Акушерство и Гинекология №5 / 2023

Кластерный анализ протеома плазмы крови у беременных с преэклампсией

31 мая 2023

1) ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), Институт клинической медицины имени Н.В. Склифосовского, кафедра акушерства и гинекологии №1, Москва, Россия;
2) Государственный научный центр ФГБУН «Институт биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук», группа масс-спектрометрии, Москва, Россия

Цель: Изучение молекулярно-биологических особенностей развития преэклампсии на основании определения протеомного профиля плазмы крови беременных с проведением кластерного анализа белков. Материалы и методы: Обследованы 27 беременных женщин: 15 здоровых пациенток с физиологическим течением беременности (контрольная группа, сроки гестации в среднем 39,5 (39,5; 40,0) недели) и 12 пациенток с тяжелой преэклампсией (основная группа, сроки гестации в среднем 32,1 (29; 35) недели). Проведены общеклинические, лабораторные и инструментальные методы исследования, а также определен протеомный профиль плазмы крови с использованием хромато-масс-спектрометрии сверхвысокого разрешения. Кластерный анализ белков проводился с использованием онлайн-программы DAVID.
Результаты: При анализе протеома плазмы крови идентифицировано около 1500 белков в каждом образце. Дифференциальные отличия обнаружены в отношении 317 белков у беременных с преэклампсией, изменения 113 из них имели статистическую значимость (70 белков с повышенной экспрессией, 43 белка – со сниженной). Кластерный анализ дифференциально отличающихся при преэклампсии белков плазмы позволил выделить 9 наиболее крупных кластеров, указывающих на значимую роль нарушений в системах комплемента и коагуляции, реакций воспаления и иммунного ответа, метаболических нарушений, а также изменений клеточных процессов (в частности, функций эндоплазматического ретикулума) в патогенезе преэклампсии. Данные доступны через ProteomeXchange с идентификатором PXD036175.
Заключение: Протеомный профиль материнской крови при преэклампсии значимо отличается от протеома крови при неосложненном течении беременности, характеризуется вариабельностью изменений, отражающих множественные и разнонаправленные нарушения биологических процессов и молекулярных функций.

Вклад авторов: Сидорова И.С., Никитина Н.А. – концепция и дизайн исследования; Зиганшин Р.Х., Кирьянова М.А., Агеев М.Б. – сбор и обработка материала; Зиганшин Р.Х. – определение протеома плазмы крови с использованием хромато‑масс‑спектрометрии; Никитина Н.А., Зиганшин Р.Х. – написание текста; Сидорова И.С. – редактирование. Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии возможных конфликтов интересов.
Финансирование: Работа выполнена без дополнительного финансирования.
Одобрение Этического комитета: Исследование одобрено локальным Этическим комитетом ФГАОУ ВО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» МЗ РФ (Сеченовский университет) (выписка из протокола заседания ЛЭК № 22‑21 от 09.12.2021).
Согласие пациентов на публикацию: Все пациентки подписали информированное согласие на участие в исследовании. Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Никитина Н.А., Сидорова И.С., Зиганшин Р.Х., Кирьянова М.А., Агеев М.Б. Кластерный анализ протеома плазмы крови у беременных с преэклампсией.
Акушерство и гинекология. 2023; 5: 37-49
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2023.15

Результаты научных исследований последних десятилетий значительно улучшили наше понимание механизмов патогенеза преэклампсии; однако до сих пор нет четких представлений об этиологии данного осложнения беременности и основных триггерных факторах его развития. До настоящего времени не удалось объяснить такие особенности преэклампсии, как появление клинических симптомов только во второй половине беременности (в перинатальном периоде – после 22 недель гестации, когда возможно выживание плода вне матки), ее развитие только у человека [1]. По‑прежнему отсутствует эффективная превентивная стратегия, а единственным методом лечения остается родоразрешение.

В связи с многогранностью и широкой вариабельностью преэклампсии в плане материнской генетической предрасположенности, ассоциации с рядом заболеваний (сахарный диабет, хроническая артериальная гипертензия, метаболический синдром и др.), разнообразием клинических проявлений, идеальным инструментом в изучении ее молекулярных механизмов являются омиксные технологии, которые позволяют получить и обработать колоссальный объем данных («Big Data») [2].

Омиксные технологии включают в себя высокопроизводительный качественный и количественный анализ генов (геномика), РНК (транскриптомика), белков (протеомика) и метаболитов (метаболомика) с использованием таких методов, как жидкостная хроматография в сочетании с масс‑спектроскопией (LC–MS), секвенирование нового поколения (NGS) и массивы чипов [3].

В последние десятилетия значительно усовершенствованы методы протеомики для идентификации и количественной оценки белков в различных биологических жидкостях и тканях, а также анализа их посттрансляционных модификаций. Современные платформы LC–MS позволяют проводить анализ тысяч белков всего за 1–2 ч [3]. Источником биологического материала могут быть сыворотка/плазма крови, моча, плацента, спинномозговая жидкость и другие [4].

Количественный протеомный анализ плазмы или сыворотки крови с целью поиска биомаркеров, ассоциированных с преэклампсией, уже давно является одной из важных задач омиксных исследований [5]. С одной стороны, кровь – это легко доступный источник биологического материала, с другой – наиболее репрезентативная среда, поскольку содержит белки, секретируемые всеми тканями, включая плацентарную и децидуальную. В то же время протеом плазмы/сыворотки крови отличается сложностью и большим динамическим диапазоном. 99% всех белков плазмы составляют 20 наиболее распространенных белков (альбумин, антитела, аполипопротеины, белки комплемента и другие), которые затрудняют выявление и количественное определение менее распространенных белков [6].

Исследования показали, что протеомный профиль материнской крови может отражать процессы роста и развития плода, состояние иммунной системы, функционирование систем обеспечения гестационного процесса, прогнозировать осложнения (в частности, преэклампсию) и исходы беременности [7–9].

Несмотря на то что протеом материнской крови практически не изучен в динамике развития даже здоровой беременности, сравнительный протеомный анализ плазмы крови беременных в норме и при преэклампсии может оказаться полезным для выявления белковых факторов и биологических процессов, изменение которых сопряжено с осложненным течением беременности и нарушением развития плода [10].

Кроме того, в России практически отсутствуют исследования, посвященные анализу протеома биологических жидкостей и тканей у беременных в целом и при преэклампсии в частности. В отечественной литературе имеются единичные публикации по данной проблеме [11, 12].

В связи с вышеизложенным, целью настоящего исследования явилось изучение молекулярно‑биологических особенностей развития преэклампсии на основании сравнительного протеомного анализа плазмы крови здоровых беременных и беременных с преэклампсией с использованием масс‑спектрометрии сверхвысокого разрешения и проведением кластерного анализа дифференциально отличающихся при преэклампсии белков.

Материалы и методы

Обследованы 27 беременных женщин: 15 здоровых пациенток с физиологическим течением беременности (контрольная группа, сроки гестации в среднем 39,5 (39,5; 40,0) недели) и 12 пациенток с тяжелой преэклампсией (основная группа, сроки гестации в среднем 32,1 (29; 35) недели). Выявление инфекций и воспалительных процессов любой локализации, а также пороков развития плода, хромосомных и генетических аномалий служило критерием исключения пациенток из исследования. Всем женщинам основной и контрольной групп проведены общеклинические, лабораторные и инструментальные методы исследования (ультразвуковое исследование плода и плаценты, допплерометрия, кардиотокография), а также у них определен протеомный профиль плазмы крови с использованием хромато‑масс‑спектрометрии сверхвысокого разрешения.

Забор крови для оценки протеома производился при поступлении пациенток в родильный дом, до начала терапевтических мероприятий, в объеме 3–4 мл при помощи вакуумной пробирки с ЭДТА. Далее кровь цен...

Никитина Н.А., Сидорова И.С., Зиганшин Р.Х., Кирьянова М.А., Агеев М.Б.
Статья платная, чтобы прочесть ее полностью, вам необходимо произвести покупку
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.