Изменение концентрации внеклеточной ДНК во время беременности

Цель исследования. Определить концентрацию внеклеточной ДНК (оДНК) и ее фракций в плазме крови в динамике беременности с учетом возможного влияния индекса массы тела (ИМТ) женщины, анемии беременных, массы плода и плаценты. Материал и методы. Определена концентрация оДНК, ДНК плода (пДНК) и ДНК матери (мДНК) в крови женщины в промежутках 11–14, 24–26 и 30–32 недели. Уровень оДНК был оценен количественной полимеразной цепной реакцией путем определения концентрации гена RASSF1A, уровень пДНК – путем определения гиперметилированной части RASSF1A гена. Результаты. Концентрация внеклеточной оДНК и мДНК существенно не меняется в течение беременности. пДНК относительно стабильна до середины срока гестации (в среднем 1265,11±577,51 ГЕ/мл в 11–14 недель и 1309,09±561,01 ГЕ/мл в 24–26 недель) и значительно возрастает во второй половине беременности. Уровень внеклеточной ДНК и ее фракций не меняется в зависимости от ИМТ женщины, массы плода и плаценты. При анемии концентрация мДНК составила в среднем 12362,33±5533,22 ГЕ/мл и была достоверно меньше, что у здоровых беременных (в среднем 15268,49±5973,43) (р<0,05). Заключение. Полученные данные подтверждают изменение концентрации внеклеточной ДНК в динамике беременности, что необходимо учитывать при прогнозировании ее осложнений. Для исключения влияния других материнских и плодовых факторов необходимо продолжение исследований.

Последние годы ознаменовались разработкой и внедрением в клиническую практику методов неинвазивного пренатального тестирования анеуплоидий на основе анализа внеклеточной ДНК плода (пДНК) [1]. В настоящее время определение пДНК активно используется в неинвазивной пренатальной диагностике анеуплоидий плода, определении RhD принадлежности и заболеваний, сцепленных с полом плода [2].

Выделяется пДНК из общей внеклеточной ДНК (оДНК), в состав которой входит также ДНК матери (мДНК). Основным источником пДНК в материнской крови являются клетки трофобласта, подвергающиеся апоптозу [3, 4]. Под влиянием гипоксии и окислительного стресса значительно усиливается апоптоз клеток трофобласта, что, как известно, является важным патогенетическим звеном в развитии осложнений беременности, таких как преэклампсия и задержка роста плода [5]. Тем самым, определение концентрации внеклеточной пДНК в крови женщины может также служить маркером патофизиологических изменений в плаценте и предиктором осложнений беременности, ассоциированных с плацентарной дисфункцией. Клиническое применение данного маркера с целью прогнозирования осложнений беременности не может быть реализовано без учета потенциальных факторов, которые могут оказывать влияние на концентрацию внеклеточной пДНК в различные сроки беременности. Так, имеются данные о влиянии возраста женщины, индекса массы тела (ИМТ), курения, массы плода и плаценты. Некоторые исследователи, такие как M. Haghiac и соавт. (2012), продемонстрировали, что концентрация оДНК повышена у женщин с ожирением, в отличие от пДНК [6]. Напротив, O. Lapaire и соавт. (2009) не нашли корреляции концентрации, как оДНК с увеличением ИМТ женщины, так и пДНК [7]. M. Smid и соавт. (2003) обнаружили существенную положительную корреляцию между увеличением массы плаценты и концентрацией пДНК, в то время как другие исследователи аналогичную связь не обнаружили [7, 8]. Кроме того, представляет интерес определение содержания внеклеточной ДНК у женщин с измененным клеточным составом крови вследствие анемии. В литературе имеется только одно исследование, в котором изучали концентрацию пДНК при анемии беременных, однако нет сведений об оДНК и мДНК [9]. Таким образом, существуют противоречивые данные о влиянии материнских и плодовых факторов на уровни внеклеточной мДНК и пДНК в крови матери.

В связи с этим целью данной работы стало определение концентрации внеклеточной ДНК и ее фракций в динамике беременности с учетом возможного влияния ИМТ, анемии беременных, массы плода и плаценты.

Материал и методы исследования

Исследование проводили в ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России с 15 января 2016 г. по 15 апреля 2017 г.

В исследование включены 24 женщины с одноплодной беременностью. Все женщины были соматически здоровы и имели неотягощенный акушерско-гинекологический анамнез. Критериями исключения из исследования послужили такие осложнения беременности, как преэклампсия, преждевременные роды, задержка роста плода, гестационная артериальная гипертензия, гестационный сахарный диабет, хромосомные аномалии и пороки развития плода, аномалии прикрепления и расположения плаценты, острая фаза и обострение хронических инфекционных заболеваний. У 13 женщин беременность протекала без осложнений, у 11 женщин была выявлена анемия легкой степени во II (n=2) и III (n=11) триместрах беременности. На проведение исследования получено разрешение комиссии по этике ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Перед забором биологического материала все женщины подписали информированное согласие на участие в клиническом исследовании.

Забор венозной крови для определения внеклеточной ДНК производили трижды: в промежутках 11–14, 24–26 и 30–32 недели. Было собрано по пять мл периферической крови в вакуумные пробирки, содержащие ЭДТА, и обработано в течение часа после забора. Плазма крови была выделена центр фугиров...

Карапетян А.О., Красный А.М., Садекова А.А., Хлестова Г.В., Балашов И.С., Баев О.Р.