Мать и дитя №3 (6) / 2016

Новые подходы к проведению пренатального скрининга хромосомной патологии: ДНК-скрининг по крови матери

23 сентября 2016

1) ФГБУ «Научный центр акушерсtтва, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва;
2) Биологический факультет ФГБОУ «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», Москва

Хромосомные анеуплоидии – одна из ведущих причин репродуктивных потерь, неонатальной смертности и детской инвалидности. Для выявления группы риска по данной патологии используется комбинированный скрининг беременных, основывающийся на данных УЗИ и определении материнских сывороточных маркеров. Однако его точность недостаточно высока, и сегодня необходима разработка более современных неинвазивных скрининговых методов.

Наиболее перспективным в данном направлении является неинвазивный пренатальный метод скрининга анеуплоидий, основанный на анализе внеклеточной ДНК плода в крови матери (ДНК-скрининг). ДНК-скрининг может проводиться с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования с последующим статистическим биоинформационным анализом. В большинстве случаев ДНК плода циркулирует в крови матери в достаточном для анализа количестве (более 4–5%) начиная с 10–11 недель беременности и не детектируется уже через сутки после родов. Это позволяет осуществлять ДНК-скрининг, в том числе у повторно беременных женщин. Неинвазивный пренатальный ДНК-скрининг анеуплоидий плода по крови матери, в отличие от применяемых в настоящее время методов скрининга, является прямым методом исследования и потенциально может служить эффективным инструментом выявления хромосомных анеуплоидий плода у беременных женщин.

Материал и методы исследования

Впервые в России оценка эффективности использования данной медицинской технологии для диагностики анеуплоидий плода в группе беременных высокого риска описана в работе Г.Т. Сухих и соавт. [2]. К настоящему времени в НЦАГиП им. В.И. Кулакова с помощью технологии неинвазивного ДНК-скрининга по крови матери обследованы 259 женщин группы высокого риска (выборка 1), направленных на пренатальную инвазивную диагностику с целью проведения кариотипирования плода.

Все беременные имели высокий риск хромосомной патологии плода, обусловленный возрастом, изменениями в уровнях сывороточных маркеров, особенностями фенотипа плода.

Забор крови для ДНК-скрининга осуществляли на сроке беременности 10–20 недель (медиана составила 14 недель). Обследование также включало: скрининг I–II триместров беременности – УЗИ, определение материнских сывороточных маркеров, компьютерный анализ, а также инвазивные процедуры с последующим кариотипированием. Внутриматочные вмешательства с целью получения хориона, плаценты, амниотической жидкости выполняли в 11–14 недель или в 17–20 недель в связи с противопоказаниями к проведению в ранние сроки беременности или поздним обращением женщины. У всех женщин было получено согласие на инвазивную пренатальную диагностику (биопсия ворсин хориона, плаценты, амниоцентез) и забор крови из вены для ДНК-скрининга. Перед проведением инвазивной пренатальной диагностики у женщин из периферической вены аспирировали 10,0 мл крови.

ДНК-скрининг анеуплоидий плода по крови матери проводили следующим образом. На первом этапе из крови женщины выделяли плазму. На втором этапе выделяли внеклеточную ДНК, содержащую материнскую и плодовую фракции. В последующем последовательно осуществляли приготовление библиотек ДНК для полупроводникового секвенирования, эмульсионную ПЦР и высокопроизводительное секвенирование (NGS) на приборе IonProton (LifeTechnologies ThermoFisher, США). Результаты оценивали с помощью биоинформатической обработки данных секвенирования ДНК. Достаточным считали содержание плодовой ДНК не менее 4%.

Оценку эффективности использования данной медицинской технологии для диагностики основных трисомий плода в смешанной группе беременных (выборка 2) проводили в рамках совместных исследований с МГУ им. М.В. Ломоносова. Были обследованы 270 женщин, из которых 93 имели высокий риск, обусловленный возрастом беременной, изменениями в уровнях сывороточных маркеров, особенностями фенотипа плода, и 177 женщин с низким риском хромосомной патологии у плода.

У всех женщин было получено информированное согласие на забор крови из вены для использования их образцов в научно-исследовательской работе. Медиана возраста женщин на момент беременности составляла 35,1 года, мода 37,5 года. Женщины проходили стандартное обследование, которое включало: скрининг I–II триместра беременности – УЗИ, определение содержания сывор...

Г.Т. Сухих, Д.Ю. Трофимов, И.Ю. Барков, А.Е. Донников, Е.С. Шубина, Д.О. Коростин, А.Н. Екимов, А.Ю. Гольцов, В.А. Бахарев, Н.А. Каретникова, П.И. Боровиков, Н.К. Тетруашвили, Л.В. Ким, А.С. Гата, С.В. Павлович, К.Г. Скрябин, Е.Б. Прохорчук, А.М. Мазур, К.С. Пантюх
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.