Исследование очагов эндометриоза различной локализации методом прямой масс-спектрометрии

Цель исследования. Создание подхода для анализа различий молекулярного состава эутопического и эктопического эндометрия различной локализации с использованием прямой масс-спектрометрии.
Материал и методы. В исследование по типу «случай-контроль» были включены 30 пациенток с эндометриоидными кистами яичников и перитонеальным эндометриозом (III–IV степень распространения эндометриоза согласно классификации Американского общества фертильности). Диагноз наружный генитальный эндометриоз был верифицирован на этапе клинико-инструментального обследования, включая лечебно-диагностическую лапароскопию, и окончательно подтвержден гистологически. У всех больных производился забор эндометрия во время гистероскопии. Каждый образец ткани был разделен на две части: для патоморфологического исследования и для прямой масс-спектрометрии (на основе методики EESI – жидкостной экстракции низкомолекулярных веществ из ткани с одновременной ионизацией). Были получены характерные масс-спектры липидов ткани высокого и низкого разрешения.
Результаты. В эктопическом эндометрии в отличие от эутопического уровень липидов 5 различных классов оказался достоверно различным: фосфатидилхолины (PC 32:1, PC O-36:3, PC 38:7, PC 38:6, PC 40:8, PC 40:7, PC 40:6, PC O-42:1), фосфоэтаноламин (PE O-20:0), сфингомиелин (SM 34:1), диглицерид (DG 44:9) и триглицериды (TG 41:2, TG 49:4, TG 52:3). Фосфатидилхолины и сфингомиелин могут быть предложены в качестве возможных биомаркеров эндометриоза, поскольку эти липиды тесно связаны с подавлением апоптоза, окислительным стрессом и малигнизацией клеток.
Заключение. Липидомный анализ эндометриоидных тканей позволяет выявлять новые молекулярные процессы, вызывающие усиленный рост клеток, характерный для агрессивной формы эндометриоза. В результате валидации могут быть предложены не только новые диагностические подходы, но и возможные терапевтические мишени и новые способы лечения, нацеленные на патофизиологические механизмы.

Наружный генитальный эндометриоз (НГЭ) занимает ведущее место в структуре гинекологической патологии [1]. По данным Всемирного исследовательского фонда эндометриоза (WERF), каждая десятая женщина репродуктивного возраста в мире страдает эндометриозом (около 176 млн женщин в возрасте от 17 до 49 лет). В последнее время отмечается неуклонный рост частоты данной патологии [1].

Эндометриоз – патологическое разрастание ткани, по структурным и функциональным свойствам подобной эндометрию, за пределами слизистой оболочки матки, характеризующееся рецидивирующим течением [2]. В соответствии с данными современной литературы, этиология и патогенез эндометриоза до сих пор остаются не изученными. Эндометриоз относится к гиперпластическим процессам, в основе которых лежит повышенная способность клеток к делению и устойчивость к апоптозу [3]. В соответствии с данными Vinatier [4], в патогенез эндометриоза вовлечены следующие молекулярные процессы: рефлюкс клеток эндометрия [4], их адгезия [5], протеолиз [6], усиленная пролиферация [3], ангиогенез [7] и фиброгенез [8]. В норме каждый из этих механизмов контролируется защитными системами клеток и органов, однако у больных эндометризом этого не происходит [4]. В частности, авторами Watanabe [5] и Gebel [6] было продемонстрировано угнетение апоптоза в клетках эутопического эндометрия пациенток с эндометриозом по сравнению с контрольной группой, а также тенденция к снижению апоптоза с возрастанием стадии патологического процесса. Более того, по мнению ряда авторов [3, 7], устойчивость эндометриальных клеток к апоптозу признается пусковым механизмом в развитии заболевания. В стимуляции апоптоза в позднюю секреторную и менструальную фазы цикла принимают участие белки Fas/FasL [6–8] и фактор некроза опухоли (TNF)-α [9]. В пролиферативную фазу менструального цикла активация белка Bcl-2 [5], эстрогеновых и прогестероновых рецепторов [9], наоборот, препятствует передаче апоптических сигналов и запуску запрограммированной гибели клеток.

В развитии дисбаланса между апоптозом и клеточной пролиферацией могут участвовать липиды [10]. Так, нарушение сигнальной функции таких липидов, как фосфотидилхолины и сфингомиелины, может рассматриваться как важнейшее событие, приводящее к угнетению апоптоза, генетическим дефектам, гиперпластическим процессам (вплоть до развития злокачественных новообразований) [10, 11]. Поэтому изучение роли компонентов липидов в регуляции клеточного деления при эндометриозе является актуальным и в дальнейшем может служить основой для поиска диагностических маркеров и новых методов терапии.

На данный момент было предложено более 100 потенциальных маркеров эндометриоза, однако ни один из них не показал достаточной диагностической значимости [12]. До сих пор поиск маркеров развития/агрессивности эндометриоза ограничивался таргетным изучением определенных метаболитов, в частности метаболитов арахидоновой кислоты и стероидов [12]. Исследования всего набора липидов в тканях и плазме крови при эндометриозе очень ограничены. Скрининг целого класса веществ, в том числе липидов, является основной прерогативой метода масс-спектрометрии [13].

Цель данной работы: оценка перспективности применения метода прямой масс-спектрометрии для сравнительного анализа молекулярного состава тканей эктопического и эутопического эндометрия. Изменение липидома тканей эндометрия при эндометриозе отражает патологические процессы неконтролируемой и атипичной инвазии и инфильтративной пролиферации эндометрия в эктопических участках. Предполагается также целесообразным определение концентрации возможных липидных маркеров в крови с целью разработки неинвазивного теста для диагностики эндометриоза и прогноза степени агрессивности патологического процесса.

Материал и методы исследования

Клиническая характеристика больных

В данное исследование по типу «случай-контроль» включены 30 пациенток с эндометриоидными кистами яичников и перитонеальным эндометриозом, проходивших лечение на базе ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова Минздрава России. Протокол исследования был одобрен Этическим комитетом. От каждого участника исследования было получено письменное информированное согласие.

Диагноз НГЭ был верифицирован на этапе клинико-инструментального обследования, включая лечебно-диагностическую лапароскопию, и окончательно подтвержден гистологически. Всем пациенткам была произведена лапароскопия, в ходе которой устанавливались степень распространения НГЭ, локализация и размер эндометриоидных гетеротопий, а также выраженность спаечного процесса. На момент проведения оперативного вмешательства 50% женщин находились в пролиферативной и 50% женщин – в секреторной фазах менструального цикла. В данном исследовании использовалась классификация Американского общества фертильности (1979), согласно которой, все пациентки имели III–IV стадию НГЭ.

Борисова А.В., Стародубцева Н.Л., Козаченко А.В., Чаговец В.В., Салимова Д.Ф., Кононихин А.С., Коган Е.А., Адамян Л.В., Франкевич В.Е., Сухих Г.Т.