Клинико-лабораторная характеристика лихорадки Ку в Новосибирской области

Цель исследования. Характеристика клинических симптомов лихорадки Ку и определение молекулярно-генетических и серологических маркеров C. burnetii у больных в Новосибирской области, госпитализированных в ранние сроки с неуточненной лихорадкой и подозрением на инфекционные заболевания, передаваемые клещами.
Материал и методы. Обследованы 830 пациентов, госпитализированных в весенне-летнем периоде 2018–2022 гг. с подозрением на инфекционные заболевания, передаваемые клещами. Для подтверждения результатов ПЦР-анализа проведена амплификация положительных образцов, содержащих ДНК C. burnetii, по фрагментам генов IS1111 и гена белка теплового шока B (heat shock protein B, htpB) c последующим их секвенированием. Наличие иммуноглобулинов класса G к C. burnetii в образцах сыворотки крови больных выявляли с использованием ИФА.
Результаты. У всех больных лихорадкой Ку отмечался интоксикационный синдром с фебрильной лихорадкой, у 86% выявлен гепатит с синдромом цитолиза слабо выраженной и умеренной степени активности; у 2 (14,3%) пациентов развился серозный менингит. Пневмония диагностирована в 1 (7,1%) случае.
Заключение. Диагностика лихорадки Ку вследствие полиморфизма клинического течения невозможна без лабораторного подтверждения. Выявление случаев заболевания в Новосибирской области при комплексном клинико-лабораторном исследовании диктует необходимость включения в перечень обязательных исследований у пациентов с укусом клеща ранней диагностики лихорадки Ку, что имеет важное практическое значение для проведения своевременной и адекватной терапии.

Лихорадка Ку (Q-febris, rickettsiosis Q, коксиеллез, пневмориккетсиоз, лихорадка скотобоен, легочной тиф, болезнь Деррика–Бернета, Балканский грипп, среднеазиатская лихорадка) – острая природно-очаговая зоонозная инфекционная болезнь с разнообразными механизмами передачи возбудителя, характеризующаяся развитием распространенного ретикулоэндотелиоза [1]. В РФ обязательная регистрация лихорадки Ку проводится с 1957 г. По данным Федерального центра гигиены и эпидемиологии, за период с 1957 по 2019 г. официально зарегистрировано 13 836 случаев заболевания, за 25 лет (1994–2013 гг.) – 2542 случая [2]. В то же время последние 16 лет лихорадку Ку официально выявляют только в 20 регионах России. Данная нозологическая форма чаще всего диагностируется в Южном федеральном округе [3]. Ежегодное количество зарегистрированных случаев лихорадки Ку в 1957–2019 гг. значительно варьировало – от 1241 случаев в 1957 г. до 17 случаев в 2008 г., т. е. их ежегодное максимальное и минимальное количество отличались в 73 раза. Средняя заболеваемость в РФ колеблется от 0,01 до 1,0 на 100 тыс. населения в разные годы, среднее число заболевших в 2007–2015 гг. составило 102 чел. в год, максимальное число больных отмечено в 2009 г. – 205 [2, 4].

Начало регистрации лихорадки Ку в Новосибирской области (НСО), по архивным данным, так же, как и в РФ в целом, датируется 1957 г. Данная инфекция не выявлялась в период с 2003 по 2017 г. ввиду отсутствия диагностических тест-систем для ее подтверждения. В рамках научного исследования по выявлению различных возбудителей клещевых инфекций у жителей НСО представляло интерес изучение особенностей диагностики лихорадки Ку.

Цель исследования – характеристика клинических симптомов лихорадки Ку и определение молекулярно-генетических и серологических маркеров C. burnetii у больных в НСО, госпитализированных в ранние сроки с неуточненной лихорадкой и подозрением на инфекционные заболевания, передаваемые клещами.

Материалы и методы

Обследованы 830 пациентов, госпитализированных в весенне-летний период 2018–2022 гг. в ГБУЗ НСО «Городская инфекционная клиническая больница № 1» (ГИКБ №1) Новосибирска с подозрением на инфекционные заболевания, передаваемые клещами (ИПК).

Критерии включения: наличие лихорадки, факт присасывания и/или наползания клеща или посещение лесопарковой зоны в течение 1 мес., предшествовавшего заболеванию. Исследование одобрено этическим комитетом ГИКБ № 1, у всех включенных в него пациентов получено информированное согласие на участие в исследовании.

Для проведения молекулярно-генетических исследований у пациентов в периоде лихорадки натощак забирали кровь в пробирки S-Monovette, содержащие ЭДТА (SARSTEDT, Германия). Образцы цельной крови (ЦК) использовали для получения лейкоцитарной фракции крови (ЛФК). Для этого вакуумную пробирку c ЦК центрифугировали 10 мин при 800 g. Плазму отбирали вместе с лейкоцитарным кольцом в отдельные пробирки и повторно центрифугировали 10 мин при 11000 g. Далее верхнюю часть плазмы удаляли, оставляя 200 мкл надосадочной жидкости вместе с осадком, ресуспендируя последний. Полученные 200 мкл ЛФК использовали для выделения суммарной фракции нуклеиновых кислот (НК) с помощью набора реагентов «РеалБест экстракция 100» (AO «Вектор-Бест», Новосибирск). Также от каждого больного выделяли НК тем же методом из 250 мкл циркулирующей крови, предварительно обработанной раствором для гемолиза из набора «РеалБест Гемолитик» («Вектор-Бест», Новосибирск). Элюцию НК проводили в объеме 350 мкл. Для постановки ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) использовали по 50 мкл выделенных образцов НК.

Методика выделения НК возбудителей из мочи описана ранее [5]. Комплексный анализ выделенных образцов НК с помощью ПЦР-РВ по выявлению генетических маркеров возбудителей ИПК проводили с применением коммерческих тестов «РеалБест ДНК Borrelia burgdorferi s. l./РНК ВКЭ», «РеалБест ДНК Borrelia miyamotoi», «Реал-Бест ДНК Anaplasma phagocytophilum/Ehrlichia muris, Ehrlichia chaffeensis», «РеалБест ДНК Rickettsia species», «РеалБест ДНК Rickettsia sibirica/Rickettsia heilongjiangensis» («Вектор-Бест», Новосибирск). Дополнительный анализ выделенных образцов НК проводили с помощью лабораторной версии ПЦР-теста «Coxbur-1», разработанной в АО «Вектор-Бест» (Новосибирск). Последний представляет собой набор реагентов для обнаружения ДНК-мишени C. burnetii (фрагмент гена транспозазы IS1111) методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной регистрацией данных. В разработанный набор входят пробирки, содержащие лиофильно высушенные готовые реакционные смеси (ГРС) для проведения ПЦР-РВ, обеспечивая амплификацию фрагмента гена-мишени C. burnetii длиной 70 п. н. Последовательности используемых олигонуклеотидов и протокол амплификации ДНК возбудителя описаны ранее [6].

Для подтверждения результатов...

Вяжевич А.Н., Краснова Е.И., Бондаренко Е.И., Криницына Э.В., Хохлова Н.И., Позднякова Л.Л., Проворова В.В., Колпакова Т.А., Поддубная Л.В.