Акушерство и Гинекология №9 / 2018
Клинико-морфологические особенности эндометрия при внутриматочных синехиях: оценка экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов
ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва
Цель исследования. Оценить экспрессию эстрогеновых (ER) и прогестероновых (PgR) рецепторов в ядрах железистого эпителия и стромы эндометрия и внутриматочных синехий у женщин репродуктивного возраста.
Материал и методы. В ходе проспективного исследования изучены образцы эндометрия 30 пациенток с внутриматочными синехиями и 10 пациенток группы контроля, проходивших оперативное лечение в гинекологическом отделении ФГБУ НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова. Образцы тканей эндометрия были взяты при помощи пайпель-биопсии с последующим морфологическим исследованием по стандартной методике. По данным гистологического исследования выделяли 3 степени тяжести внутриматочных синехий. Иммуногистохимическое исследование проводилось моноклональными антителами к PgR (clone 636, Dako, Denmark) и ER (clone 1D5, Dako, Denmark), вторичными антителами служила система Dako REAL EnVision (Dako, Denmark). После проведения иммуногистохимических реакций срезы контрастировали гематоксилином и эозином, заключали в среду «Shandon mount TM» (USA). Степень окраски ядер определялась полуколичественным методом.
Результаты. При иммуногистохимическом исследовании отмечено достоверное повышение уровня экспрессии ER в железистом эпителии и строме эндометрия женщин с внутриматочными синехиями умеренной и средней степени тяжести, по сравнению с железистым эпителием и стромой условно здоровых женщин, а также снижение экспрессии PgR в железистом эпителии и строме эндометрия при всех степенях тяжести спаечного процесса, по сравнению с эндометрием условно здоровых женщин.
Заключение. Выявленное повышение уровня экспрессии ER в эпителии и строме внутриматочных синехий и окружающего эндометрия в пролиферативную фазу менструального цикла у женщин репродуктивного возраста с внутриматочными синехиями I и II степени, а также снижение уровня экспрессии РgR при всех степенях тяжести процесса, является предпосылкой для дифференцированного подхода к назначению гормональной терапии после хирургического адгезиолизиса.
Внутриматочные синехии, впервые описанные Генрихом Фритцем в 1894 году, и по сей день представляют собой проблему репродуктивного здоровья женщин. Характеризуясь частичной или полной облитерацией полости матки фиброзной тканью, внутриматочные синехии могут стать причиной нарушений менструальной функции, привычного невынашивания беременности, бесплодия. Гистероскопический адгезиолизис является основным методом лечения данной патологии, однако высокая частота рецидива, достигающая 62,5%, требует поиска новых методов лечения и профилактики [1, 2]. Травма эндометрия по данным большинства авторов считается основной причиной формирования внутриматочных синехий, однако не исключена роль и других факторов, таких как инфекции, повышенная экспрессия цитокинов, гипоксия, снижение васкуляризации [3]. Кроме того, известны случаи формирования внутриматочных синехий без предшествовавшей травмы эндометрия [4].
Функциональный слой слизистой оболочки тела матки представляет собой ткань, обладающую высокими регенеративными свойствами, подвергающуюся росту, дифференцировке и отторжению на протяжении менструального цикла в течение всего репродуктивного возраста женщины. Колебания уровня циркулирующих эстрогенов и прогестерона поддерживают это состояние «ремоделирования эндометрия» [5]. Известно, что даже при относительно небольшой травме эндометрий может стать невосприимчивым к стероидным гормонам, что приводит к нарушению менструальной и репродуктивной функции, в частности при внутриматочных синехиях [2, 6].
В связи с этим мы провели исследование, целью которого стала оценка экспрессии эстрогеновых (ER) и прогестероновых (PgR) рецепторов в ядрах железистого эпителия и стромы эндометрия и внутриматочных синехий у женщин репродуктивного возраста.
Материал и методы исследования
На базе отделения оперативной гинекологии и патологоанатомического отделения ФГБУ Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России проведено проспективное исследование 30 пациенток репродуктивного возраста с внутриматочными синехиями и 10 пациенток группы сравнения, обратившихся для подбора контрацепции, которые прошли полное клинико-лабораторное обследование и лечение в 2015–2016 гг. Все пациентки перед включением в исследование подписали добровольное информированное согласие. Исследование было одобрено комитетом по этике ФГБУ НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова Минздрава России.
По данным гистероскопии на основании классификации Американского общества фертильности (1988) для иммуногистохимического исследования пациентки были разделены на группы: 1-я группа – пациентки с внутриматочными синехиями I степени (n=10), 2-я группа – пациентки с внутриматочными синехиями II степени (n=10), 3-я группа – пациентки с внутриматочными синехиями III степени (n=10), 4-я группа – условно здоровые пациентки группы сравнения (n=10).
Критериями включения в основные группы являлись: возраст пациенток от 18 до 45 лет, наличие внутриматочных синехий, выявленных по данным гистероскопии и подтвержденных гистологическим исследованием, пролиферативная фаза менструального цикла. Критериями исключения из исследования были: возраст пациенток менее 18 и больше 45 лет, прием гормональных препаратов на момент обращения, тяжелая сопутствующая соматическая патология, злокачественные новообразования в анамнезе, острые воспалительные заболевания органов малого таза. Гистероскопический этап выполняли по стандартной методике в отделении оперативной гинекологии в условиях соответствующего анестезиологического обеспечения.
В качестве материала для исследования были использованы образцы эндометрия и внутриматочные синехии, полученные во время гистероскопии и биопсии эндометрия. Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине с фосфатным буфером, обрабатывали в аппарате Shandon и заливали в парафин. Суммарное время фиксации, проводки и заливки не превышало 48 часов. Парафиновые срезы толщиной 4–5 микрон окрашивали гематоксилином и эозином.
Для иммуногистохимического исследования срезы толщиной 4 мкм наносили на высоко адгезивные предметные стекла и сушили в течение 18 часов при температуре 37°С. После снятия парафина со срезов их регидратировали в батарее спиртов 95, 80, 70, инкубируя в каждом растворе по 2 минуты. Восстановление антигенной активности проводили в PT Link («Dako») в буфере EnVision pH 9,0 в течение...
