Мать и дитя №3 (6) / 2016
Новые подходы к проведению пренатального скрининга хромосомной патологии: ДНК-скрининг по крови матери
1) ФГБУ «Научный центр акушерсtтва, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва;
2) Биологический факультет ФГБОУ «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», Москва
Хромосомные анеуплоидии – одна из ведущих причин репродуктивных потерь, неонатальной смертности и детской инвалидности. Для выявления группы риска по данной патологии используется комбинированный скрининг беременных, основывающийся на данных УЗИ и определении материнских сывороточных маркеров. Однако его точность недостаточно высока, и сегодня необходима разработка более современных неинвазивных скрининговых методов.
Наиболее перспективным в данном направлении является неинвазивный пренатальный метод скрининга анеуплоидий, основанный на анализе внеклеточной ДНК плода в крови матери (ДНК-скрининг). ДНК-скрининг может проводиться с использованием технологии высокопроизводительного секвенирования с последующим статистическим биоинформационным анализом. В большинстве случаев ДНК плода циркулирует в крови матери в достаточном для анализа количестве (более 4–5%) начиная с 10–11 недель беременности и не детектируется уже через сутки после родов. Это позволяет осуществлять ДНК-скрининг, в том числе у повторно беременных женщин. Неинвазивный пренатальный ДНК-скрининг анеуплоидий плода по крови матери, в отличие от применяемых в настоящее время методов скрининга, является прямым методом исследования и потенциально может служить эффективным инструментом выявления хромосомных анеуплоидий плода у беременных женщин.
Материал и методы исследования
Впервые в России оценка эффективности использования данной медицинской технологии для диагностики анеуплоидий плода в группе беременных высокого риска описана в работе Г.Т. Сухих и соавт. [2]. К настоящему времени в НЦАГиП им. В.И. Кулакова с помощью технологии неинвазивного ДНК-скрининга по крови матери обследованы 259 женщин группы высокого риска (выборка 1), направленных на пренатальную инвазивную диагностику с целью проведения кариотипирования плода.
Все беременные имели высокий риск хромосомной патологии плода, обусловленный возрастом, изменениями в уровнях сывороточных маркеров, особенностями фенотипа плода.
Забор крови для ДНК-скрининга осуществляли на сроке беременности 10–20 недель (медиана составила 14 недель). Обследование также включало: скрининг I–II триместров беременности – УЗИ, определение материнских сывороточных маркеров, компьютерный анализ, а также инвазивные процедуры с последующим кариотипированием. Внутриматочные вмешательства с целью получения хориона, плаценты, амниотической жидкости выполняли в 11–14 недель или в 17–20 недель в связи с противопоказаниями к проведению в ранние сроки беременности или поздним обращением женщины. У всех женщин было получено согласие на инвазивную пренатальную диагностику (биопсия ворсин хориона, плаценты, амниоцентез) и забор крови из вены для ДНК-скрининга. Перед проведением инвазивной пренатальной диагностики у женщин из периферической вены аспирировали 10,0 мл крови.
ДНК-скрининг анеуплоидий плода по крови матери проводили следующим образом. На первом этапе из крови женщины выделяли плазму. На втором этапе выделяли внеклеточную ДНК, содержащую материнскую и плодовую фракции. В последующем последовательно осуществляли приготовление библиотек ДНК для полупроводникового секвенирования, эмульсионную ПЦР и высокопроизводительное секвенирование (NGS) на приборе IonProton (LifeTechnologies ThermoFisher, США). Результаты оценивали с помощью биоинформатической обработки данных секвенирования ДНК. Достаточным считали содержание плодовой ДНК не менее 4%.
Оценку эффективности использования данной медицинской технологии для диагностики основных трисомий плода в смешанной группе беременных (выборка 2) проводили в рамках совместных исследований с МГУ им. М.В. Ломоносова. Были обследованы 270 женщин, из которых 93 имели высокий риск, обусловленный возрастом беременной, изменениями в уровнях сывороточных маркеров, особенностями фенотипа плода, и 177 женщин с низким риском хромосомной патологии у плода.
У всех женщин было получено информированное согласие на забор крови из вены для использования их образцов в научно-исследовательской работе. Медиана возраста женщин на момент беременности составляла 35,1 года, мода 37,5 года. Женщины проходили стандартное обследование, которое включало: скрининг I–II триместра беременности – УЗИ, определение содержания сывор...
