Неинвазивная пренатальная диагностика анеуплоидий методом высокопроизводительного секвенирования (NGS) в группе женщин высокого риска

Цель исследования. Оценить возможность применения метода высокопроизводительного секвенирования для неинвазивной пренатальной диагностики анеуплоидий плода.
Материал и методы. В исследование включены 200 женщин в сроке беременности 10–20 недель (медиана – 14 недель). Результаты неинвазивной пренатальной диагностики оценивали с помощью биоинформатической обработки данных секвенирования ДНК, выделенной из плазмы крови беременных женщин, для сравнения покрытия внутри образца применяли T-test. В качестве метода сравнения использовали цитогенетическое исследование – G-окрашивание клеток ворсин хориона, плаценты, амниотической жидкости по стандартному протоколу.
Результаты. При сравнении с инвазивной пренатальной диагностикой были получены идентичные результаты в 196 случаях из 200. Достоверно определены 17 из 19 образцов с трисомией 21, 8 из 8 образцов с трисомией 18, 1 образец с трисомией 16, 1 образец с трисомией 13 и 4 из 4 образцов с моносомией X. Ложноотрицательные результаты (2 образца с трисомией 21) были получены для образцов с низким содержанием фетальной ДНК, а два ложноположительных результата – 1 по трисомии 13 и 1 по моносомии Х, вероятно, были обусловлены плацентарным мозаицизмом.
Заключение. Учитывая полученную высокую чувствительность и специфичность для оценки анеуплоидий по 21-й, 18-й и X хромосомам, а также определения пола плода (наличие хромосомы Y), данный тест может быть рекомендован для пренатального скрининга.

Хромосомные аномалии (ХА), в частности, анеуплоидии по 21-й и 18-й хромосомам, являются одной из ведущих причин перинатальной смертности и детской инвалидности в развитых странах (Информационный бюллетень ВОЗ № 370). Исследования последних лет показали, что анеуплоидии являются причиной около 60,0% спорадических выкидышей [1]. Анеуплоидная беременность часто сопровождается угрожающим выкидышем, неоднократными кровотечениями, заканчивается преждевременными родами. Инвазивные методы пренатальной диагностики в подобных клинических ситуациях противопоказаны.

Существующий на современном этапе скрининг беременных основывается на данных ультразвукового исследования, определении материнских сывороточных маркеров, компьютерного анализа. На основании результатов скрининга выделяют женщин группы высокого риска, которым показано инвазивное обследование (Приказ Минздрава России от 12 ноября 2012г. № 572н). Инвазивные процедуры – биопсия ворсин хориона, амниоцентез, реже кордоцентез, с последующим цитогенетическим исследованием являются диагностическим «золотым» стандартом. Проведение инвазивных процедур требует тщательного учета противопоказаний, в связи с риском развития осложнений вплоть до самопроизвольного прерывания беременности в 1–2% случаев. Вместе с тем, только однозначный результат обследования на наличие анеуплоидии плода позволяет определить рациональную тактику ведения осложненной беременности. После открытия явления циркуляции в материнском кровотоке ДНК плода [2] был разработан и в последние годы активно внедряется метод неинвазивной пренатальной диагностики анеуплоидий (Non Invasive Prenatal Test – NIPT), доступный начиная с 10–11-й недели беременности [3–5]. Одним из немногих ограничений NIPT на сегодняшний день является высокая стоимость теста, от 460 евро (373 фунтов) за одно исследование [3, 4, 6]. Однако разработка отечественных тест-систем на основе высокопроизводительного секвенирования (NGS-next-generation sequencing) может существенно снизить стоимость анализа.

Таким образом, цель настоящего исследования – оценить возможность применения метода высоко­производительного (полупроводникового) секвенирования для неинвазивной пренатальной диагностики анеуплоидий плода.

Материал и методы исследования

Обследованы 200 женщин с высоким риском хромосомной патологии плода, обусловленным возрастом беременной, изменениями в уровнях сывороточных маркеров, особенностями фенотипа плода. Обследование было проведено в сроках беременности от 10 до 20 недель (медиана – 14 недель) и включало: скрининг I и II триместров беременности – эхография, определение содержания сывороточных маркеров, компьютерный анализ; инвазивные процедуры; цитогенетическое исследование. Внутриматочные вмешательства с целью получения хориона, плаценты, амниотической жидкости выполняли в 11–14 недель (n=120) или в 17–20 недель (n=80) в связи с противопоказаниями к проведению в ранние сроки беременности или поздним обращением женщины. У всех женщин было получено согласие на инвазивную пренатальную диагностику (биопсия ворсин хориона, плаценты, амниоцентез) и получение крови из вены для молекулярного анализа. Перед проведением инвазивной пренатальной диагностики у женщин из периферической вены аспирировали 10,0 мл крови в 2 пробирки с ЭДТА.

Полученный материал анализировали с помощью цитогенетического и молекулярно-генетического методов. Кариотип плода устанавливали с помощью цитогенетического исследования (G-окрашивание) клеток ворсин хориона, плаценты, амниотической жидкости по стандартному протоколу [7]. В периферической крови женщины определяли наличие или отсутствие у плода анеуплоидий, а ...

Сухих Г.Т., Каретникова Н.А., Баранова Е.Е., Шубина Е.С., Коростин Д.О., Екимов А.Н., Парсаданян Н.Г., Гус А.И., Бахарев В.А., Трофимов Д.Ю., Воеводин С.М., Тетруашвили Н.К.