Метилирование генов TLR2 и импринтинг-контролирующей области IGF2/H19 в плазме крови при задержке роста плода

Цель. Изучить уровень метилирования генов TLR2 и импринтинг-контролирующей области IGF2/H19 в плазме периферической крови при задержке роста плода (ЗРП).
Материалы и методы. В исследование были включены 118 беременных, которые были разделены на 2 группы: группу 1 составили 58 пациенток c подтвержденным диагнозом ЗРП (24 – с ранней и 34 – с поздней формой), группу 2 – 60 женщин без ЗРП. Был определен уровень метилирования 22 генов. Исследование проводилось с помощью метилчувствительного анализа кривых плавления с высоким разрешением Methylation-Sensitive High Resolution Melting (MS-HRM).
Результаты. При ранней форме ЗРП уровень метилирования гена TLR2 в плазме крови статистически значимо снижается и составляет 0,01 (0,0;0,45). При пороговом значении относительного уровня метилирования TLR2 0,012 чувствительность составила 88,1%, а специфичность – 60,2% (AUC=0,72; 95% ДИ 0,56–0,88). При поздней форме ЗРП не выявлено статистически значимых различий по сравнению с физиологической беременностью. Уровень метилирования импринтинг-контролирующей области IGF2/H19 в плазме крови снижен при ранней форме ЗРП, достигая 0,22 (0,18; 0,32), а в группе сравнения составил 0,49 (0,44; 0,65), p=0,03. При пороговом значении относительного уровня метилирования импринтинг-контролирующей области IGF2/H19, равном 0,2, согласно ROC-анализу, чувствительность составила 80,4%, специфичность – 80,1%. Относительный уровень метилирования IGF2/H19 при поздней форме ЗРП не имел статистически значимых различий по сравнению с физиологически протекающей беременностью.
Заключение. Полученные данные подтверждают роль метилирования генов TLR2 и импринтинг- контролирующей области IGF2/H19 в развитии ЗРП, которые могут быть использованы в качестве неинвазивных предикторов и позволяют предположить, что сформированные еще на антенатальном этапе эпигенетические изменения продолжаются в неонатальном периоде и имеют большое значение в реализации фетального программирования.

Задержка роста плода (ЗРП, «intrauterine growth restriction/fetal growth retardation») – это патологическое ограничение генетически запрограммированного роста плода, свидетельствующее о его страдании, не имеющее тенденции к снижению [1–3]. В настоящее время в клинической практике используется хронологическая классификация, основанная на разделении ЗРП на раннюю и позднюю формы [4–6]. Точкой отсечки в настоящее время принят срок гестации 32 недели [1, 7, 8].

Ранняя форма ЗРП (манифестация до 32 недель гестации) составляет 20–30% всех случаев. В основе формирования данной формы лежит нарушение плацентации, а именно неполноценная инвазия трофобласта в миометральный сегмент спиральных артерий, что приводит к увеличению сопротивления в маточных артериях. Возникающая при этом гипоксия требует адаптации кардиоваскулярной системы плода, что проявляется его высокой толерантностью к низким уровням кислорода [9–11]. Перинатальная заболеваемость и смертность при ранней форме ЗРП являются крайне высокими, а главной проблемой является тактика ведения данной группы беременных [12, 13].

Поздняя форма (манифестация после 32 недель гестации) составляет 70–80% всех случаев ЗРП. При данном фенотипе незначительные плацентарные нарушения приводят к гипоксии легкой степени, которая также требует развития компенсаторных механизмов со стороны сердечно-сосудистой системы плода. При этом степень толерантности плода к гипоксии остается низкой, что делает невозможным его длительное пребывание в условиях низких уровней кислорода [14, 15]. Перинатальная заболеваемость и смертность при поздней форме ЗРП остаются низкими, а главной проблемой является диагностика, так как при незначительных плацентарных нарушениях ультразвуковые и допплерометрические показатели остаются в пределах нормативных значений [16, 17].

Отсутствие единой системы диагностических критериев приводит к недостаточной эффективности антенатального выявления ЗРП [1, 2, 4, 18, 19].

Благодаря совершенствованию молекулярно-генетических методов исследования стала возможной оценка эпигенетической регуляции, что представляет большой интерес в связи с возможностью разработки новых диагностических тестов на основании выделения эпигенетических меток в биологических субстратах [6, 10, 12, 14]. Понимание механизмов, лежащих в основе данных процессов, может стать основой для разработки в будущем новых лечебно-диагностических подходов.

Цель исследования: изучить уровень метилирования генов TLR2 и импринтинг-контролирующей области IGF2/H19 в плазме периферической крови при ЗРП.

Материалы и методы

В исследование были включены 118 беременных, которые были разделены на 2 группы: группу 1 составили 58 пациенток c подтвержденным диагнозом ЗРП (24 – с ранней и 34 – с поздней формой), группу 2 – 60 женщин без ЗРП. Исследование было одобрено локальным этическим комитетом, все беременные подписали добровольное информированное согласие.Критериями включения явились: спонтанная одноплодная беременность, отсутствие тяжелых экстрагенитальных заболеваний, миомы матки больших размеров, аномалий и пороков развития плода.

Для исследования уровня метилирования генов в плазме материнской крови был произведен сбор образцов 5 мл периферической венозной крови в пробирки с К3 ЭДТА в качестве антикоагулянта. Образцы ЭДТА...

Кан Н.Е., Тютюнник В.Л., Хачатрян З.В., Садекова А.А., Красный А.М.