.

Критерии исключения: наличие хронических заболеваний в стадии обострения, прием гормональной терапии, беременность, период лактации, наличие инфекций, передающихся половым путем, нарушение функции почек, печени, легких в стадии декомпенсации.

Комплексное обследование женщин включало: сбор клинико-анамнестических данных, определение гинекологического статуса, типирование, цитологическое исследование, расширенная кольпоскопия, протеомное исследование цервиковагинальной жидкости.Для оценки кольпоскопической картины применяли единую Международную кольпоскопическую классификацию, одобренную на 14-м Всемирном ...

Зардиашвили М.Д., Франкевич В.Е., Назарова Н.М., Бугрова А.Е., Кононихин А.С., Бржозовский А.Г., Стародубцева Н.Л., Асатурова А.В., Сухих Г.Т.