Механизмы формирования тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов при хроническом обструктивном пиелонефрите

Цель исследования. установить участие тромбоцитов и роль агонистов (адреналина и АДФ) в формировании тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов при поддержании хронического воспаления и инициации на этом фоне острой воспалительной реакции у пациентов с хроническим обструктивным пиелонефритом (ХОПН). Материал и методы. В исследование включены 43 пациента, из которых 26 находились в фазе ремиссии ХОПН и 17 – в фазе рецидива заболевания. Тромбоциты выделяли путем центрифугирования из цитратной периферической крови. Оценку агрегации тромбоцитов проводили на агрегометре Chrono-log (USA) с использованием агонистов в концентрации ЕС50. Формирование тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов (ТЛА) моделировали in vitro в условиях инкубации стимулированных тромбоцитов (адреналин или АДФ) и интактных лейкоцитов, выделенных из периферической крови пациентов с ХОПН. Морфометрические исследования мазков проводили после окраски суспензии клеток по методу Романовского-Гимзе. Результаты. Общее количество интактных ТЛА в периферической крови при рецидиве ХОПН было на 29,8% больше, чем в фазе ремиссии (р<0,001). После предварительной стимуляции тромбоцитов возрастает их взаимодействие с интактными (нестимулированными) лейкоцитами. Причем в фазу ремиссии ХОПН адреналин, а в фазу рецидива АДФ оказывают более выраженный эффект на формирование ТЛА. Агонисты моделируют определенное соотношение тромбоцитов с разными лейкоцитами, которое отражает особенности взаимодействия клеток крови при реализации хронического и острого воспаления. Заключение. Понимание механизмов регуляции формирования ТЛА при реализации воспаления позволяет обосновать новые возможности управления фазой рецидивирования ХОПН.

Введение

Анализ динамики воспалительной реакции в мочевыводящих путях представляется достаточно субъективным, если необходимо установить начало перехода от хронического к острому воспалению. Это связано с ограниченным набором индикаторов (лейкоцитоз, С-реактивный белок, СОЭ, спектр цитокинов), позволяющих регистрировать переход от одного стационарного состояния клеток крови к другому. Очевидно, что констатация острого пиелонефрита – это и понимание упущенных возможностей для ранней профилактики и лечения. Известно, что реализация воспаления в организме осуществляется путем рекрутирования и миграции лейкоцитов из крови через эндотелий в рыхлую волокнистую соединительную ткань. Однако остаются невыясненными механизмы активации циркулирующих лейкоцитов, хотя факт взаимодействия лейкоцитов и тромбоцитов (Тц) не вызывает сомнений [1]. В процессе развития воспалительной реакции активированные Тц могут индуцировать лейкоциты путем формирования тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов (ТЛА) [2]. Условием взаимодействия клеток крови является активация тромбоцитов или лейкоцитов, которая проявляется повышением экспрессии адгезивных молекул, в частности CD62Р и CD40L [3]. Предлагается использовать тромбоцитарно-моноцитарные агрегаты (ТМА) как «золотой» стандарт активации тромбоцитов in vivo [4]. Несмотря на проявляемый интерес к отдельным видам ТЛА, значение соотношения разных агрегатов при реализации воспаления остается непонятным. Отсутствуют знания, касающиеся роли различных агонистов, стимулирующих клетки при формировании ТЛА, а также механизмов, обеспечивающих поддержание хронического воспаления, и переход к острой воспалительной реакции. Такая информация могла бы приблизить к пониманию процессов селективного рекрутирования нейтрофилов (Нф), моноцитов (М), лимфоцитов (Лф) и эозинофилов (Эо) из крови, т.е. их активации, адгезии и миграции, а следовательно, механизмов рецидивирования пиелонефрита при уролитиазе.

Цель исследования – установить участие тромбоцитов и роль агонистов (адреналина и АДФ) в формировании тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов при поддержании хронического воспаления и инициации на этом фоне острой воспалительной реакции у пациентов, страдающих хроническим обструктивным пиелонефритом.

Материал и методы

В исследование включены 43 пациента с хроническим обструктивным пиелонефритом (ХОПН), верифицированным на основании жалоб больных, анамнеза заболевания, объективного осмотра, результатов клинико-лабораторных и инструментальных исследований. В фазе ремиссии ХОПН обследованы 26 больных и в фазе рецидива – 17. Тц выделяли путем центрифугирования из цитратной периферической крови пациентов. Для анализа функционального состояния Тц использовали агонисты АДФ и адреналин (Sigma) в концентрации ЕС50 (5 мкМ), воспроизводящей амплитуду агрегации 50% у здоровых лиц. Оценку агрегации Тц проводили на агрегометре Chrono-log (USA). В мазках периферической крови подсчитывали количество интактных тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов (ТЛА), т.е. агрегатов тромбоцитов с нейтрофилами, моноцитами, лимфоцитами, эозинофилами, которые сформировались без какого-либо воздействия исследователя на клетки крови. Формирование ТЛА также моделировали in vitro в условиях инкубации стимулированных тромбоцитов (адреналин или АДФ в концентрации ЕС50) и интактных лейкоцитов, выделенных из периферической крови пациентов с ХОПН. В дальнейшем проводили морфометрические исследования мазков суспензии клеток после окраски по методу Романовского–Гимзе. При этом учитывали следующие параметры: количество ТЛА (на 100 лейкоцитов); состав лейкоцитов, вовлеченных в формирование агрегатов (на 100 лейкоцитов); соотношение основных типов агрегатов: тромбоцитарно-нейтрофильных (ТНфА), тромбоцитарно-моноцитарных (ТМА) и тромбоцитарно-лимфоцитарных агрегатов (ТЛфА). Все клинические исследования выполнены по согласованию с комиссией по биоэтике Донецкого национального медицинского университета им. М. Горького.

Статистическая обработка осуществлена с помощью пакета MedStat (ДонНМУ, Украина) и MedCalc (v.12.5.0.0). Размер выборки определен на основании сравнения двух средних с мощностью 80% и на уровне значимости 5%.Точечная оценка величин, подлежащих анализу, проведена путем расчета среднего арифмети...

Э.Ф. Баринов, А.О. Балыкина, А.Н. Кравченко