Акушерство и Гинекология №4 / 2020
Оценка исходов программ криопереноса в зависимости от транскрипционного профиля генов эндометрия в период предполагаемого «окна имплантации»
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Цель. Оценить исходы программ вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) в зависимости от молекулярно-генетических профилей дифференциально экспрессируемых генов эндометрия.
Материалы и методы. В исследование включены 104 пациентки с трубно-перитонеальным фактором бесплодия, которым была произведена пайпель-биопсия эндометрия в естественном цикле в период «окна имплантации» в цикле перед переносом эмбрионов. Проведено гистологическое и молекулярно-генетическое исследование генов в образцах эндометрия методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией. После переноса размороженных эмбрионов в полость матки были проанализированы результаты исходов программ ВРТ.
Результаты. Установлена зависимость исходов программ ВРТ от экспрессионного «портрета» эндометрия, что позволило выделить дополнительные – промежуточные – этапы развития секреторного эндометрия.
Заключение. Исследование профиля экспрессии мРНК генов LIF, GPX3, AQP3, NDRG1, GNLY, IMPA2, PAEP, IGFBP1, HABP2, DPP4, TAGLN, IL15, POSTN, HLA-DOB, MSX1 позволяет определить наиболее благоприятное время для переноса криоконсервированных/размороженных эмбрионов.
Несмотря на успехи репродуктивной медицины, частота наступления беременности в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) не превышает 35% [1]. Для успешной имплантации необходимо гармоничное взаимодействие зрелой бластоцисты с рецептивным эндометрием. Имплантация – это сложный многоуровневый процесс, включающий адгезию, инвазию бластоцисты и индукцию плацентации. Безусловно, качество эмбриона в значительной степени определяет успех имплантации. Однако при повторных неудачных имплантациях с высоким качеством эмбриона большое внимание уделяется оценке рецептивности эндометрия и процессам синхронизации между развитием бластоцисты и слизистой оболочкой матки.
Известно, что первым и длительное время считавшимся золотым стандартом методом оценки рецептивности эндометрия являлось гистологическое исследование в соответствии с критериями Noyes R.W. [2]. Однако проведенные впоследствии исследования показали, что с помощью гистологических критериев зачастую не удается дифференцировать эндометрий фертильных женщин от бесплодных [3, 4]. Поэтому исследования в поисках новых методов оценки рецептивности эндометрия продолжались.
Одним из последних направлений этой области стало изучение транскриптома генов в тканях эндометрия. В большинстве работ изучали транскриптомы эндометрия в соответствии с гистологической верификацией стадии трансформации эндометрия. Так как считается, что период «окна имплантации» соответствует средней стадии фазы секреции естественного менструального цикла, то основное внимание уделялось этой стадии [5–9]. В результате были предложены возможные кандидаты на роль биомаркеров идентификации «окна имплантации».
Результатом молекулярно-генетических исследований стало внедрение в коммерческую практику двух тестов: ЕRА – Endometrial Receptivity Array [10] и Win-Test [5]. Тест-система ERA включает в себя массив из 238 генов с последующим определением рецептивности эндометрия. В то же время Win-Test основан на оценке экспрессии 11 генов с применением алгоритмов, также позволяющих оценить восприимчивость эндометрия. В России данные разработки для применения в рутинной практике до настоящего времени не распространены.
Условия современных тенденций определяют необходимость проведения дополнительных исследований для оптимизации выбора биомаркеров рецептивности эндометрия и определения их роли в установлении диалога между эндометрием и бластоцистой, которые влияют на наступление и исход беременности.
Цель исследования состояла в оценке исходов программ ВРТ в зависимости от молекулярно-генетических профилей дифференциально экспрессируемых генов в период предполагаемого «окна имплантации».
Материалы и методы
В исследование включены 104 женщины, обратившиеся для проведения программы криопереноса. Была проведена пайпель-биопсия эндометрия на 7–8-й день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ) в естественном цикле. Пик ЛГ определяли с помощью мочевого теста на овуляцию Clear Blue (Unipath Ltd, Великобритания). Пайпель-биопсию эндометрия производили с помощью аспирационной кюретки Pipele de Corner (Laboratorie C.C.D., Франция). Полученный материал был разделен на 2 части: для гистологического и молекулярно-генетического исследования. Материал для изучения экспрессии генов методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) в реальном времени помещали в пробирки с транспортной средой для стабилизации РНК (Стор-экс, ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).
Гистологическое исследование: биоптаты эндометрия фиксировали в течение 24 ч в 10% формалине с фосфатным буфером, с последующим помещением в парафин. Срезы толщиной не более 4–5 мкн окрашивали гематоксилин-эозином и исследовали с помощью светового микроскопа при увеличении от ×50 до ×400.
Молекулярно-генетическое исследование: в полученных образцах эндометрия было проведено изучение экспрессии мРНК генов: GPX3, PAEP, LIF, DPP4, TAGLN, HABP2, IMPA2, AQP3, HLA-DOB, MSX1, POSTN, IGFBP1, IL15, GNLY, NDRG1 методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени.
Образцы тканей размораживали при комнатной температуре, удаляли транспортную среду и выделяли РНК с использованием QIAzol Lysis Reagent и RNeasy Mini Kit (Qi...
