Копийность митохондриальной ДНК в эякуляте ВИЧ-инфицированных мужчин, принимающих антиретровирусную терапию

Цель. Изучить содержание митохондриальной ДНК (мтДНК) в образцах спермы ВИЧ-инфицированных мужчин, принимающих антиретровирусную терапию (АРВТ).
Материалы и методы. Проведено проспективное клиническое исследование 190 мужчин, которые обратились для оценки фертильности и реализации репродуктивной функции. Основную группу исследования составили 94 ВИЧ-инфицированных мужчины, контрольную – 96 пациентов без ВИЧ-инфекции. Количественная оценка мтДНК, лишенной делеций (mtDNAdel-), тотальной мтДНК (mtDNAtotal) и их соотношения (mtDNAtotal/mtDNAdel-) проведена в 58 и 96 образцах спермы соответственно с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени.
Результаты. Медиана возраста ВИЧ-инфицированных мужчин составила 37 лет (33;39), «стаж» заболевания – 5 лет (2;11 лет). Медиана продолжительности приема АРВТ – 2 года (1;5 лет). Количество мтДНК, лишенной делеций (1,9 (0,9;5,9) и 2,4 (1,9;5,6) относительных единиц (о.е.); р=0,54), уровень тотальной мтДНК (5,4 (3,7;9,8) и 5,5 (3,5;8,2) о.е.; р=0,62) и соотношение mtDNAtotal/mtDNAdel- (2,4 (1,5;3,9) и 1,9 (1,3;3,0), р=0,09)) были сопоставимы между группами. В группе тяжелой патологии спермы была обнаружена отрицательная корреляция между длительностью АРВТ и копийностью тотальной мтДНК (r=-0,627; р=0,01), а также длительностью АРВТ и уровнем мтДНК, лишенной делеций (r=-0,542; р=0,04). Выраженная отрицательная корреляция была выявлена между уровнем CD4+ и соотношением mtDNAtotal/mtDNAdel- (r=-0,629; р=0,03).
Заключение. Не было выявлено существенных различий в копийности мтДНК в сперматозоидах у мужчин с ВИЧ-инфекцией по сравнению с контрольной группой. У ВИЧ-инфицированных пациентов с выраженной патологией спермы уровни тотальной мтДНК и мтДНК, лишенной делеций, имели обратную зависимость от длительности АРВТ, а содержание мтДНК с делециями отрицательно коррелировало с состоянием иммунной системы.

ВИЧ-инфекция вышла за пределы уязвимых групп населения и активно распространяется в общей популяции. По состоянию на 31 октября 2019 г. кумулятивное количество зарегистрированных случаев выявления ВИЧ-инфекции среди граждан Российской Федерации (РФ) составило 1 408 264 человек, из которых 347 711 умерли. В настоящее время в РФ наиболее высокий уровень пораженности ВИЧ-инфекцией среди населения наблюдается в возрастной группе 30–44 года. В гендерной структуре преобладают мужчины (63%), из них 3,28% находятся в возрасте 35–39 лет, большинство планируют реализацию репродуктивной функции [1].

Использование антиретровирусной терапии (АРВТ) позволяет безопасно реализовать репродуктивную функцию в данной группе пациентов, в том числе и самостоятельно, без использования вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Однако существует мнение, что АРВТ может оказывать негативное влияние на показатели спермы, что проявляется в снижении концентрации, подвижности сперматозоидов, увеличении количества патологических форм, как результат – снижении фертильности ВИЧ-инфицированных мужчин [2]. Одним из возможных механизмов негативного влияния АРВТ, в частности нуклеотидных ингибиторов обратной транскриптазы (НИОТ), на качество спермы могут быть изменения метаболизма сперматозоидов в связи с токсическим повреждением митохондрий [3, 4, 5]. Известно, что зрелый сперматозоид человека содержит приблизительно 50–75 митохондрий, в каждой из которых содержится одна копия мтДНК. Именно митохондрии являются главным источником энергии для осуществления двигательной активности в сперматозоидах млекопитающих [6]. В исследованиях Santos (2009), Pelliccione (2011) показано, что относительное содержание мтДНК значительно снижается в сперме мужчин с олиго- и астенозооспермией [7, 8]. Ряд авторов полагают, что неблагоприятное воздействие АРВТ связано с развитием оксидативного стресса [9]. Образование активных форм кислорода (АФК) увеличивает перекисное окисление липидов и приводит к повреждению хроматина сперматозоидов и нарушению целостности ДНК сперматозоидов [10, 11]. Помимо этого, АФК повреждают мембрану сперматозоидов, в результате чего снижается их подвижность и способность оплодотворять яйцеклетку [12]. Van Leeuwen E. et al. (2009), напротив, показали, что количество копий мтДНК в сперматозоидах ВИЧ-инфицированных мужчин, получающих АРВТ, повышается по сравнению с ВИЧ-инфицированными, никогда не принимавшими АРВТ и серонегативными мужчинами [13].

Таким образом, противоречивые данные о влиянии АРВТ на число копий мтДНК сперматозоидов у мужчин с ВИЧ-инфекцией послужили основанием для проведения данного исследования.

Цель исследования – изучить содержание мтДНК в образцах спермы ВИЧ-инфицированных мужчин, принимающих АРВТ.

Материалы и методы

Проведено проспективное клиническое исследование у 190 мужчин, которые обратились для оценки фертильности и реализации репродуктивной функции в 1-е гинекологическое отделение (руководитель – к.м.н. Абубакиров А.Н.) ФГБУ «НМИЦ АГП имени академика В.И. Кулакова». Основную группу исследования составили 94 ВИЧ-инф­ицированных мужчин, контрольную – 96 па­циентов без ВИЧ-инфекции. Количественная оценка мтДНК, лишенной делеций (mtDNAdel-), тотальной мтДНК (mtDNAtotal) и их соотношения (mtDNAtotal/mtDNAdel-) проведена в 58 и 96 образцах спермы соответственно. Критерии включения в основную группу: наличие ВИЧ-инфекции, 3 субклиническая, 4а, 4б, 4в стадии, фаза ремиссии; прием АРВТ, неопределяемая вирусная нагрузка в 2 последовательных исследованиях, сделанных с интервалом не менее 3 месяцев; информированное согласие на участие в настоящем исследовании. Критерии исключения: коинфекция вирусными гепатитами В, С, отсутствие АРВТ. Критерии включения в группу контроля: ВИЧ-серонегативный статус.

Статус пациентов по ВИЧ-инфекции оценивали на основании данных о стадии и фазе заболевания, уровне вирусной нагрузки, CD4+, CD8+ лимфоцитов и длительности, а также составе АРВТ.

Сбор эякулята производился путем мастурбации после 3–4 дней полового воздержания в стерильный пластмассовый контейнер. Оценка параметров спермограммы производилась в соответствии с нормативами ВОЗ (2010) [14].

Далее образцы спермы были разделены на нормозооспермию, субфертильную и тяжелую патозооспермию. Критерии выраженной патологии спермы: концентрация сперматозоидов до 12 млн/м...

Перминова С.Г., Митюрина Е.В., Селимова Ф.Н., Бурменская О.В., Козырина Н.В., Кравченко А.В.