Акушерство и Гинекология №6 / 2022
Модуляция внутривенными иммуноглобулинами взаимодействия NK-клеток и трофобласта
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта», Санкт-Петербург, Россия
Для успешного развития беременности необходимо формирование иммунологической толерантности к клеткам плода, а также участие клеток иммунной системы в процессах имплантации и формирования сосудистой сети плаценты [1]. Нарушение механизмов становления иммунологической толерантности связывают с патогенезом репродуктивных патологий [2]. Одной из популяций клеток, вероятно вовлеченных в патогенез репродуктивных патологий являются естественные киллеры (natural killer cells, NK-клетки) [3]. Так, при лабораторном обследовании женщин с диагнозом привычное невынашивание беременности (ПНБ) выявлена высокая цитотоксичность NK-клеток, в модели in vitro, в отношении клеток трофобласта линии JEG-3. Показано, что этот параметр у пациенток с ПНБ превышал таковой у здоровых небеременных женщин [4, 5].
Данные о цитотоксичности NK-клеток у пациенток с бесплодием противоречивы. В ряде исследований описана повышенная по сравнению со здоровыми женщинами цитотоксичность NK-клеток, выделенных из периферической крови женщин с ПНБ и/или бесплодием [6, 7]. Однако метаанализ исследований, в которых оценивали роль NK-клеток в исходах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), не выявил различий в показателях живорождения у женщин с повышенной цитотоксической активностью NK-клеток по сравнению с женщинами с установленными в рамках нормы показателями цитотоксичности [8]. В то же время у женщин с бесплодием по сравнению со здоровыми женщинами, имевших в прошлом успешные беременности, установлена повышенная цитотоксичность NK-клеток периферической крови к клеткам линии K-562 [9].
Одним из препаратов, применяемых для преодоления бесплодия, связанного с иммунными факторами, являются иммуноглобулины для внутривенного введения (ВВИГ) [10, 11]. Показано, что применение ВВИГ при подготовке к процедуре ЭКО увеличивает вероятность успешной имплантации бластоцисты [10–12]. Однако точный механизм действия ВВИГ остается неясным. Предполагают, что он может влиять на цитотоксическую функцию NK-клеток [13, 14].
Одним из методов оценки цитотоксичности NK-клеток является оценка гибели клеток линии К-562 после их совместного культивирования с NK-клетками. Клетки линии К-562 являются стандартными клетками-мишенями, поскольку они не экспрессируют молекул локуса HLA, что делает их уязвимыми для естественных киллеров. Однако при беременности NK-клетки контактируют с другими клетками, в том числе с клетками трофобласта плода, которые экспрессируют на своей поверхности молекулы локуса HLA-C и неклассические молекулы локусов HLA E, G [15] и способны модулировать функции NK-клеток [16], что в значительной степени отличает их от стандартных клеток-мишеней. В связи с этим целью исследования явилась оценка влияния препарата ВВИГ на цитотоксичность NK-клеток к клеткам-мишеням линии К-562 и клеткам трофобласта линии JEG-3.
Материалы и методы
Клеточные линии
Использовали клетки линии NK-92 (ATCC, США). Эта клеточная линия выделена из костного мозга человека со злокачественной неходжкинской лимфомой. По основным фенотипическим и функциональным параметрам клетки линии NK-92 не отличаются от активированных NK-клеток [17]. Клетки культивировали в полной среде α-МЕМ («Биолот», Россия) с добавлением IL-2 (500 Ед/мл), согласно рекомендациям ATCC.
В качестве мишеней были использованы клетки хронической миелогенной лейкемии человека линии К-562 (ATCC, США) и клетки трофобласта линии JEG-3 (ATCC, США). Клетки линии К-562 культивировали в среде RPMI-1640 («Биолот», Россия) с добавлением 10% инактивированной FCS, 100 Ед/мл пенициллина и 2 мМ L-глутамина. Клетки линии К-562 не экспрессируют молекулы локуса MHC-I [18], в связи с чем эти клетки используют в качестве стандартных клеток-мишеней для оценки цитотоксичности NK-клеток.
Также использовали клетки линии JEG-3, по основным фенотипическим и функциональным параметрам соответствующие клеткам вневорсинчатого трофобласта [19]. Клетки культивировали в полной среде DMEM («Биолот», Россия), согласно рекомендациями ATCC.
Использовали также мононуклеары, которые выделяли из периферической крови стандартным методом центрифугирования в градиенте плотности фиколла ρ=1,077 («Биолот», Россия).
Пациенты
В исследование включены 2 группы женщин: здоровые небеременные женщины репродуктивного возраста с регулярным менструальным циклом без предшествующих беременностей (группа 1, n=10) и здоровые небеременные женщины репродуктивного возраста с регулярным менструальным циклом, у которых ранее были беременности, закончившиеся родами в срок, и в анамнезе отсутствуют неразвивающиеся беременности и/или самопроизвольные выкидыши (группа 2, n=12). Периферическую кровь собирали в секреторной фазе менструального цикла после контроля прохождения овуляции с помощью УЗИ. Для обеих групп были приняты одинаковые критерии исключения: наружный генитальный эндометриоз (3–4 стадия), антифосфолипидный синдром, аномалии развития половых органов, острые и обострение хрон...
