Изучение противовирусной активности субстанции бензидамина гидрохлорида и ее готовой лекарственной формы Тантум® Верде в отношении вируса простого герпеса 1-го и 2-го типов

Обоснование. Вирусы простого герпеса (ВПГ) 1-го и 2-го типов широко распространены в человеческой популяции и способны вызывать ряд состояний в организме человека, варьирующихся от бессимптомных до тяжелых генерализованных форм заболевания.
Цель исследования: изучение противовирусной активности бензидамина гидрохлорида (БГ) на экспериментальной модели герпесвирусной инфекции in vitro.
Методы. Проведено исследование противовирусной активности БГ на модели герпесвирусной инфекции, обусловленной ВПГ 1-го и 2-го типов, в культуре клеток VERO-В с использованием вирусологического и статистического методов исследования.
Результаты. Установлено, что использование БГ по лечебной схеме (через час после адсорбции вируса) приводило к снижению инфекционной активности ВПГ-1 на 1,5–3,6 lg ТЦД50, инфекционной активности ВПГ-2 на 1,5–3,06 lg ТЦД50 по сравнению с активностью тест-вирусов в контроле. Максимальный статистически достоверный ингибиторный эффект по отношению к ВПГ-1 и ВПГ-2 был выявлен при использовании препарата в концентрации 62,5 мкг/мл; коэффициент ингибиции по отношению к ВПГ-1 и ВПГ-2 составил 60 и 54,45% соответственно.
Заключение. В результате проведенного исследования установлено, что БГ обладает терапевтической активностью в отношении герпесвирусной инфекции, обусловленной широко распространенными патогенами – ВПГ-1 и ВПГ-2 – in vitro, во время раннего периода репликации вируса. Противовирусная активность препарата дозозависима.

Введение

Вирусы простого герпеса (ВПГ) 1-го и 2-го типов широко распространены в человеческой популяции и способны вызывать ряд состояний в организме человека, варьирующихся от бессимптомных до тяжелых генерализованных форм заболевания [1, 2]. Причиной такого клинического варьирования служит, с одной стороны, генетическая предрасположенность к инфицированию ВПГ и состояние иммунной системы человека, с другой – свойства вируса: способность к инфицированию сенсорных ганглиев вегетативной нервной системы и пожизненной персистенции в организме человека, а также тропизм к эпителиальным и нервным клеткам, обусловливающий полиморфизм клинических проявлений заболевания. К наиболее распространенным формам рецидивирующей ВПГ-инфекции относятся поражения кожи и слизистых оболочек (herpes simplex stomatitis, gingivostomatitis, herpes labialis, herpes genitalis и др.), встречающиеся у людей в любом возрасте – от младенцев до пожилых людей, и способные вызывать значительную боль, дисфункцию, дискомфорт [1]. Рецидивирующие поражения ВПГ-этиологии чаще встречаются у иммунокомпрометированных пациентов с прогрессирующим СПИДом, реципиентов органов и тканей, онкологических больных, получающих химиотерапию или иммуносупрессивные препараты [2]. У системно здоровых людей и иммунокомпрометированных пациентов ВПГ могут имитировать другие состояния слизистой оболочки полости рта и гениталий, вызывая у врачей трудности в диагностике этих состояний, а также приводить в синергизме с бактериями, грибами к развитию других заболеваний, являясь ко-фактором или триггером их тяжелого течения [3]. Так, рядом авторов установлено, что ВПГ и Porphyromonas gingivalis способны вызывать развитие и прогрессирование заболеваний пародонта и периимплантата. Предполагают, что между периодонтальными герпесвирусами и пародонтопатическими бактериями происходит двустороннее взаимодействие, при котором герпесвирусы способствуют росту бактерий, а бактериальные факторы – реактивации латентных герпесвирусов. Следует отметить, что герпесвирусная инфекция (ГВИ) оролабиальных и генитальной областей является также наиболее стигматизирующей из всех кожных заболеваний [4].

Для лечения ГВИ применяют медикаментозные средства системного и местного действий: этиотропные (ацикловир и его аналоги), иммунотропные препараты (интерфероны, индукторы интерфорона, иммуноглобулины); средства патогенетической и симптоматической терапии: пероральные анальгетики (аспирин, парацетамол, ибупрофен), антигистаминные препараты, витамины, адаптогены, пробиотики, спреи и растворы для полоскания горла или спринцевания (хлоргексидин, мирамистин, бензидамин), пастилки (содержащие бензокаин, гексилрезорцин, флурбипрофен), а также немедикаментозные вмешательства. Несмотря на широкий арсенал лекарственных средств, терапия ГВИ вызывает значительные трудности и не всегда приводит к ожидаемому результату [4]. Одной из причин неэффективности терапии служит формирование штаммов ВПГ с измененными свойствами, резистентных к традиционным методам лечения [1, 2]. В связи с этим активно проводится поиск новых препаратов, обладающих противовирусной активностью и иным механизмом действия, отличным от общепринятых средств, в т.ч. и среди ранее применяемых лекарственных средств по другим показаниям. Одним из таких средств является бензидамина гидлохлорид (БГ).

БГ (Benzidamine hydrochloride, C19H23N3O) относится к нестероидным противовоспалительным средствам – к группе индазолов, имеет широкий спектр применения при различных воспалительных процессах в ротовой полости, влагалище, в т.ч. и инфекционной этиологии [5]. При местном применении БГ хорошо абсорбируется через слизистые оболочки и проникает в воспаленные ткани, оказывая противовоспалительное, обезболивающее, местное анестезирующее, а также антисептическое действия [6]. Об изучении антигерпетических свойств БГ в настоящее время известно мало.

Цель настоящей работы состояла в оценке противовирусной активности БГ в отношении ГВИ, обусловленной ВПГ-1 и ВПГ-2 in vitro.

Методы

Культура клеток. Исследование проводили на перевиваемой культуре клеток почек африканских зеленых мартышек (VERO-В), полученной из коллекции культур тканей ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России. В качестве ростовой среды и среды поддержки использовали ИГЛА («ПанЭко», Россия), содержащую 10 и 2% инактивированной нагреванием эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС, «ПанЭко», Россия) соответственно, а также 2 мМ L-глутамина (Sigma, USA) и антибиотики (100 ЕД/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 40 мкг/мл гентамицина («ПанЭко»). Клеточную культуру в концентрации ~1,0×105 клеток/мл рассевали в 96-луночные пластиковые культуральные планшеты (Сostar, GB) за 24 часа до эксперимента, чтобы к его началу плотность клеток составляла приблизительно 80–90%-ного состояния монослоя и культивировали в термостате при температуре +37±0,5°С во влажной атмосфере, содержащей 5% СO2.

Вирусы. В исследовании использовали тест-вирусы: ВПГ-1, штамм «Кл», ВП...

Л.М. Алимбарова, И.В. Кукес