Метилирование гена WIF1 при различных видах патологии эндометрия

Актуальность. Wnt-сигнальный путь является важным индуктором пролиферации, ангиогенеза и малигнизации при раке эндометрия (РЭ), однако роль эпигенетических нарушений его гена-супрессора WIF1 при доброкачественной патологии эндометрия остается неизученной.
Цель. Определение статуса метилирования гена WIF1 при различных видах патологии эндометрия.
Материалы и методы. Методом бисульфитного секвенирования определялось метилирование гена WIF1 в 60 образцах полипов эндометрия (ПЭ), 35 – гиперплазии эндометрия (ГЭ), 20 – хронического эндометрита (ХЭ) и 20 – неизмененного эндометрия стадии пролиферации (СтП).
Результаты. Метилирование гена WIF1 выявлено в 80% образцов ХЭ, 72% – ГЭ и 61,7% – ПЭ и ни в одном случае неизмененного эндометрия СтП (p&0,001), причем наибольшая степень метилирования наблюдалась при ГЭ. У пациенток с метилированием гена WIF1 в 1,6 раза чаще отмечались внутриматочные вмешательства в анамнезе, число которых коррелировало со степенью метилирования.
Заключение. Эпигенетическое молчание гена WIF1 может играть значимую роль в формировании ГЭ и ПЭ посредством активации Wnt-сигнального пути, ассоциированного с избыточной пролиферативной и ангиогенной активностью. ХЭ может являться фактором риска развития данных заболеваний за счет индукции аномального метилирования гена WIF1.

Аномальные маточные кровотечения являются показанием для проведения большинства внутриматочных вмешательств как в репродуктивном периоде, так и в менопаузе [1–4]. Согласно многочисленным исследованиям, наиболее распространенными причинами аномальных маточных кровотечений являются полипы эндометрия (ПЭ), гиперплазия эндометрия (ГЭ) и хронический эндометрит (ХЭ) [2, 5, 6]. Для гиперпластических процессов эндометрия, к которым традиционно относят ПЭ и ГЭ, характерна также высокая частота рецидивов, сопряженная с неоднократными внутриматочными вмешательствами, риском повреждения эндометрия, формирования внутриматочных синехий и развития маточных форм бесплодия [1, 3, 5]. Кроме того, ГЭ рассматривается как фактор риска рака эндометрия, частота которого в последние годы не имеет тенденции к снижению.

Несмотря на длительную историю изучения гиперпластических процессов эндометрия, механизмы, лежащие в основе их формирования, остаются неясными. Перспективным направлением в исследовании пролиферативных процессов может стать изучение Wnt-сигнального пути, который является одним из важнейших в регуляции множества физиологических и патологических процессов, включая клеточную дифференцировку, пролиферацию, ангиогенез и малигнизацию [7–10]. Регуляция Wnt-каскада осуществляется посредством ряда ингибиторов, наиболее важным из них считается Wnt Inhibitory Factor 1 (WIF1). Согласно имеющимся данным, при опухолевых заболеваниях, в том числе при раке эндометрия, часто наблюдается «молчание» гена, кодирующего WIF1, что обусловлено его метилированием [8, 9, 11–15].

Метилирование – наиболее распространенная форма эпигенетических модификаций, представляющая собой присоединение метильной группы к цитозину динуклеотидов CpG, расположенных в промоторной области гена, что приводит к супрессии транскрипции ДНК [16]. Полагают, что избыточное метилирование генов-супрессоров опухолевого роста и гипометилирование проонкогенов может приводить к чрезмерной активности процессов ангиогенеза, пролиферации и лежать в основе малигнизации, в том числе в эндометрии [16, 17]. При этом вопрос о возможной роли активации Wnt-пути и метилирования WIF1 в формировании доброкачественных гиперпластических процессов эндометрия остается малоизученным. Несмотря на то что ХЭ не относится к категории пролиферативных заболеваний, имеются данные о взаимосвязи метилирования ряда генов и хронического воспаления [18–20]. Однако работ, посвященных оценке подобной взаимосвязи при воспалительных заболеваниях женской репродуктивной системы, в доступной литературе обнаружено не было.

Целью данного исследования явилось определение статуса метилирования гена WIF1 при различных видах патологии эндометрия.

Материалы и методы

В исследование включены 125 женщин в возрасте от 20 до 50 лет (35,6 (6,9) года): 60 – с гистологически подтвержденным диагнозом ПЭ (35,5 (6,7) года), 25 – с ГЭ (37,4 (8,1) года) и 20 – с ХЭ (35,2 (6,6) года). Группу контроля составили 20 женщин (36,4 (6,1) года) без нарушений менструального цикла, эндометрий которых соответствовал стадии пролиферации (СтП). Критериями исключения служили прием гормонотерапии в течение 3 месяцев, предшествующих оперативному лечению, наличие онкологической и тяжелой экстрагенитальной патологии. Полученные образцы ткани эндометрия были трижды промыты буфером PBS и заморожены при температуре -20°С. Для выявления уровня метилирования гена WIF1 полученные материалы гомогенизировали в гомогенизаторе FastPrep-24 (MP Biomedicals, США) с добавлением матрикса D. Из полученных образцов выделяли ДНК с использованием и по протоколу набора ReliaPrep gDNA Tissue Miniprep System (Promega, США). Концентрацию ДНК определяли флуориметрически с использованием стандартного набора Qubitds DNA HS Assay Kit на флуориметре Qubit 2.0 (Life Technologies, США). Бисульфитная конверсия: 150 нг полученной ДНК подвергали бисульфитной конверсии (переводу неметилированных остатков цитозина в тимин при с...

Ашрафян Л.А., Киселев В.И., Чернуха Г.Е., Иванов И.А., Полозников А.А.