Акушерство и Гинекология №3 / 2015
Оценка значимости молекулярно-генетических маркеров в эндометрии в прогнозировании исхода беременности в программе экстракорпорального оплодотворения
ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва
Цель работы. Изучение профиля экспрессии мРНК генов, участвующих в процессах имплантации в эндометрии женщин в цикле, предшествующем проведению программы ЭКО.
Материал и методы. Всего была обследована 121 пациентка с трубно-перитонеальным фактором бесплодия в возрасте от 24 до 42 лет. В цикле, предшествующем стимуляции суперовуляции, проводилось морфологическое исследования биоптатов эндометрия в период «окна имплантации». На основании результатов морфологического исследования эндометрия женщины были разделены на две группы: I (n=55) –эндометрий у которых соответствовал ранней стадии фазы секреции, II (n=62) – средней стадии секреции, у 4 женщин была диагностирована поздняя стадия фазы пролиферации и они были исключены в связи с малочисленностью группы.
Была проанализирована экспрессия мРНК 36 генов в эндометрии методом обратной транскрипции и количественной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) в режиме реального времени.
Результаты исследования. Выявлены достоверные различия в экспрессии мРНК генов MMP-7, VEGF-A, IL-1b, IL-2, IL-8, IL-18, TNF-a, IL-10, TGF-b в раннюю стадию фазы секреции и экспрессии мРНК IGFBP2 в среднюю стадию фазы секреции у пациенток, у которых наступила биохимическая и клиническая беременность по сравнению с женщинами с отрицательным исходом программы ЭКО. Разработан способ прогнозирования наступления беременности на основе интегральной оценки экспрессии мРНК генов IL-15, MMP-11,VEGF-A.
Одной из значимых причин неудач имплантации в программе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) при переносе морфологически качественных эмбрионов является нарушение рецептивности эндометрия [1]. В результате повреждающего действия инфекционного, дисгормонального, а также сочетанных первичных этиологических факторов в эндометрии формируются патологические изменения, сопровождающиеся нарушением его рецепторного аппарата [2]. В то же время отсутствие органической патологии эндометрия не исключает его функциональную неполноценность, которая в ряде случаев является причиной бесплодия неясного генеза, повторных неудач имплантации (ПНИ), самопроизвольных выкидышей [3, 4].
По готовности принять внедряющуюся бластоцисту выделяют три качественных состояния эндометрия, таких как нейтральная, рецептивная и рефрактерная, или нерецептивная фазы. В период «окна имплантации» для восприятия эмбриона эндометрий имеет характерное морфологическое и функциональное (рецептивное) состояние, инициированное стероидными гормонами, которые, в свою очередь, регулируют экспрессию локально действующих цитокинов, хемокинов, факторов роста и транскрипции [5].
Учитывая ключевое значение морфофункционального состояния эндометрия для успешной имплантации эмбриона, перед проведением программы ЭКО необходима комплексная оценка состояния эндометрия для определения патогенетического лечения и тактики предгравидарной подготовки.
В течение многих десятилетий «золотым стандартом» для определения нарушений секреторной трансформации эндометрия являлись критерии временных гистологических изменений, происходящих в его функциональном слое на протяжении 28-дневного менструального цикла [6]. По критериям R.W. Noyes эндометрий характеризуется как «вне фазы» при несоответствии дню менструального цикла более чем на два дня. Однако в настоящее время значения гистологической структуры эндометрия в установлении причин неудач имплантации недостаточно, оно должно дополняться другими методами исследования [7]. Благодаря достижениям в области молекулярной биологии для поиска оптимальных критериев готовности эндометрия к имплантации на сегодняшний день используются новые высокоинформативные методы молекулярной диагностики.
На данном этапе развития фундаментальной медицины интерес исследователей сконцентрирован на изучении широкого спектра молекулярных факторов, формирующих рецептивность эндометрия [1, 3, 8, 9]. Важная роль отводится семейству молекул клеточной адгезии, цитокинам семейства интерлейкина-6 (IL-6), генам гомеобокса, фактору роста сосудистого эндотелия (VEGF-А), матриксным металлопротеиназам (MMPs) и др. Однако значение ряда потенциальных молекулярно-биологических маркеров в процессе имплантации у женщин изучено мало ввиду морально-этических и технических причин, а большинство исследований в этом направлении выполнены на грызунах и других видах животных [10]. Кроме того, имеющиеся работы до сих пор не нашли клинической интерпретации и ни один из исследованных генов рецептивности не используется в рутинной практике при обследовании и лечении пациенток в программе ЭКО/ИКСИ [8].
Неудачи имплантации по-прежнему остаются приоритетной задачей для ученых в области репродуктивной медицины, решение которой позволит повысить эффективность программы ЭКО, что обосновывает проведение дальнейших исследований в этом направлении.
Целью настоящего исследования стало изучение профиля экспрессии мРНК генов, участвующих в процессах имплантации, в эндометрии пациенток в цикле, предшествующем проведению программы ЭКО.
Материал и методы исследования
Для достижения поставленной цели на базе ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России было проведено когортное проспективное исследование, в которое была включена 121 женщина репродуктивного возраста с трубно-перитонеальным фактором бесплодия, проходившая лечение методом ЭКО в отделении вспомогательных технологий в лечении бесплодия.
Критериями включения в исследование были: возраст от 18 до 42 лет, регулярный менструальный цикл, трубно-перитонеальный фактор бесплодия, сохраненный овариальный резерв (по данным гормонального исследования и ультразвукового исследования органов малого таза (УЗИ), отсутствие патологии эндометрия по данным УЗИ, фертильная или субфертильная сперма супругов. Критериями исключения были: бесплодие, обусловленное иммунологическим фактором (наличие антиспермальных антител), миома матки любых размеров, острые воспалительные заболевания органов малого таза, олигоастенотератозооспермия III и IV степени (по нормативам ВОЗ, 2010 г.),
пороки развития внутренних половых органов, cоматические и психические заболевания, являющиеся противопоказанием для вынашивания беременности и родов. У всех обследованных женщин получено информирование согласие на участие в исследовании.
Всем пациенткам в цикле, предшествующем стимуляции функции яичников, произведена пайпель-биопсия эндометрия с помощью аспирационной кюрет...
