Акушерство и Гинекология №1 / 2013

Использование современных лабораторных технологий в видовой идентификации лактобактерий при оценке состояния микробиоты влагалища у женщин репродуктивного возраста

1 февраля 2013

ФГБУ Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва, Россия

Цель исследования. Определить видовой состав лактобактерий при различных состояниях микробиоты влагалища у женщин репродуктивного возраста методами ПЦР (PCR) и масс-спектрометрии (MS).
Материал и методы. Обследованы 228 женщины. Видовую идентификацию лактобактерий проводили методами MS и Real-Time PCR с праймерами: L. crispatus, L. jensenii, L. gasseri, L. iners, L. johnsonii, L. vaginalis.
Результаты исследования. Выделено 332 штамма лактобактерий 18 видов, чаще выявлялись:
L. crispatus (33,5%), L. jensenii (23,0%) и L. gasseri (18,6%). Определение видового спектра лактобактерий двумя методами показало, что L. crispatus обнаружены у 72% женщин с нормоценозом. У 82,1% женщин с бактериальным вагинозом методом PCR обнаружены L. iners, которые оказались некультивируемыми на рекомендованных для лактобактерий питательных средах.
Заключение. Вагинальные лактобактерии чаще представлены 4 видами: L. crispatus, L. iners, L. jensenii, L. gasseri. Методом PCR выявлен вид L. iners, некультивируемый на средах для лактобактерий.

Внедрение инновационных технологий в микробиологическую диагностику расширяет наши познания в области медицинской микроэкологии. Развитие лабораторной техники, молекулярно- биологических и генетических методов исследования позволило установить высокую гетерогенность бактерий рода Lactobacillus и их широкое видовое разнообразие, достигающее сотни видов [7, 8, 16]. Возможность видовой идентификации лактобактерий, основной составляющей нормофлоры вагинального биотопа, возможно, позволит ближе подойти к пониманию механизмов развития оппортунистических вагинальных инфекций, установить корреляцию между видовым составом этих микроорганизмов и инфекционной патологией влагалища [1, 2, 4, 19, 22].

У здоровых женщин доминирующими видами микробиоты влагалища являются лактобактерии, преобладающее количество которых, по мнению большинства исследователей, определяет высокий уровень противомикробной защиты [2, 9, 11, 12]. В последние годы наблюдается снижение частоты воспалительных заболеваний урогенитального тракта женщин, вызванных абсолютными патогенами, в то время как частота оппортунистических инфекций этой локализации неуклонно растет [5, 15, 17]. Нарушение состава микробиоты влагалища возникает вследствие неблагоприятных внешних воздействий, при подавлении локального и общего иммунитета, при ряде инфекционных и соматических заболеваний, широкого использования антибактериальных и контрацептивных препаратов [5, 6, 13]. Нарушения вагинальной микрофлоры во время беременности провоцируют восходящее инфицирование плодного яйца, задержку роста плода, преждевременные роды или их сочетания. Причиной этого может быть вытеснение лактобактерий из микробиоты влагалища и доминирование условно-патогенной микрофлоры, увеличение общего количества бактерий и местная лейкоцитарная реакция [12, 15, 21]. Поэтому необходимо пристальное изучение состава микробиоты влагалища.

Лактобактерии (лактобациллы) являются превалирующими видами нормальной микрофлоры вульвы и влагалища (106–108 КОЕ/мл отделяемого). Грамположительные микроаэрофильные или анаэробные неспорообразующие бактерии, чаще длинные «палочки» правильной формы, иногда кокковидные, располагаются в коротких цепочках или поодиночке. Лактобактерии морфологически очень изменчивы и могут иметь разную морфологию в нативных вагинальных мазках и в мазках из чистой культуры. Более того, один и тот же вид лактобактерий различен морфологически в зависимости от питательной среды и условий культивирования. Общепризнанно, что главные функции лактобактерий во влагалище — поддерживать кислую среду и подавлять рост условно- патогенных микроорганизмов.

Полезные функции лактобактерий обусловлены продукцией молочной кислоты, уксусной кислоты и перекиси водорода, повышающих кислотность среды, а также веществ с антибиотической активностью, подавляющих рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Несмотря на то что лактобактерии считаются «полезной» флорой влагалища, их обильный рост во влагалище способен вызвать патологическое состояние (цитолитический вагиноз, лактобациллез), также описаны единичные случаи сальпингита, хронического цервицита и даже перитонита и сепсиса, вызванных лактобактериями [20, 23, 25].

Видовая идентификация лактобактерий долгое время была трудновыполнимой задачей из-за невозможности преодоления методических трудностей при изучении их биологических свойств. Более века морфологические свойства лактобактерий оставались единственным критерием их родовой идентификации. Учитывая морфологическое разнообразие этих бактерий, а также то обстоятельство, что во влагалище кроме лактобактерий могут присутствовать и другие грамположительные палочки (коринебактерии, актиномицеты, пропионибактерии, клостридии и др.), можно утвержд...

Припутневич Т.В., Мелкумян А.Р., Анкирская А.С., Трофимов Д.Ю., Муравьева В.В., Завьялова М.Г.
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.