Клиническое значение исследования матриксных металлопротеиназ и их ингибиторов у больных раком яичников
1 сентября 2012
ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им академика В.И. Кулакова Минздравсоцразвития России, Москва; Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина Российской академии медицинских наук, Россия, Москва
Цель исследования. Используя количественные иммуноферментные тесты, провести сравнительную оценку содержания матриксных металлопротеиназ (ММП)-2, -7 и -9, а также их тканевых ингибиторов (ТИМП)1 и 2 типов в опухолях и сыворотке крови больных раком, доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников и проанализировать взаимосвязь этих показателей с основными клинико-морфологическими особенностями рака яичников.
Материал и методы. Обследованы 84 больные первичными опухолями яичников: 49 – злокачественными, 11 – пограничными и 24 – доброкачественными. В контрольную группу вошли 30 практически здоровых женщин. Из 49 больных злокачественными опухолями яичников у 43 выявлен серозный рак яичников, у 3 – муцинозный и у 3 – эндометриоидный. Среди 24 доброкачественных новообразований яичников в 19 наблюдениях обнаружены серозные опухоли. Содержание исследуемых белков определяли в сыворотке крови и лизатах опухолей с помощью стандартных наборов для иммуноферментного анализа: «Human/Mouse/Rat MMP-2 (total)», «Human MMP-7 (total)», «Human MMP-9 (total)», «Human TIMP-1» и «Human TIMP-2» (Quantikine, R&D Systems, США). Концентрацию исследованных белков в сыворотке крови выражали в нанограммах в 1 мл (нг/мл), в тканях – в нанограммах на 1 мг общего белка (нг/мг белка). Данные обрабатывали с помощью программы «Statistica 7.0». При сравнении показателей и анализе их взаимосвязей использовали непараметрические методы: критерии Манна-Уитни и Kruskel-Wallis, тест корреляции рангов Спирмена (R). Различия и корреляции считали достоверными при p<0,05.
Результаты исследования. Анализ содержания ММП и ТИМП в сыворотке крови показал, что наиболее перспективным маркером для дифференциальной диагностики пограничных, доброкачественных и злокачественных новообразований яичников является ММП-7. Уровень этой ММП повышен относительно контроля только у больных раком яичников. Превышение верхней границы нормы (95% показателей контрольной группы – менее 4,67 нг/мл) отмечено у 38 из 49 первичных больных раком, т.е. чувствительность относительно контроля при 95% специфичности составляет 78%. Чувствительность этого теста относительно доброкачественных и пограничных новообразований составляет соответственно 37,5 и 64%. ММП-7 оказалась самым значимым маркером при анализе взаимосвязи показателей сыворотки крови с клинико-морфологическими особенностями рака яичников. Ее уровень достоверно положительно коррелировал с ключевыми показателями распространенности рака яичников: стадией заболевания в целом, размером первичной опухоли по данным ультразвукового исследования, наличием и характером диссеминации по брюшине и метастазов в большом сальнике, наличием и количеством асцита. Уровень ММП-7 в сыворотке крови коррелировал также и с ее концентрацией в асцитической жидкости (R=0,53; p=0,008). Кроме того, только уровень ММП-7 был положительно ассоциирован с показателями классического сывороточного маркера рака яичников – СА-125 (R=0,32; p=0,003).
Заключение. Иммуноферментное исследование содержания ММП-2, -7, -9 и ТИМП 1 и 2 типов в опухолевой ткани и сыворотке крови больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников показало координированное увеличение тканевой экспрессии и сывороточной концентрации ММП-7 при раке яичников. Противоположная направленность изменений обнаружена для ММП-2. Изменения в показателях содержания ММП-9, ТИМП-1 и ТИМП-2 выражены в меньшей степени. Наиболее значимым серологическим маркером рака яичников следует признать ММП-7.
Трудности ранней диагностики и высокие метастатический и инвазивный потенциалы рака яичников определяют необходимость углубленного изучения механизмов распространения этой опухоли, знание которых могло бы стать основой для создания новых препаратов, целенаправленно подавляющих процессы метастазирования и инвазии. Известно, что одним из основных механизмов инвазии злокачественных опухолей является разрушение окружающей базальной мембраны и внеклеточного матрикса (ВКМ) ассоциированными с опухолью протеиназами, играющими также важную роль в процессах метастазирования и неоангиогенеза [9]. В опухолевой инвазии задействовано несколько классов протеиназ, к важнейшим из которых следует отнести семейство матриксных металлопротеиназ (ММП), названных так за свою способность специфически гидролизовать все основные белки ВКМ, в первую очередь, коллаген [5].
Важнейшими представителями семейства ММП являются желатиназы A и B, специфические коллагеназы коллагена IV типа (ММП-2 и -9), а также матрилизин – ММП-7, имеющий широкую субстратную специфичность и помимо коллагена IV гидролизующий также эластин, протеогликаны, фибронектин и др. Матрилизин участвует также в активации предшественников ММП-2 и -9 [13]. Публикации последнего десятилетия свидетельствуют о том, что именно эти ММП являются перспективными маркерами для дифференциальной диагностики различных новообразований яичников и прогноза рака яичников [4, 7, 8, 10–12].
Активность ММП в межклеточном пространстве специфически подавляется четырьмя тканевыми ингибиторами (ТИМП). В последнее время появляются данные, свидетельствующие о том, что ТИМП играют также важную самостоятельную роль в регуляции роста и дифференцировки опухолевых и нормальных клеток и обладают антиангиогенными свойствами [2]. Среди тканевых ингибиторов наиболее значимым маркером рака яичников, по данным литературы, является ТИМП-1 [6].
Цель данного исследования: используя количественные иммуноферментные тесты, провести сравнительную оценку содержания ММП-2, ММП-7 и ММП-9, а также их тканевых ингибиторов 1 и 2 типов в опухолях и сыворотке крови больных раком, доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников и проанализировать взаимосвязь этих показателей с основными клинико-морфологическими особенностями рака яичников.
Материал и методы исследования
Обследованы 84 больные первичными опухолями яичников: 49 – злокачественными, 11 – пограничными и 24 – доброкачественными. В контрольную группу вошли 30 практически здоровых женщин.
Из 49 больных злокачественными опухолями яичников у 43 выявлен серозный рак яичников, у 3 – муцинозный и у 3 – эндометриоидный. Среди 24 доброкачественных новообразований яичников в 19 наблюдениях обнаружены ...
