Оценка действия препарата «Эпиген Интим» на бактериальные пленки, сформированные вагинальными микроорганизмами in vitro

Цель: Оценка действия in vitro препарата спрей «Эпиген Интим» 0,1% на бактериальные пленки, сформированные вагинальными микроорганизмами.
Материалы и методы: Исследовано 72 клинических изолята чистых культур микроорганизмов, выделенных из вагинального биотопа: G. vaginalis (3 изолята), E. faecalis (9 изолятов), E. coli (18 изолятов), K. pneumoniae (15 изолятов), K. aerogenes (3 изолята), L. crispatus (3 изолята), S. pyogenes (3 изолята), 
A. baumannii (3 изолята), S. aureus (3 изолята), C. albicans (3 изолята), E. faecium (3 изолята), S. agalactiae (3 изолята), L. acidophilus (3 изолята). Для культивирования, хранения и дальнейшего исследования использовали плотные и жидкие селективные питательные среды. Идентификацию микроорганизмов проводили методом латекс-агглютинации и с использованием MALDI-TOF масс-спектрометрии (Bruker Microflex). Способность к образованию биопленок оценивали по модифицированному протоколу Christensen et al. (1985).
Для оценки действия на сформированные бактериальные пленки использовали спрей «Эпиген Интим» 0,1%, содержащий активированную глицирризиновую кислоту (0,1 г на 100 мл). 
Результаты: Из 72 клинических изолятов вагинальных микроорганизмов 38 показали способность образовывать бактериальные пленки (G. vaginalis, K. pneumoniae, E. coli, E. faecium). Тестируемые клинические изоляты L. crispatus, L. acidophilus, C. albicans, S. agalactiae, S. pyogenes и другие (34 изолята из 72) биопленки не образовывали. Таким образом, 53% микроорганизмов вагинального биотопа оказались способными образовывать биопленки. Именно эти клинические изоляты микроорганизмов были включены в исследование. Препарат спрей «Эпиген Интим» проявил высокую эффективность в отношении 34 из 38 изолятов микроорганизмов, образующих биопленки, что составило 89,48%. На биопленки, сформированные 4 изолятами микроорганизмов (2 изолята K. pneumoniae, E. coli и E. faecalis), препарат спрей «Эпиген Интим» 0,1% не оказал разрушающего действия. 
Заключение: Препарат спрей «Эпиген Интим» 0,1%, содержащий в своем составе активированную глицирризиновую кислоту, оказывает разрушающее действие на биопленки, образованные вагинальными микроорганизмами, такими как G. vaginalis, K. pneumoniae, E. coli, E. faecium, с эффективностью in vitro 89,48%. Следует подчеркнуть, что снижение оптической плотности (ОП) биопленки более чем в 3 раза указывает на разрушающее биопленки действие препарата. Для 34 изолятов микроорганизмов коэффициент изменения ОП после воздействия препаратом спрей «Эпиген Интим» 0,1% составил от 3,66 до 743.

Вклад авторов: Савичева А.М. – обзор публикаций по теме статьи, анализ полученных данных, одобрение окончательной версии статьи; Шалепо К.В., Спасибова Е.В. – проведение исследования, написание рукописи; Будиловская О.В., Хуснутдинова Т.А., Крысанова А.А., Чеберя А.С., Чеберя А.Р. – редактирование текста, одобрение окончательной версии статьи.
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Финансирование: Работа выполнена в рамках инициативной темы. 
Одобрение Этического комитета: Исследование одобрено локальным этическим комитетом ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д.О. Отта», протокол № 131 от 28.11.2023.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Шалепо К.В., Спасибова Е.В., Будиловская О.В., Крысанова А.А., Хуснутдинова Т.А., Чеберя А.С., Чеберя А.Р., Савичева А.М. 
Оценка действия препарата «Эпиген Интим» на бактериальные пленки, сформированные вагинальными микроорганизмами in vitro.
Акушерство и гинекология. 2024; 2: 125-133
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2024.30

Бактерии, продуцирующие биопленки, являются серьезной проблемой во всех областях медицины во всем мире. Образование устойчивых бактериальных, грибковых или смешанных ассоциаций и окружающего их органического матрикса (биопленок) представляет собой универсальный механизм формирования резистентности микроорганизмов к различным антимикробным препаратам. Иными словами, биопленки представляют собой структурированный консорциум бактериальных и/или грибковых клеток, окруженных полимерным матриксом собственного производства [1]. Биопленки на слизистой влагалища блокируют воспалительный ответ женского организма, снижают активность иммуноцитов, позволяя бактериям достигать высоких концентраций. Нарушение экосистемы влагалища у женщин репродуктивного возраста является одной из наиболее актуальных проблем в акушерско-гинекологической практике [2].

Часто заболевание не ограничивается только нижними отделами половых путей. Восходящая инфекция приводит к развитию воспалительных заболеваний шейки матки (цервицит), а также полости матки (эндометрит) и ее придатков (сальпинго­офорит). У пациенток с вагинальными инфекциями значительно повышена частота инфекционных осложнений после выполнения гинекологических манипуляций (аборт, гистероскопия, лапароскопия). Неудачные попытки ЭКО наблюдаются чаще у женщин с сопутствующим бактериальным вагинозом [3].

Инфекции, вызванные микроорганизмами, способными образовывать пленки, плохо поддаются лечению антимикробными препаратами и часто рецидивируют, несмотря на защитные механизмы макроорганизма. Состав биопленок может быть монобактериальным и смешанным. Широкий спектр молекулярных механизмов способствует высокой степени сопротивляемости, характерной для биопленочных сообществ. Эти механизмы включают, среди прочего, взаимодействие противомикробных препаратов с компонентами матрикса биопленок, снижение скорости роста и различные действия специфических генетических детерминант устойчивости и толерантности к препаратам. По отдельности каждый из этих механизмов лишь частично объясняет повышенную резистентность к противомикробным препаратам, наблюдаемую в биопленках. Однако, действуя согласованно, эти защитные механизмы помогают обеспечить выживание микробных клеток в составе биопленки даже перед лицом самых агрессивных схем антимикробного лечения [4].

Поэтому проводится поиск альтернативных препаратов, которые могут использоваться в качестве дополнительных средств в комплексной терапии биопленочных инфекций. Одним из таких средств может рассматриваться экстракт корня солодки (Glycyrrhiza glabra). Применение корня солодки в качестве лечебного средства известно с давних времен. Например, в Кодексе Хаммурапи (2100 г. до н.э.) он упоминается, а китайская медицина в течение тысячи лет признает его средством улучшения качества жизни.

В корневище и корнях солодки содержатся тритерпеноидные сапонины (4–20%). Важным сапонином корня солодки является водорастворимая молекула – глицирризин, соли глицирризиновой кислоты (глицирризиновая кислота (ГК) также известна как глицирретиновая, гликозидная кислота, 18-β-глицирретиновая кислота и гликозид глицирретиновой кислоты) [5].

ГК, выделенная из корней солодки, является основным биоактивным ингредиентом, обладающим широким спектром биологической активности, включая противовоспалительное, противовирусное, противоязвенное, противоопухолевое и гепатопротекторное действие. Активированная ГК является действующим веществом препарата спрей «Эпиген Интим» 0,1%.

Целью исследования является оценка in vitro действия препарата спрей «Эпиген Интим» 0,1% на бактериальные пленки, сформированные вагинальными микроорганизмами.

Материалы и методы

В исследование включены 72 клинических изолята чистых культур микроорганизмов, выделенных из вагинального биотопа: G. vaginalis (3 изолята), E. faecalis (9 изолятов), E. coli (18 изолятов), K. pneumoniae (15 изолятов), K. aerogenes (3 изолята), L. crispatus (3 изолята), S. pyogenes (3 изолята), A. baumannii (3 изолята), S. aureus (3 изолята), C. albicans (3 изолята), E. faecium (3 изолята), S. agalactiae (3 изолята), L. acidophilus (3 изолята).

Для культивирования, хранения и дальнейшего исследования использовали плотные и жидкие питательные среды: кровяной агар с 5% дефибринированной крови (КА), среду Сабуро (агар и бульон), триптиказо-соевый агар (ТСА), триптиказо-соевый бульон (ТСБ), триптиказо-соевый бульон с 10% глицерина (ТСБ-Г), сердечно-мозговой бульон (СМБ), агар Мюллера–Хинтона (МХА) простой и с добавлением 5% дефибринированной крови. Идентификация микроорганизмов проводилась серологическими методами (реакция латекс-агглютинации) и методом MALDI-TOF спектрометрии на масс-спектрометре Bruker Microflex (Германия).

Способность к образованию биопленок была оцен...

Шалепо К.В., Спасибова Е.В., Будиловская О.В., Крысанова А.А., Хуснутдинова Т.А., Чеберя А.С., Чеберя А.Р., Савичева А.М.