Изучение активности молочной кислоты in vitro и ее значение для клинической практики в лечении инфекций влагалища

Цель исследования. Изучить in vitro морфологические и функциональные изменения в клетках микроорганизмов в присутствии молочной кислоты, изучить влияние молочной кислоты на развитие культур условно-патогенных бактерий (S. aureus, E. colli) и грибов C. albicans и их способность формировать биопленки в сравнении с пробиотиками, а также исследовать способность лактобактерий, входящих в состав пробиотиков, к формированию биопленок (как в присутствии молочной кислоты, так и без нее).
Материал и методы. Объектами исследования были 2 тестовые культуры музейных штаммов лактобактерий; 5 штаммов лактобактерий, входящих в состав пробиотиков экофемин и лактожиналь; 2 штамма музейных условно-патогенных бактерий и 1 музейный штамм C. albicans. Использовались различные методы, включая посев на среду с препаратом; O´Toole для изучения биопленкообразования; определение количества микроорганизмов в составе биопленок по Коху; трансмиссионная и сканирующая электронная микроскопия.
Результаты исследования. Молочная кислота (активное вещество препарата фемилекс) обладает противомикробным действием, изменяя морфологические свойства и функциональное состояние клеток условно-патогенных бактерий и грибов; подавляет развитие культур: E.coli – в 4 раза и S. aureus – в 2,6 раза и микроскопических грибов C. albicans – в 2,4 раза по сравнению с контролем, а также препятствует формированию ими биопленок. Молочная кислота проявляет в среднем 2 раза большую антимикробную активность по сравнению с пробиотиками в отношении условно-патогенных бактерий и грибов, при этом стимулирует рост лактобактерий и их способность к биопленкообразованию. Обнаружено сочетанное действие молочной кислоты и лактобактерий в отношении условно-патогенной микрофлоры.
Заключение. Настоящая работа – это первое фундаментальное исследование молочной кислоты в качестве основного фактора в поддержании локального биологического гомеостаза влагалища.

О значении кислой реакции влагалища для защиты от внешних патогенных микроорганизмов и развития тяжелых инфекций матки известно с конца ХIХ века. Еще в 1888 г. К.Ф. Славянский указывал, что «влагалищный секрет» имеет кислую реакцию [1], а в 1893 г. известный российский акушер-гинеколог В.В. Строганов писал: «…кислая реакция благоприятствует развитию нормальной флоры в вагине…» [2]. А. Додерлейн полагал, что физические, химические, половые раздражения, обусловливающие усиленную транссудацию, уменьшают нормальную кислую реакцию влагалища и способствуют таким образом образованию патологического состояния [3]. Многие авторы того периода считали, что патогенные микроорганизмы, попавшие во влагалище, погибают в нем через несколько дней (самоочищение влагалища). Это бактерицидное свойство А. Додерлейн приписывал молочной кислоте, продуцируемой бактериями, нормально находящимися в вагине. Исходя из приведенных наблюдений, что кислая реакция благоприятствует развитию нормальной флоры во влагалище, он применил молочную кислоту в виде спринцеваний 1% раствором при лечении беременных с патологическими выделениями. Результат оказался лучшим, чем при всех других методах лечения. Эта работа А. Додерляйна чрезвычайно интересна и поучительна.

Уже в наши дни доказана важная роль молочной кислоты (МК) в обеспечении защиты влагалища от проникновения патогенных микроорганизмов путем прямого противомикробного действия и опосредованно через иммунокоррегирующее влияние на компетентные клеточные и тканевые структуры влагалищного эпителия [4]. Также недавними исследованиями была продемонстрирована высокая клиническая эффективность различных схем применения молочной кислоты как в режимах монотерапии, так и при его комбинированном использовании с гексиконом или метронидазолом [5, 6] в сравнении с традиционным 2-этапным методом метронидазол плюс ацилакт.

В то же время остаются малоизученными некоторые механизмы антибактериальной активности МК. Вот почему в качестве цели настоящего исследования мы определили изучение in vitro активности 100 мг молочной кислоты, являющейся активным веществом в составе препарата фемилекс (АО Нижфарм).

Материал и методы исследования

В течение 2016 г. все лабораторные исследования проводились на кафедре физиологии медицинского факультета СПбГМУ. Объектами исследования были: препарат фемилекс (АО Нижфарм), суппозитории вагинальные 100 мг. В качестве бактерий антагонистов использовали 2 музейных штамма лактобактерий: Lactobacillus plantarum 8RA-3; Lactobacillus rhamnosus GG АТСС 53103. 2. В качестве готовых пробиотиков, рекомендованных для восстановления микробиоты влагалища, использовали: экофемин флораваг (микробная ассоциация 3 штаммов лактобактерий: L. crispatus, L. brevis и L. acidophilus) в капсулах (Фарма-Винчи, Бельгия); лактожиналь (содержит L. casei rhamnosus Doderleini, производство Лабораратория Лиоцентр САС, Франция). В качестве тестовых культур использовали: Escherichia coli штамм К2 с геном биопленкообразования hly А, В, С; Staphylococcus aureus штамм 93 с геном биопленкообразования ica, и C. albicans.

В данном исследовании при определении минимальной ингибирующей концентрации (МИК) молочной кислоты использовали метод предельных разведений и метод нанесения капель. Также были использованы посев на среду с препаратом; метод O´Toole для изучения биопленкообразования; определение интенсивности биопленкообразования на поверхности полимерных пластиков; микроскопический метод; определение количества микроорганизмов в составе биопленок по Коху; метод двухслойного агара для определения антагонистической активности лактобактерий в присутствии МК по отношению к тестовым культурам; электронная микроскопия, включая трансмиссионную и сканирующую электронную микроскопию с применением позитивного окрашивания и ультратонких срезов.

Результаты исследования

Для изучения МИК МК был приготовлен ряд десятикратных ее разведений в жидкой питательной среде от 10 до 1000 раз. Результаты МИК МК оценивали визуально и при помощи высевов на плотную питательную среду. Полученные данные свидетельствуют о том, что все исследованные лактобактерии проявляют повышенную устойчивость к действию в...

Кира Е.Ф., Рыбальченко О.В., Орлова О.Г., Коршакова Н.Ю.