Оценка рецептивности эндометрия по уровню малых некодирующих РНК в маточном аспирате у женщин на фоне циклической гормональной терапии

Современные методы диагностики рецептивности эндометрия, введенные в клиническую практику (ERA, Igenomix; ER-Map, iGLS; ERPeak, CooperGenomics), основаны на транскриптомном анализе ткани эндометрия при инвазивном способе его получения, что отменяет перенос эмбриона в том же цикле, что и выполнение биопсии эндометрия. Цель: Оценка рецептивности эндометрия путем количественного определения малых некодирующих (мнк)РНК в маточной жидкости (МЖ) в день переноса криоконсервированного эмбриона (КЭ) на фоне циклической гормональной терапии (ЦГТ) и построение модели логистической регрессии расчета вероятности готовности эндометрия к имплантации эмбриона путем сопоставления транскриптома МЖ от пациенток с положительным и отрицательным исходом программы ВРТ. Материалы и методы: В исследование были включены 54 женщины, которым проводили аспирацию МЖ в объеме 5–50 мкл в зависимости от уровня ее секреции непосредственно перед переносом КЭ с использованием катетера (COOK, Австралия). мнкРНК, выделенные из МЖ набором miRNeasy Serum/Plasma Kit (Qiagen), были проанализированы методом глубокого секвенирования на платформе NextSeq 500/550 (Illumina, USA) c последующей валидацией полученных данных методом количественной ПЦР в реальном времени наборами miScript II RT Kit и miScript SYBR Green PCR Kit (Qiagen, Hilden, Germany). Результаты: Образцы МЖ были классифицированы на 2 группы – «рецептивный эндометрий» и «нерецептивный эндометрий» – в зависимости от результатов проведенной программы ВРТ (наличие и отсутствие имплантации соответственно). По профилю мнкРНК в образцах МЖ и толщине эндометрия на момент переноса эмбриона в полость матки были построены семь моделей логистической регрессии, среди которых наиболее точной является комбинация содержания miR-1180-3p в МЖ и толщины эндометрия (71% чувствительность, 88% специфичность) ввиду отсутствия зависимости включенных в нее переменных по данным корреляционного анализа по Спирмену (r=0,02; p=0,9) и статистической значимости всех входящих в модель коэффициентов (р<0,05). Заключение: Индивидуализация подхода в определении «окна имплантации» при проведении ЭКО на фоне ЦГТ в соответствии с уровнем мнкРНК в МЖ может играть важную роль в повышении эффективности программ ВРТ. Ограничением использования в клинической практике модели логистической регрессии, построенной в настоящем исследовании на обучающей выборке пациенток, является отсутствие информации об имплантационном потенциале переносимой в полость матки бластоцисты. Отрицательный исход программы ВРТ может быть обусловлен не отсутствием рецептивного эндометрия, а сниженным качеством самого эмбриона. Одновременное определение рецептивности эндометрия и имплантационного потенциала эмбриона по профилю мнкРНК приведет к снижению процента ложноотрицательных результатов и улучшению качества модели. Необходимо расширить обучающую выборку и проверить точность построенных моделей на независимой тестовой выборке. Вклад авторов: Тимофеева А.В. – получение экспериментальных данных, написание статьи; Федоров И.С. – получение экспериментальных данных, статистическая обработка данных; Гохберг Я.А. – сбор образцов маточной жидкости, создание клинической базы пациенток; Калинина Е.А. – редактирование статьи. Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Финансирование: Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда в рамках гранта № 22-15-00363 «Эпигенетические и биохимические аспекты патологии беременности при нарушениях инвазивных свойств трофобласта: от ранней диагностики к профилактике материнской и перинатальной заболеваемости» в соответствии с соглашением № 22-15-00363 между Российским научным фондом, руководителем проекта Тимофеевой А.В. и НМИЦ АГП им. В. И. Кулакова о предоставлении гранта на проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований от 13.05.2022 г. Одобрение Этического комитета: Исследование было одобрено локальным Этическим комитетом ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России. Согласие пациентов на публикацию: Пациенты подписали информированное согласие на публикацию своих данных. Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем. Для цитирования: Тимофеева А.В., Федоров И.С., Гохберг Я.А., Калинина Е.А. Оценка рецептивности эндометрия по уровню малых некодирующих РНК в маточном аспирате у женщин на фоне циклической гормональной терапии. Акушерство и гинекология. 2023; 7: 90-102 https://dx.doi.org/10.18565/aig.2023.110

Бесплодие представляет собой глобальную проблему, затрагивающую 10–15% супружеских пар репродуктивного возраста в большинстве стран мира [1, 2]. За последние десятилетия в рамках проведения программ экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) в лечении бесплодия достигнут огромный прогресс по оптимизации условий культивирования эмбрионов [3, 4], оценке морфологических и молекулярно-биологических критериев их качества [5–8], выбору стадии развития эмбриона, подходящей для переноса в полость матки [9, 10]. Но не только жизнеспособность и качество эмбриона играют первостепенную роль в успешной имплантации. Рецептивность эндометрия является решающим фактором в обеспечении имплантации эмбриона в течение определенного периода менструального цикла, называемого «окном имплантации» [11, 12]. Эта средняя стадия секреторной фазы наступает через 6–10 дней после пика лютеинизирующего гормона и регулируется цитокинами, факторами роста и другими молекулами, ключевыми для развития эндометрия и эмбриона [13, 14]. Выявлено, что около 60% повторных неудач вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) обусловлено смещением «окна имплантации» [12, 15, 16]; поэтому определение готовности эндометрия к имплантации эмбриона является важной задачей в области репродукции.

Для определения рецептивности эндометрия были разработаны различные методы, включая инструментальные и инвазивные методы исследования [17]. Согласно данным метаанализа, специфичность и/или чувствительность инструментальных методов исследования по анализу толщины, объема, трехслойности эндометрия, кровотока в эндометрии, гистероскопии не позволяют достоверно оценить рецептивность эндометрия с целью прогнозирования наступления беременности в программах ВРТ [12]. Ультраструктурными маркерами рецептивности эндометрия являются пиноподии, считающиеся предпочтительными местами взаимодействия эмбриона и эндометрия [18, 19]. Кроме того, появление пиноподий совпадает с увеличением экспрессии других биомаркеров «окна имплантации», таких как муцин 1, ингибирующий лейкемию фактор (LIF) и его рецептор (интегрин αVβ3) [20], гомеодомен-содержащий транскрипционный фактор 10 (HOX10) [21]. Оценка числа и формы пиноподий при гистологическом анализе биоптата эндометрия была использована для разработки метода персонализированного переноса эмбрионов [22]. Но во избежание ошибок в подсчете числа пиноподий в образце люминальной поверхности эндометрия необходим микроскопический просмотр не менее 60 областей образца ввиду высокой вариабельности числа пиноподий (от 5 до 20%) [23], что является трудоемким процессом и исключает его использование в рутинной клинической практике.

Использование метода транскриптомного анализа биоптата эндометрия (мРНК и микроРНК) позволило выявлять пациентов со смещением окна имплантации и повысить частоту наступления беременности, особенно в группе с повторными неудачами имплантации в программе ЭКО [24–26]. Несмотря на большую информативность и точность метода транскриптомного анализа в сравнении с гистологическим исследованием биоптата эндометрия, его дороговизна и инвазивность являются препятствиями для рутинного применения в клинической практике.

Альтернативным методом оценки состояния эндометрия является исследование маточной жидкости (МЖ), аспирация которой является минимально инвазивной и безопасной и может быть выполнена непосредственно перед переносом эмбрионов без отрицательного влияния на последующую имплантацию, в отличие от общепринятой биопсии эндометрия [27, 28]. Было выявлено изменение паттерна экспрессии малых некодирующих (мнк)РНК экзосом МЖ в рецептивную стадию в сравнении с прорецептивной стадией секреторной фазы естественного менструального цикла и при контролируемой овариальной стимуляции [29], но связи с наступлением беременности выявить не удалось.

Для минимизации влияния на эндометрий контролируемой овариальной стимуляции [30] нами была выбрана модель переноса эмбриона в криоцикле.

Цель исследования: оценка рецептивности эндометрия путем количественного определения мнкРНК в МЖ в день переноса криоконсервированного эмбриона (КЭ) на фоне циклической гормональной терапии (ЦГТ) и построение модели логистической регрессии расчета вероятности готовности эндометрия к имплантации эмбриона путем сопоставления транскриптома МЖ от пациенток с положительным и отрицательным исходом программы ВРТ.

Материалы и методы

Пациенты

В отделение вспомогательных репродуктивных технологий в лечении бесплодия им. проф. Б.В. Леонова ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» обратились 54 супружеские пары для проведения программы переноса КЭ на фоне ЦГТ. Критериями включения в исследование были возраст пациентов от 29 до 39 лет, нормальный овариальный резерв у женщин с трубно-перитонеальным фактором бесплодия, нормозооспермия или мужской фактор бесплодия без выраженной патозо­оспермии. Критериями невключения в исследование были: 1) наличие верифицированного наружного генитального эндометриоза III–IV стадии; 2...

Тимофеева А.В., Федоров И.С., Гохберг Я.А., Калинина Е.А.