Клинические и молекулярно-генетические аспекты диагностики остроконечных кондилом вульвы

Цель работы. Оптимизация диагностики остроконечных кондилом (ОК) вульвы путем расширения возможностей применения полимеразной цепной реакции (ПЦР) в клинической практике.
Материалы и методы. Обследованы 90 пациенток с ОК вульвы. Всем обследуемым женщинам проводили вульвоскопию c уксусной пробой, высокочастотное ультразвуковое исследование (УЗИ) кожи и слизистых вульвы, типирование вируса папилломы человека (ВПЧ) в образцах эпителия из цервикального канала (ЦК), соскобов с ОК, биоптатов ОК. Биопсию проводили при ОК диаметром более 3 мм (n=90).
Результат. При анализе выявления типов ВПЧ выяснилось, что в биоптатах ОК ВПЧ 6 и 44 типов встречались статистически значимо чаще, чем в ЦК и соскобах с ОК, ВПЧ 11 типа в соскобах с ОК встречался статистически значимо чаще, чем в ЦК и в биоптатах. В биоптатах ОК также были выявлены высокоонкогенные типы ВПЧ, при этом чаще вирусная нагрузка была статистически значимо выше в образцах эпителия ЦК. Значение вирусной нагрузки в соскобах с ОК на слизистой вульвы оказалось статистически значимо выше по сравнению с ОК на коже вульвы.
Заключение. ОК на слизистой вульвы, даже при малых размерах, являются резервуаром папилломавирусной инфекции и обладают более выраженным вирусным потенциалом по сравнению с ОК, локализованными на коже, поэтому, безусловно, нуждаются в своевременном и эффективном лечении.

Заболевания, ассоциированные с вирусом папилломы человека (ВПЧ), являются глобальной медико-социальной проблемой, решение которой необходимо для усовершенствования диагностических и лечебно-профилактических подходов.

В Российской Федерации (РФ) официальная регистрация ВПЧ в виде манифестных проявлений – остроконечных кондилом (ОК) – в соответствии с приказом Минздрава РФ № 286 от 07.12.1993 г. начата с 1993 г. Систематизированный анализ показал, что общая годовая заболеваемость ОК в мире (включая новые случаи и рецидивирующие) варьирует от 160 до 289 случаев на 100 тыс., со средним значением 194,5 на 100 тыс. женского населения; средний ежегодный уровень заболеваемости новыми ОК составил 120,5 случая на 100 тыс. женщин. Пик заболеваемости приходится на 24 года [1, 2]. В РФ в 2014 г. аногенитальные бородавки диагностированы с частотой 21,8 на 100 тыс. населения, а в Москве – 33,6 на 100 тыс. [3]. За период 2004–2014 гг. в общей структуре инфекций, передающихся половым путем, в РФ заболеваемость ОК увеличилась с 6 до 11% [4].

Этиологическим фактором ОК чаще всего являются ВПЧ 6, 11 низкоонкогенных типов, но также могут быть ВПЧ среднего и высокого онкогенного риска – 16, 18, 30–33, 35, 39, 41–45, 51–56, 59 типов [5, 6].

Выделяют латентную, субклиническую и клиническую формы папилломавирусной инфекции (ПВИ). Латентная форма ПВИ не диагностируется ни кольпоскопически, ни цитологически. Диагноз ставят на основании выявления ДНК-вируса с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), Hybrid Capture (гибридизации в растворе).

Субклиническая форма ПВИ не сопровождается клиническими симптомами, может диагностироваться при кольпоскопии и цитологическом исследовании [7].

Одной из клинических форм ПВИ слизистых оболочек и кожи являются ОК, причиной возникновения которых до 100% случаев являются низкоонкогенные ВПЧ 6, 11 типов [8, 9].

ОК представляют собой разрастания соединительной ткани с сосудами, покрытыми плоским эпителием с морфологическими признаками ПВИ, выступают над поверхностью кожи и слизистой, имеют ножку или широкое основание. ОК бывают множественными или единичными. Основание не спаяно с окружающими тканями, подвижно, мягкой или плотной консистенции, цвет на коже белесоватый или коричневый, на слизистых оболочках – от бледно-розового до красноватого. На поверхности возможны признаки ороговения. ОК могут сопровождаться воспалением, нарушением микроциркуляции, отеком [7, 10, 11] и характеризуются высокой частотой рецидивов, которые даже после «успешного» лечения могут достигать 30–40%. Локализуются в основном в местах возможной мацерации: малые половые губы, влагалище, шейка матки, устье уретры, перианальная область [10, 12].

Существуют 3 основных группы лабораторных методов определения ВПЧ: неамплификационные, амплификационные и сигнальные амплификационные. Неамплификационные методы диагностики в настоящее время используются крайне редко. Наиболее распространенным методом выявления ДНК ВПЧ и его типирования является ПЦР, обладающая высокой чувствительностью (позволяет определить от 10 до 100 геномов) [13–16].

ПЦР – качественный анализ содержания ДНК в биологических средах и субстратах. Качественная ПЦР применяется тогда, когда достаточно только выявить наличие фрагментов ДНК, а ПЦР в режиме реального времени – если необходимо получить информацию о вирусной нагрузке, адекватности назначенного лечения или его результативности, о риске обострения заболевания.

Преимуществом метода является то, что при ПЦР амплификации подвергается не вирус, а только ДНК, причем не вся молекула ДНК, а только ее определенный фрагмент, являющийся маркером данного возбудителя. То есть метод ПЦР обладает высочайшей чувствительностью, ведь для выявления ВПЧ достаточно иметь всего лишь фрагменты его ДНК. Поэтому становится возможным обнаружение возбудителей заболеваний даже в тех случаях, когда другими способами их выявление невозможно. Высокая специфичность позволяет определять уникальную последовательность нуклеотидов, характерную только для конкретного возбудителя.

Усовершенствованный метод ПЦР в режиме реального времени значительно повышает точность исследования, наибольшая ценность которого заключается в возможности количественных измерений в широком линейном диапазоне. В настоящее время в развитых странах широко используется метод определения ДНК вируса в материале − Digene-тест. Определение вирусной нагр...

Аполихина И.А., Гасанова Г.Ф., Трофимов Д.М., Донников А.Е.