Акушерство и Гинекология №4 / 2019
Хронический цервицит, ассоциированный с вирусом папилломы человека и маркеры воспаления у женщин репродуктивного возраста
1) ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России;
2) ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» МЗ РФ
В настоящее время изучение хронического цервицита (ХЦ), ассоциированного с вирусом папилломы человека (ВПЧ) является одним из приоритетных направлений гинекологии ввиду высокой частоты его выявления среди женщин репродуктивного возраста (15–40% случаев) [1]. ВПЧ на сегодняшний день является наиболее распространенной инфекцией, передающейся половым путем, являющейся значимым фактором индукции и поддержания хронического воспаления шейки матки [2]. ВПЧ- ассоциированный ХЦ, в зависимости от персистенции или транзиторного характера течения инфекции, имеет ряд клинических, кольпоскопических и морфологических особенностей [3]. Развитие цервицитов обусловлено сложными взаимоотношениями микробиоты влагалища – возбудителей инфекций, передаваемых половым путем (Chlamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis, Mycoplasma genitalium) с грибами, условно-патогенными аэробными и анаэробными микроорганизмами [4]. В последние годы, наряду с папилломавирусной инфекцией (ПВИ) доказана значимая роль хронического воспаления, ассоциированного с ВПЧ в развитии дисплазии и рака шейки матки [5]. Поиск современных информативных методов диагностики и определение молекулярно-генетических маркеров хронического воспаления позволит персонализировать подход и определить правильную тактику ведения пациенток [6].
Цель исследования: Изучить частоту выявления ХЦ, распространенность различных типов ВПЧ, значимость вирусной нагрузки, особенности экспрессии мРНК генов регуляции клеточного цикла, апоптоза, иммунитета, матриксных металлопротеиназ (ММР) и уровень метилирования промоторного участка гена WIF1 среди пациенток с ХЦ, ассоциированным с ПВИ.
Материал и методы
В исследование включено 202 пациентки 25–49 лет, средний возраст которых составил 31,8 (5,8) лет, обратившихся с целью диагностики и лечения патологии шейки матки на прием в научно-поликлиническое отделение ФГБУ «НМИЦ АГИ им. В.И. Кулакова» Минздрава России в период с октября 2016 г. по сентябрь 2018 г.
Критерии включения: женщины в возрасте от 25 до 49 лет с диагнозом ХЦ, подтвержденным данными цитологического и/или гистологического исследования и ВПЧ – положительным тестом; пациентки с диагнозом ХЦ при ВПЧ – отрицательным тесте; пациентки с положительным тестом на ВПЧ при отсутствии признаков ХЦ; женщины с ВПЧ – отрицательным тестом при отсутствии признаков ХЦ (контрольная группа). Всеми пациентками подписано информированное согласие на участие в исследовании.
Критерии исключения: беременность и период лактации, дисплазия и рак шейки матки, неспособность отвечать на требования протокола.
Проводился сбор клинико-анамнестических данных, общий и гинекологический осмотр, типирование с количественной оценкой ВПЧ, жидкостная цитология и/или прицельная биопсия шейки матки с последующим гистологическим исследованием (по показаниям), расширенная кольпоскопия, а также молекулярно-биологические методы исследования.
Методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с определением результатов в режиме реального времени (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия, РУ Росздравнадзора № ФСР 2010/08811) проводили исследование на ВПЧ 21 типа (6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44(55), 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82) с определением вирусной нагрузки. С помощью специального зонда проводили забор материала из цервикального канала в пробирки эппендорф объемом 1,5 мл с 0,9% раствором натрия хлорида [7].
Результаты жидкостной цитологии оценивали согласно классификации Бетесда (TDS – Terminology Bethesda System) (2014). Биопсию шейки матки и гистологическое исследование проводили по показаниям и оценивали по классификации ВОЗ (2014).
Оценка результатов расширенной кольпоскопии проводилась в соответствии с рекомендациями по кольпоскопической терминологии, представленной на 16-м Всемирном Конгрессе Международной Федерации по цервикальной патологии и кольпоскопии (IFCPC) (Орландо, 2017 г.). При проведении расширенной кольпоскопии оценивалось состояние эпителия шейки матки, сосудов, кольпоскопические признаки, такие как гипертрофия, наличие деформации, множественных наботовых кист, выраженный сосудистый рисунок, наличие или отсутствие ацетобелого эпителия на пробе с 3% раствором уксусной кислоты, неравномерное йодпозитивное и йоднегативное окрашивание шейки матки на пробе Шиллера [8].
Определение уровня экспрессии мРНК генов врожденного иммунитета IFNAR1, IL1RN, IL1B, IL10, IL18, TNFA, GATA3, TLR4, CD68, TGFB1, CXCL5, CXCL10, CXCL13, регуляции клеточного цикла и апоптоза KI67, CCND1, CDKN2A, BCL2, MMP8, MMP9, рецепторов прогестерона PGR и эпидермального ростового фактора EGFR проведено методом количественной ПЦР в режиме реального времени с предварительной обратной транскрипцией (реактивы и детектирующие амплификаторы производства ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). В реакциях обратной транск...
