Мозаицизм половых хромосом в гонадах у больных с преждевременной недостаточностью яичников

Цель исследования. Изучение половых хромосом в интерфазных ядрах клеток гонад у больных с преждевременной недостаточностью яичников (ПНЯ) и дисгенезией гонад.
Материал и методы. Основная группа – 29 пациенток с ПНЯ и нормальным кариотипом в лимфоцитах, группа сравнения – 2 пациентки с ПНЯ и нарушениями кариотипа (47,XXY и 45,Х/46,ХХ) по лимфоцитам и 3 пациентки с дисгенезией гонад (2 – с нормальным кариотипом, 1 имела полную форму 45,Х). Группа контроля – 10 аутопсийных образцов яичниковой ткани молодых женщин. Использовали флуоресцентную in situ гибридизацию.
Результаты исследования. У 72,4% (21/29) больных с ПНЯ основной группы, у 1 (50%) пациентки с ПНЯ группы сравнения и у всех 3 больных с дисгенезией гонад обнаружены различные виды гонадного мозаицизма по половым хромосомам. Среди 10 контрольных яичников тканевой мозаицизм обнаружен только в 2 (20%) случаях, что статистически значимо меньше, чем у больных с недостаточностью яичников (р < 0,003). У 1 (3,4%) пациентки с ПНЯ и у 2 (66,6%) больных с дисгенезией гонад в ткани яичников обнаружено от 2 до 50% клеток с Y-хромосомой, не выявленных в лимфоцитах.
Заключение. Механизмом преждевременного истощения фолликулярного пула у больных с ПНЯ, как и при различных формах дисгенезии гонад, может быть скрытый гонадный мозаицизм по половым хромосомам.

Преждевременная недостаточность яичников (ПНЯ) – патологическое состояние, характеризующееся прекращением функциональной активности яичников у женщин в молодом возрасте (до 40 лет)
и проявляющееся вторичной аменореей, высокими уровнями гонадотропинов в крови, бесплодием
и симптомами эстрогенного дефицита. В отсутствие хирургической овариэктомии, химиотерапии или
лучевой терапии на область малого таза синдром ПНЯ охватывает гетерогенный спектр состояний,
включающий стертые формы дисгенезии гонад, резистентность к гонадотропинам и аутоиммунное
поражение яичников. При этом как зарубежные, так и отечественные авторы признают, что в большинстве случаев причина данного заболевания остается неизвестной и ПНЯ, таким образом, у многих пациентов рассматривается как идиопатическое заболевание [17, 18]. Согласно ранее проведенным исследованиям в России [1, 5] по выявлению различных форм ПНЯ, в 4,2–5,6% случаев наблюдаются численные аномалии половых хромосом, включая и мозаичные их варианты, в 13,9–26,4%
обнаруживаются генные нарушения (неслучайная инактивация Х-хромосомы или премутация гена
FMR1), в 14,9–15,2% выявляется аутоиммунная этиология, а на долю идиопатической формы ПНЯ
приходится 52,8–67,0% случаев [1, 5]. Несмотря на это, встречаемость семейных форм заболевания примерно у каждой 3–4-й пациентки приводит к выводу о большей значимости генетических
факторов в генезе преждевременного истощения фолликулярного пула, а появление и широкое внедрение новых молекулярно-цитогенетических методов на сегодняшний день позволяют значительно расширить диапазон знаний о данной патологии.

Исходя из всего выше сказанного, целью нашего исследования явилось изучение половых хромосом в интерфазных ядрах клеток гонад у больных с ПНЯ и дисгенезией гонад с помощью флуоресцентной in situ гибридизации. “ ‚ ‡

Материал и методы исследования

В ранее опубликованной нами работе описаны результаты исследования половых хромосом в гонадах у 24 пациенток с ПНЯ [4]. В настоящем исследовании мы расширили основную группу больных с ПНЯ и нормальным кариотипом в лимфоцитах до 29 человек (средний возраст – 31,3±4,9 года), а также изучили половые хромосомы у 2 пациенток с ПНЯ и нарушенным кариотипом в лимфоцитах (средний возраст – 29,0 ±3,0 года): у одной больной выявлен кариотип 47,ХХY, у другой – мозаицизм 45,Х/46,ХХ [5]. Кариотип в лимфоцитах исследовали с помощью стандартного цитогенетического анализа (G-окраска). Средняя продолжительность аменореи у больных в основной группе составила 4,4±3,6 года, средние уровни ФСГ в сыворотке крови – 114,1±34,9 МЕ/л, средние уровни эстрадиола – 70,7±43,9 пмоль/л. Дополнительно половые хромосомы в клетках гонад были исследованы у 3 пациенток с первичной гипергонадотропной аменореей (средний возраст – 27±8 лет), среди которых у 2 пациенток выявлен нормальный кариотип (46,ХХ) в лимфоцитах и у 1 – регулярная форма моносомии Х-хромосомы. Группа контроля была представлена 10 аутопсийными образцами яичниковой ткани, полученными от молодых женщин в возрасте 21–35 лет (в среднем 29,1±5,6 года), погибших при чрезвычайных обстоятельствах. Гистологическое исследование яичниковой ткани подтвердило наличие в ней желтых тел и нормального числа фолликулов, находившихся на разных стадиях развития, что позволило косвенно судить о нормальной функциональной активности данных яичников. У трех больных с ПНЯ дополнительно были исследованы половые хромосомы в клетках эндометрия, и у двух больных (у одной пациентки с ПНЯ и у одной больной с синдромом Шерешевского–Тернера [СШТ]) проведен FISH-анализ половых хромосом в лимфоцитах. Подготовку материала гонадной ткани и проведение FISH анализа осуществляли аналогично описанным ранее [4].

Статистический анализ осуществлен с помощью расчета критерия хи-квадрата и двухвыборочного
t-теста с различными дисперсиями. В качестве статистически значимых учитывали связи с параметром p<0,05. ‡

Результаты исследования

В результате исследования половых хромосом в ткани яичников среди 29 больных с ПНЯ основной группы у 72,4% (21/29) пациенток обнаружены различные типы гонадного мозаицизма по половым хромосомам (см. таблицу).

Анализ распределения клеточных клонов в яичниках у этих больных позволил установить, что у 51,7% из них (15/29) в гонадной ткани имела место одна анеуплоидная клеточная линия, представленная в 31% (9/29) случаев моносомией Х и в 20,7% (6/29) случаев трисомией Х-хромосомы, при этом анеуплоидия была обнаружена в 2–10% и 1–10% проанализированных клеток соответственно. У 20,7% (6/29) оставшихся пациенток был обнаружен мозаицизм с наличием нескольких различных клеточных линий с аномальным хромосомным набором. У 10,3% (3/29) пациенток выявлено наличие двух аномальных клеточных линий: в двух случаях – сочетание моносомии с трисомией Х в 13% клеток и в одном случае – сочетание трисомии с тетрасомией Х-хромосомы в 11% клеток яичника. У 10,3% (3/29) других ...

Жахур Н.А., Марченко Л.А., Курило Л.Ф., Карселадзе А.И., Бутарева Л.Б., Строганова А.М.