Оценка локальной воспалительной реакции во влагалище по профилю экспрессии мРНК генов цитокинов у беременных накануне родов

Цель исследования. Изучение возможности объективной оценки интенсивности локального воспалительного процесса во влагалище беременных женщин с доношенной беременностью перед родами по профилю экспрессии мРНК генов цитокинов.
Материал и методы. Обследована 101 женщина с доношенной беременностью за 3–10 дней до родов в возрасте от 19 до 40 лет. Группу 1 составили 77 условно здоровых женщин без признаков воспаления влагалища с нормоценозом. Из них 42 жалоб не предъявляли, а 35 пациенток имели обильные выделения из половых путей. Группу 2 составили 24 беременные с клиническими и лабораторными признаками вагинита. Экспрессию мРНК генов цитокинов определяли методом обратной транскрипции и количественной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) в режиме реального времени.
Результаты исследования. Выявлено достоверное увеличение уровня экспрессии мРНК генов IL-1B, TNF, СD45, IL-6, LIF, IL-8, IL-10, IFNG и снижение уровня IL-12A, IL-18, TGF-B1 при вагините по сравнению со здоровыми женщинами. Разработана математическая модель для объективной диагностики локального воспалительного процесса по уровню экспрессии генов IL-1B, IL-8, IL-10 и IL-18.
Заключение. Профиль экспрессии генов цитокинов может быть использован для выявления воспалительной реакции при дисбиотических процессах во влагалище у беременных женщин перед родами с целью профилактики послеродовых осложнений.

Работа частично поддержана Государственными контрактами Минобрнауки РФ №16.522.12.2009 от
29.09.2011 и №16.512.11.2093 от 22.02.2011

Ведущая роль в развитии послеродовых инфекционно-воспалительных заболеваний принадлежит
восходящей бактериальной инфекции влагалища, частота которой в популяции варьируется от 15 до 30% [3, 5]. Вопросы объективной оценки состояния влагалищной микрофлоры у беременной женщины, определение необходимости санации или коррекции биоценоза, профилактики инфекционных осложнений являются актуальными и требуют дальнейшего изучения [6]. Применение молекулярно-генетических методов, основанных на полимеразной цепной реакции с детекцией результатов в режиме реального времени (ПЦР-РВ), позволяет расширить спектр выявляемых микроорганизмов и провести количественное определение доли условно-патогенных микроорганизмов (УПМ) в составе микробиоценоза [1, 4, 7]. В значительной степени
необходимость санации беременных женщин определяется и тяжестью воспалительного процесса. В настоящее время помимо осмотра для оценки степени воспалительного процесса используют микроскопию окрашенных мазков. Результаты данного теста являются субъективными и зависят от квалификации исполнителя. Поэтому вопросы альтернативных способов диагностики воспалительных заболеваний нижних отделов репродуктивной системы женщин остаются актуальными.

Воспалительная реакция возникает вследствие активации клеток иммунной системы в связи с
персистенцией патогенных и УПМ на слизистой оболочке влагалища, что отражается на спектре экспрессируемых клетками цитокинов. Цитокины являются медиаторами взаимодействий клеток иммунной системы хозяина, принимают участие в активации иммунитета, направленного на уничтожение чужеродных микроорганизмов и поэтому могут быть использованы в качестве маркеров воспалительного процесса.

Целью настоящего исследования явилось изучение возможности объективной оценки интенсивности локального воспалительного процесса во влагалище беременных женщин с доношенной беременностью перед родами по профилю экспрессии мРНК генов цитокинов.

Материал и методы исследования

Было выполнено когортное проспективное исследование, охватывающее от 10 до 3 дней до родоразрешения. В исследование включена 101 беременная женщина, взятая под наблюдение при доношенной (37–41 нед) беременности. Критериями исключения из исследования были: наличие ВИЧ-инфекции, сифилиса, гепатитов В и С, ВПЧ, ВПГ, абсолютных патогенов (Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis); женщины с тяжелой экстрагенитальной и акушерской патологией, после хирургической коррекции истмико-цервикальной недостаточности (ИЦН); беременные, которым проводилось лечение вагинальной инфекции в течение 1 мес до данного исследования, и пациентки с преждевременным излитием околоплодных вод.

На основании клинико-лабораторных данных (данные клинического осмотра, состояние микробиоценоза влагалища и местная лейкоцитарная реакция) пациентки были разделены на две группы. Группу 1 составили 77 условно здоровых женщин без жалоб, без клинической картины воспаления влагалища при отсутствии лейкоцитарной реакции, по данным микроскопического исследования. По данным ПЦР-РВ, в составе биоценоза влагалища у всех пациенток данной группы преобладала нормофлора – лактобактерии составляли не менее 80%. В группе 1 у 42 беременных (подгруппа 1А) выделения из половых путей отсутствовали или были умеренными, отсутствовали Сandida spp. и Mycoplasma hominis, а число Ureaplasma spp. не превышало 104 ГЭ/образец. При анализе уровня экспрессии генов цитокинов подгруппу 1А использовали как референс-группу.

У 35 пациенток наблюдались обильные выделения из половых путей (подгруппа 1Б). Среди них
у 8 пациенток Candida spp. и Ureaplasma spp. не были обнаружены, у 16 – выявлена Ureaplasma spp. в количестве более 104 ГЭ/образец, а у 11 — число Candida spp. превышало 103,5 ГЭ/образец, что на фоне отсутствия воспалительной реакции было расценено как бессимптомное носительство грибов.

В группу 2 были включены 24 беременные с признаками воспаления слизистой оболочки влагалища.
У всех пациенток отмечались чувство жжения и зуд наружных половых органов, набухание и гиперемия слизистой оболочки влагалища. У 6 пациенток этой группы наблюдали анаэробный дисбиоз (доля облигатно-анаэробных УПМ превышала 20%), у 9 пациенток на фоне сохраненной нормофлоры выявлена Candida spp. в количестве более 103,5 ГЭ/образце и у 9 женщин отклонений в структуре биоценоза влагалища выявлено не было.

Качественный и количественный состав микробиоты влагалища исследовали с помощью ПЦР-РВ.
Для исследования брали соскобы заднебоковых стенок влагалища в пробирки с физиологическим
раствором. Выделение ДНК проводили с помощью набора реагентов «Проба ГС» («ДНК-Технология»,
Россия). Определение состава микробиоты проводили с помощью набора реагентов «Фемофлор»
(«ДНК-Технология», Россия), согласно инструкции. При количественной оценке биоценоза влагалища учитывали общую бактериальную ма...

Меджидова М.К., Бурменская О.В., Донников А.Е., Непша О.С., Трофимов Д.Ю., Касабулатов Н.М., Тютюнник В.Л., Сухих Г.Т.