Иммуногистохимическая характеристика рецептивности эндометрия в циклах ЭКО

Цель исследования. Изучение экспрессии LIF, TGF-β1 и VEGF-А в поверхностном и железистом эпителии, а также в стромальном компоненте эндометрия посредством иммуногистохимического (ИГХ) анализа. Материал и методы. Ткань эндометрия получали в период окна имплантации в цикле перед проведением ЭКО у 48 бесплодных женщин, проходивших лечение методом ЭКО с последующим переносом эмбрионов. Сравнивали экспрессию исследуемых факторов у 23 женщин с наступившей в результате ЭКО беременностью и у 25 женщин, у которых беременность после ЭКО не наступила. Результаты. Была выявлена значительно высокая экспрессия LIF в поверхностном и железистом эпителии и VEGF-А в строме эндометрия, у женщин с наступившей беременностью по сравнению с женщинами, у которых беременность не наступила (р<0,01). Определение экспрессии LIF в поверхностном и железистом эпителии и VEGF-A в строме эндометрия дает возможность прогнозировать наступление беременности в циклах ЭКО с вероятностью 72,92%. Заключение. Наиболее информативными показателями в отношении исходов ЭКО является оптическая плотность экспрессии LIF в поверхностном и железистом эпителии и VEGF-A в строме эндометрия, полученного на 20–23-й день цикла, предшествующего проведению лечебного цикла ЭКО.

Процесс имплантации эмбриона до сих пор остается не до конца изученным этапом, лимитирующим частоту успешных исходов циклов ЭКО [1]. Несомненно, что результативность циклов ЭКО во многом зависит от адекватной готовности эндометрия к имплантации эмбриона, от качества перенесенного эмбриона в полость матки и от синхронности их взаимодействий в период окна имплантации. На ранних этапах имплантации между эмбрионом и эндометрием происходят различные молекулярные взаимодействия, которые опосредуются рядом цитокинов, хемокинов, факторов роста, молекул адгезии и их рецепторов, определяющих регуляцию дифференцировки, адгезии и инвазии трофобласта. Таким образом, поиск предиктивной оценки имплантационной способности эндометрия является актуальной задачей. Для достижения этой цели применялись различные методы исследования и получены противоречивые результаты [2–9]. Биопсия эндометрия на сегодняшний день остается наиболее распространенным методом получения материала, который после соответствующей обработки может быть исследован на различные иммуногистохимические маркеры. Кроме того, существуют данные, что выполнение биопсии эндометрия в цикле, предшествующем переносу эмбриона, благотворно влияет на результат лечения в программе ЭКО за счет стимулирующего действия местного повреждения на выработку цитокинов [10]. Среди наиболее важных факторов, участвующих в процессе имплантации, выделяют лейкемия-ингибирующий фактор (LIF), трансформирующий фактор роста β1 (TGF-β1) и сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF).

Целью исследования было изучение экспрессии LIF, TGF-β1 и VEGF в поверхностном и железистом эпителии, а также в стромальном компоненте эндометрия посредством иммуногистохимического (ИГХ) анализа.

Материал и методы исследования

Морфологические и ИГХ-особенности эндометрия были проанализированы у 48 женщин, проходивших лечение бесплодия методом ЭКО с последующим переносом эмбрионов в полость матки на базе ФГБУ НИИ АГ им. Д.О. Отта СЗО РАМН. В зависимости от исхода лечения ретроспективно были сформированы 2 группы. В I группу вошли 23 (47,92%) женщины с эхографически подтвержденной беременностью, II группа состояла из 25 (52,08%) женщин, у которых беременность не наступила. Возраст женщин колебался от 24 до 35 лет. Уровень фолликулостимулирующего гормона в крови, определенный на 3–5-й день менструального цикла (д.м.ц) у всех обследованных женщин не превышал 11 МЕ/л, при ультразвуковом исследовании на 3–5-й д.м.ц определялось от 7 до 12 антральных фолликулов в максимальном эхографическом срезе яичников. Всем женщинам проводился стандартный протокол ЭКО или ЭКО с интрацитоплазматической инъекцией сперматозоидов (ИКСИ) с применением антагонистов гонадотропин-рилизинг гормона. Для поддержки лютеиновой фазы цикла применялся микронизированный прогестерон (крайнон, Serono; утрожестан, BESINSHEALTHCARE). Проводили перенос только морфологически качественных эмбрионов на 4-е или 5-е сутки культивирования. Оставшиеся эмбрионы были криоконсервированы методом витрификации. Диагностика беременности проводили путем определения хорионического гонадотропина человека в крови на 14-й день после переноса эмбрионов в полость матки и подтверждали ультразвуковым исследованием на 21-й день.

Биопсию эндометрия выполняли в период предполагаемого окна имплантации на 20–23-й д.м.ц в цикле, предшествующем циклу ЭКО, с помощью аспирационной кюретки Pipelle de Cornier (Jiangsu Suyun Medical Materials Co., Ltd., КНР). Овуляция подтверждалась ультразвуковым методом и путем определения пика лютеинизирующего гормона в моче. Полученные образцы эндометрия обрабатывали по стандартной методике с получением парафиновых блоков. ИГХ-исследование проводилось на депарафинизированных и дегидратированных срезах толщиной 4–6 мкм с использованием авидин-биотинового иммунопероксидазного метода. Уровень экспрессии LIF в эндометрии определяли с использованием Abcam, Rabbit polyclonal Anti-LIF antibody (ab135629) разведение 1:100, уровень экспрессии VEGF-А определяли с использованием Abcam, Monoclonal Mouse Anti-VЕGF-А antib...

Ниаури Д.А., Гзгзян А.М., Кветной И.М., Коган И.Ю., Джемлиханова Л.Х., Крихели И.О., Федорова И.Д., Лесик Е.А., Шарфи Ю.Н., Крылова Ю.С., Шильникова Е.М.