Оценка состава и стабильности микробиоты влагалища у беременных в процессе динамического наблюдения

Цель исследования. Изучить особенности микробиоты влагалища и ее стабильность у женщин в процессе динамического наблюдения в течение беременности.
Материалы и методы. Обследованы 26 женщин в возрасте от 18 до 40 лет на протяжении беременности (в I–III триместрах). Критерии включения: первобеременные женщины в возрасте от 18 до 40 лет с одноплодной беременностью. Критерии исключения: врожденные пороки развития у плода, отягощенная соматическая патология у беременных. Проведено комплексное микробиологическое исследование вагинальной микробиоты.
Результаты. Вагинальные микробные сообщества (community state type, CST) были подразделены на следующие типы: CSTI – L. crispatus; CSTII – L. gasseri; CSTIII – L. iners; CSTIV – L. jensenii; CSTV – доминирование условно-патогенных микроорганизмов. По результатам исследования лидирующими были: CSTII (23,1–42,3%), CSTI (26,9–38,5%) и CSTIV (23,1%), тогда как CSTIII составило 7,7%. У подавляющего большинства (96,2%) беременных видовой состав микроорганизмов оставался относительно постоянным, и только у одной (3,8%) беременной он претерпевал значительные изменения. Анализ исходов беременности показал, что у 20 (76,9%) женщин беременность завершилась в срок рождением живых здоровых детей, у 6 (23,1%) диагностирован преждевременный разрыв плодных оболочек на сроках беременности 27–35 недель. У женщин с преждевременным разрывом плодных оболочек отмечены выраженные дисбиотические изменения вагинальной микрофлоры.
Заключение. Выполнение комплексного микробиологического исследования позволило получить новые сведения о составе микробиоты влагалища у беременных и оценить изменения микробного сообщества, которые могут повлиять на исход беременности. Своевременная коррекция микроэкологических нарушений вагинального биотопа позволит предотвратить развитие инфекционных осложнений во время беременности и в послеродовом периоде. Оценка влагалищной микробиоты при беременности может иметь прогностическую, диагностическую и терапевтическую ценность.

Согласно данным литературы, имеется взаимосвязь состояния вагинальной микробиоты и осложнений беременности [1–3]. Микрофлора влагалища характеризуется разнообразием видового состава и разделяется на облигатную и транзиторную. Колонизационная резистентность вагинального биотопа обеспечивается лактобациллами – резидентной составляющей вагинальной микрофлоры. Транзиторный компонент микрофлоры представлен условно-патогенными микроорганизмами (УПМ), которые в силу конкурентного сдерживания колонизируют влагалище в низких титрах. Под влиянием эндогенных и экзогенных воздействий на организм женщины может происходить нарушение состояния гармоничного равновесия между лактобациллами и УПМ, что приводит к дисбалансу микрофлоры и развитию инфекционного процесса [4, 5]. В литературе сообщается о роли дисбиотических нарушений микробиоценоза влагалища в развитии инфекционных осложнений беременности, родов и послеродового периода [6], их возможной связи с определенными видами лактобацилл и нестабильностью вагинальной микробиоты. Имеются сообщения о том, что состав влагалищной микрофлоры изменяется в зависимости от гестационного срока, а доминирующими в норме являются лактобациллы четырех видов: L. crispatus, L. jensenii, L. gasseri и L. iners [7].

Цель настоящего исследования: изучить особенности микробиоты влагалища и ее стабильность у женщин в процессе динамического наблюдения в течение беременности.

Материалы и методы

Обследованы 26 женщин в возрасте от 18 до 40 лет на протяжении беременности (в I–III триместрах). Критерии включения: первобеременные женщины в возрасте от 18 до 40 лет с одноплодной беременностью. Критерии исключения: врожденные пороки развития у плода, отягощенная соматическая патология у беременных.

Комплексное микробиологическое исследование включало оценку микробиоценоза влагалища по данным микроскопии мазка вагинального отделяемого, окрашенного по Граму, и культурального исследования в соответствии с медицинской технологией «Интегральная оценка состояния микробиоты влагалища. Диагностика оппортунистических вагинитов». Вагинальное отделяемое засевали на стандартные питательные среды. Для выделения факультативно-анаэробных микроорганизмов использовали: колумбийский агар, маннит-солевой агар (Сonda, Испания), среду Эндо и агар Сабуро (ФГУН «ГИЦПМ и Б», Оболенск, Россия). Лактобациллы культивировали на среде лактобакагар (ФГУН «ГИЦПМ и Б», Оболенск, Россия), строгие анаэробы – на прередуцированном агаре Schaedler (Сonda, Испания) с необходимыми добавками. Инкубировали посевы в условиях СО2-инкубатора (Jouan, Франция). Строгие анаэробы и лактобациллы культивировали в анаэробном боксе (Jouan, Франция) в атмосфере трехкомпонентной газовой смеси (N2 – 80%; CO2 – 10%; Н2 – 10%). Видовую идентификацию микроорганизмов проводили методом MALDI TOF MS с использованием времяпролетного масс-спектрометра AutoFlex III c программным обеспечением MaldiBioTyper (BrukerDaltoniks, Германия), который ранее помог идентифицировать 101 выделенный штамм лактобацилл до вида, из которых 76,3% культур были определены в высоком титре (lg score – 1,9–>2) и 23,7% в низком(lg score <1,9).

Статистический анализ. При статистической обработке полученных результатов для оценки значимости различий по частоте встречаемости состояний микробиоты (нормоценоза и нарушения микроценоза) между триместрами использовали метод χ2. Анализ динамики видовой представленности микробиоты проводился с учетом частоты изменения состава по триместрам. Оценивалась доля видов, не меняющихся по представленности от триместра к триместру, для каждой пациентки. Для изучения зависимости количества видов, по-разному изменяющих свою степень обсемененности, от перехода между триместрами проводился расчет точного критерия Фишера для каждой пациентки: проводилось сравнение частоты повышения концентрации видов и понижения (повышение или понижение: бинарный признак) при переходе между триместрами I–II (1-я группа) и между триместрами II–III (2-я группа). Такой расчет проводился для каждой беременной, участвовавшей в исследовании, то есть 26 раз.

Для всех видов анализа статистически значимыми считали значения р<0,05. Статистическая обработка проведена с применением пакета прикладных программ Statistica 7.0 и дополнительных программных разработок на языке Python 2.7 и его библиотек: Sklearn, Skipy, Pandas, Matplotlib.

Для описания данных в статье использовали следующие форматы:

• качественные показатели, представленные в абсолютных (n) и (%) относительных величинах в формате описательной статистики n (%):
• частота выявления различных состояний микробиоты у беременных в процессе дина­мического наблюдения по триместрам;
• частота выявления вагинальных микробных сообществ с разной степенью обсемененности по триместрам;
• частота выявления беременных с относительно стабильным или вариабельным видовым составом микробиоты между триместрами;
• количественные показатели, имеющие отличное от нормального распреде...

Ходжаева З.С., Припутневич Т.В., Муравьева В.В., Гусейнова Г.Э., Горина К.А.