Количественный фазовый имиджинг (QPI) тромбоцитов периферической крови в оценке тромбогеморрагических осложнений чрескожной нефролитотрипсии у пациентов с коралловидным нефролитиазом

Введение. Изучение и прогнозирование осложнений различных методов лечения коралловидного нефролитиаза (КН) необходимы для выбора оптимальной хирургической стратегии для конкретного пациента и применения периоперационных профилактических мероприятий. Патогенез интра- и послеоперационных тромбогеморрагических нарушений остается малоизученным осложнением в оперативной урологии. Цель. Изучить роль морфоденситометрических показателей тромбоцитов периферической крови в развитии периоперационных тромбогеморрагических нарушений у пациентов с КН после ЧНЛТ. Материалы и методы. В основу исследования положены суммарные результаты ретроспективного простого исследования 292 пациентов с верифицированным диагнозом КН в возрасте от 20 до 77 лет (средний возраст – 53,4±12,3 года), подвергнутых оперативному лечению в объеме черскожной нефролитотрипсии (ЧНЛТ). Использовали метод количественной фазово-интерференционной микроскопии тромбоцитов периферической крови с использованием отечественного компьютерного лазерного фазово-интерференционного микроскопа МИМ-320 («Амфора», Москва). Особенности функциональной активности циркулирующей популяции тромбоцитов оценивали в соответствии с четырьмя морфологическими типами живых клеток, характеризующими степень их активации. Результаты и обсуждение. При КН наблюдались значительные морфофункциональные изменения клеток тромбоцитарного звена гемостаза: средний в популяции диаметр клеток превышает контрольные значения в 1,2 раза, периметр – в 1,4 раза, площадь – почти в 2 раза и объем – в 1,3 раза. Состояние тромбоцитарного гемостаза у больных КН можно расценивать как состояние «напряжения с элементами декомпенсации». При интраоперационном исследовании тромбоцитов зарегистрировано уменьшение размеров клеток (диаметра, периметра, площади и объема) с незначительным повышением их фазовой высоты, возможно, в результате сферолизации клеток как этапа подготовки к их активации. На 3-и и 5-е сутки после операции эти изменения сохранялись. Отмечена положительная корреляционная связь между размером камня и 3-м типом тромбоцитов интраоперационно (r=0,590, р<0,05). Продолжительность операции положительно коррелировала с 4-м типом тромбоцитов на 5-е сутки после операции (r=0,646, р<0,05), установлена отрицательная корреляционная связь с высотой (r= -0,767, р<0,05) и 2-м типом (r= -0,747, р<0,05) тромбоцитов на 5-е сутки после операции. Время ультразвукового дробления камня положительно коррелировало с 4-м типом тромбоцитов интраоперационно (r=0,740, р<0,05), средним диаметром (r=0,610, р<0,05), периметром (r=0,628, р<0,05) и площадью (r=0,710, р<0,05) тромбоцитов на 5-е сутки. Интраоперационное кровотечение положительно коррелировало со 2-м типом тромбоцитов у пациентов до операции (r=0,7312, р<0,05). Наличие у пациентов в анамнезе сахарного диабета 2-го типа (СД2) положительно коррелировало с площадью тромбоцитов интраоперационно (r=0,615, р<0,05), а также периметром (r=0,592, р<0,05), 2-м (r=0,635, р<0,05) и 3-м (r=0,592, р<0,05) типом тромбоцитов на 3-и сутки, площадью (r=0,615, р<0,05) и объемом (r=0,717, р<0,05) тромбоцитов на 5-е сутки, 2-м типом тромбоцитов (r=0,590, р<0,05) на 5-е сутки. Отрицательная корреляционная связь СД2 наблюдалась с 1-м типом тромбоцитов (r= -0,720, р<0,05) на 3-и сутки после операции. Тромбиновое время до операции отрицательно коррелировало с 3-м типом тромбоцитов до операции (r= -0,712, р<0,05). Число тромбоцитов до операции отрицательно коррелировало с площадью тромбоцитов на 5-е сутки после операции и наличием у пациентов СД2. Заключение. Морфоденситометрические показатели тромбоцитов периферической крови объективно отражают функциональную полноценность тромбоцитарного звена гемостаза Тромбоцитарная «анергия», то есть отсутствие реакции тромбоцитов на внешнее вмешательство (операция) является свидетельством декомпенсированного состояния тромбоцитарного звена и может служить прогностическим фактором риска развития интра- или послеоперационного кровотечения.

Введение. Коралловидный нефролитиаз (КН) является тяжелым заболеванием, требующим проведения безотлагательного и эффективного лечения. Без активного оперативного вмешательства смертность достигает 28%, а риск развития значительных почечных нарушений составляет 36% в течение 10 лет катамнеза [1].

Изучение и прогнозирование возможных осложнений различных методов лечения необходимы для выбора оптимальной индивидуальной хирургической стратегии ведения, и при необходимости применения периоперационных профилактических мероприятий [1–3].

В литературе, посвященной черскожной нефролитотрипсии (ЧНЛТ) при КН, значительное место отводится осложнениям вмешательства. Чаще всего упоминаются кровотечения, повреждения чашечно-лоханочной системы, соседних органов, инфекционные и тромбоэмболические осложнения. К факторам риска относят множественные пункции почки, применение интродьюсеров большого диаметра, сам факт наличия КН и большую длительность оперативного вмешательства. Подчеркивается высокий уровень кровотечений и тромбоэмболических осложнений, которые возникают в результате ЧНЛТ почти у трети пациентов с КН [4–7].

Патогенез интра- и послеоперационных тромбогеморрагических нарушений до настоящего времени остается малоизученным осложнением оперативной урологии.

Цель. Изучить роль морфоденситометрических показателей тромбоцитов периферической крови в развитии периоперационных тромбогеморрагических нарушений у пациентов с КН после ЧНЛТ.

Материалы и методы. В урологическом отделении ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского с января 2013-го по декабрь 2018 г. 292 пациента с верифицированным диагнозом КН в возрастном промежутке от 20 до 77 (53,4±12,3) лет были подвергнуты оперативному лечению в объеме ЧНЛТ. Ретроспективный анализ показал, что относительный риск развития периоперационного кровотечения (2,26; OR-95%) сопряжен с числом пункций ЧЛС. Данный факт явился дополнительным критерием исключения пациентов с множественными пункциями ЧЛС из проспективной части исследования.

Для оценки тромботических нарушений гомеостаза выполнено проспективное исследование, включавшее 29 пациентов, которым произведен анализ морфофункционального состояния тромбоцитов методами компьютерной цитоморфометрии. Контрольную группу составили 25 практически здоровых доноров-добровольцев.

На первом этапе поискового проспективного исследования мы сосредоточили внимание на характеристике исходных морфоденситометрических показателей циркулирующих тромбоцитов у больных КН. Исследования осуществляли методом количественной фазово-интерференционной микроскопии тромбоцитов периферической крови с использованием отечественного компьютерного лазерного фазово-интерференционного микроскопа МИМ-320 («Амфора», Москва), представляющего собой интерферометр Линника с автоматизированным рабочим столом. Для получения интерферограмм использован метод регистрации сдвига фазы лазерного излучения путем модуляции опорной волны пъезокерамическим зеркальным элементом с аппаратной регистрацией сдвига. Источником света служил полупроводниковый лазер с длиной волны 633 нм.

Взвесь тромбоцитов в физиологическом растворе помещали в ячейку камеры Горяева, на рабочую поверхность которой нанесено зеркальное покрытие. После оседания клеток на зеркало, проводили съемку изучаемых цитообъектов. Оптическое увеличение в канале регистрации составляло 1000.

Программное обеспечение микроскопа рассчитывает сдвиг фазы когерентного излучения, прошедшего через прозрачный цитообъект, путем сравнения его с отраженным от высококачественного зеркала. Получаемые фазовые изображения представляют собой распределение сдвига в виде цифровой матрицы [x: y]. Значения x, y представляют собой оптическую толщину объекта Н в точке с координатами x, y: H(X,Y)=[n(x,y)-nc]´h(x,y), где n(x,y) – показатель преломления, h(x,y) – физическая толщина в направлении Z, nc – показатель преломления среды.

Результат обратного преобразования цифрового массива в видимое изображение и восстановление фазового портрета объекта отображался на экране монитора компьютера.

Количественный анализ параметров фазовых образов клеток выполняли с помощью алгоритмов среды MATLAB.

В соответствии с алгоритмом лазерной интерферометрии последовательно проводили автоматическую обработку полученных фазово-интерференционных изображений живых клеток, определяли комплекс морфоденситометрических показателей, проводили статистическую обработку полученных данных и документировали результаты в форме протоколов 1-го, 2-го и 3-го уровней.

Особенности функциональной активности циркулирующей популяции тромбоцитов оценивали в соответствии с четырьмя морфологическими типами живых клеток, характеризующими степень их активации. Основой для дискриминации структурно измененных тромбоцитов служили различные варианты их формы, характера рельефа поверхности, наличие псевдоподий, их число и величина.

Протокол 1-го уровня включал процедуры визуализации фазово-интерференционного образа клетки (отображение топогра...

Дутов В.В., Буймистр С.Ю., Василенко И.А.