Оценка значимости молекулярно-генетических маркеров в эндометрии в прогнозировании исхода беременности в программе экстракорпорального оплодотворения

27.03.2015
1126

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва

Цель работы. Изучение профиля экспрессии мРНК генов, участвующих в процессах имплантации в эндометрии женщин в цикле, предшествующем проведению программы ЭКО.
Материал и методы. Всего была обследована 121 пациентка с трубно-перитонеальным фактором бесплодия в возрасте от 24 до 42 лет. В цикле, предшествующем стимуляции суперовуляции, проводилось морфологическое исследования биоптатов эндометрия в период «окна имплантации». На основании результатов морфологического исследования эндометрия женщины были разделены на две группы: I (n=55) –эндометрий у которых соответствовал ранней стадии фазы секреции, II (n=62) – средней стадии секреции, у 4 женщин была диагностирована поздняя стадия фазы пролиферации и они были исключены в связи с малочисленностью группы.
Была проанализирована экспрессия мРНК 36 генов в эндометрии методом обратной транскрипции и количественной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) в режиме реального времени.
Результаты исследования. Выявлены достоверные различия в экспрессии мРНК генов MMP-7, VEGF-A, IL-1b, IL-2, IL-8, IL-18, TNF-a, IL-10, TGF-b в раннюю стадию фазы секреции и экспрессии мРНК IGFBP2 в среднюю стадию фазы секреции у пациенток, у которых наступила биохимическая и клиническая беременность по сравнению с женщинами с отрицательным исходом программы ЭКО. Разработан способ прогнозирования наступления беременности на основе интегральной оценки экспрессии мРНК генов IL-15, MMP-11,VEGF-A.

Одной из значимых причин неудач имплантации в программе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) при переносе морфологически качественных эмбрионов является нарушение рецептивности эндометрия [1]. В результате повреждающего действия инфекционного, дисгормонального, а также сочетанных первичных этиологических факторов в эндометрии формируются патологические изменения, сопровождающиеся нарушением его рецепторного аппарата [2]. В то же время отсутствие органической патологии эндометрия не исключает его функциональную неполноценность, которая в ряде случаев является причиной бесплодия неясного генеза, повторных неудач имплантации (ПНИ), самопроизвольных выкидышей [3, 4].

По готовности принять внедряющуюся бластоцисту выделяют три качественных состояния эндометрия, таких как нейтральная, рецептивная и рефрактерная, или нерецептивная фазы. В период «окна имплантации» для восприятия эмбриона эндометрий имеет характерное морфологическое и функциональное (рецептивное) состояние, инициированное стероидными гормонами, которые, в свою очередь, регулируют экспрессию локально действующих цитокинов, хемокинов, факторов роста и транскрипции [5].

Учитывая ключевое значение морфофункционального состояния эндометрия для успешной имплантации эмбриона, перед проведением программы ЭКО необходима комплексная оценка состояния эндометрия для определения патогенетического лечения и тактики предгравидарной подготовки.

В течение многих десятилетий «золотым стандартом» для определения нарушений секреторной трансформации эндометрия являлись критерии временных гистологических изменений, происходящих в его функциональном слое на протяжении 28-дневного менструального цикла [6]. По критериям R.W. Noyes эндометрий характеризуется как «вне фазы» при несоответствии дню менструального цикла более чем на два дня. Однако в настоящее время значения гистологической структуры эндометрия в установлении причин неудач имплантации недостаточно, оно должно дополняться другими методами исследования [7]. Благодаря достижениям в области молекулярной биологии для поиска оптимальных критериев готовности эндометрия к имплантации на сегодняшний день используются новые высокоинформативные методы молекулярной диагностики.

На данном этапе развития фундаментальной медицины интерес исследователей сконцентрирован на изучении широкого спектра молекулярных факторов, формирующих рецептивность эндометрия [1, 3, 8, 9]. Важная роль отводится семейству молекул клеточной адгезии, цитокинам семейства интерлейкина-6 (IL-6), генам гомеобокса, фактору роста сосудистого эндотелия (VEGF-А), матриксным металлопротеиназам (MMPs) и др. Однако значение ряда потенциальных молекулярно-биологических маркеров в процессе имплантации у женщин изучено мало ввиду морально-этических и технических причин, а большинство исследований в этом направлении выполнены на грызунах и других видах животных [10]. Кроме того, имеющиеся работы до сих пор не нашли клинической интерпретации и ни один из исследованных генов рецептивности не используется в рутинной практике при обследовании и лечении пациенток в программе ЭКО/ИКСИ [8].

Неудачи имплантации по-прежнему остаются приоритетной задачей для ученых в области репродуктивной медицины, решение которой позволит повысить эффективность программы ЭКО, что обосновывает проведение дальнейших исследований в этом направлении.

Целью настоящего исследования стало изучение профиля экспрессии мРНК генов, участвующих в процессах имплантации, в эндометрии пациенток в цикле, предшествующем проведению программы ЭКО.

Материал и методы исследования

Для достижения поставленной цели на базе ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России было проведено когортное проспективное исследование, в которое была включена 121 женщина репродуктивного возраста с трубно-перитонеальным фактором бесплодия, проходившая лечение методом ЭКО в отделении вспомогательных технологий в лечении бес­плодия.

Критериями включения в исследование были: возраст от 18 до 42 лет, регулярный менструальный цикл, трубно-перитонеальный фактор бесплодия, сохраненный овариальный резерв (по данным гормонального исследования и ультразвукового исследования органов малого таза (УЗИ), отсутствие патологии эндометрия по данным УЗИ, фертильная или субфертильная сперма супругов. Критериями исключения были: бесплодие, обусловленное иммунологическим фактором (наличие антиспермальных антител), миома матки любых размеров, острые воспалительные заболевания органов малого таза, олигоастенотератозооспермия III и IV степени (по нормативам ВОЗ, 2010 г.),

пороки развития внутренних половых органов, cоматические и психические заболевания, являющиеся противопоказанием для вынашивания беременности и родов. У всех обследованных женщин получено информирование согласие на участие в исследовании.

Всем пациенткам в цикле, предшествующем стимуляции функции яичников, произведена пайпель-биопсия эндометрия с помощью аспирационной кюрет...

Список литературы

  1. Altmäe S., Martínez-Conejero J.A., Salumets A., Simón C., Horcajadas J.A., Stavreus-Evers A. Endometrial gene expression analysis at the time of embryo implantation in women with unexplained infertility. Mol. Hum. Reprod. 2010; 16(3):178-87.
  2. Феоктистов А.А. Маточный фактор в клинике женского бесплодия: автореф. дисс. … канд. мед. наук. М.; 2006.
  3. Mariee N., Li T.C., Laird S.M. Expression of leukaemia inhibitory factor and interleukin 15 in endometrium of women with recurrent implantation failure after IVF; correlation with the number of endometrial natural killer cells. Hum. Reprod. 2012; 27(7):1946-54.
  4. Fukui A., Funamizu A., Yokota M., Yamada K., Nakamua R., Fukuhara R. et al. Uterine and circulating natural killer cells and their roles in women with recurrent pregnancy loss, implantation failure and preeclampsia. J. Reprod. Immunol. 2011; 90(1): 105-10.
  5. Salamonsen L.A., Nie G., Hannan N.J., Dimitriadis E. Society for Reproductive Biology Founders’ Lecture 2009. Preparing fertile soil: the importance of endometrial receptivity. Reprod. Fertil. Dev. 2009; 21(7): 923-34.
  6. Noyes R.W., Hertig A.T., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Fertil. Steril. 1950; 1: 3-25.
  7. Evans G.E., Phillipson G.T., Sin I.L., Frampton C.M., Kirker J.A., Bigby S.M., Evans J.J. Gene expression confirms receptive a potentially endometrium identified by histology in fertile women. Hum. Reprod. 2012; 27(9):2747-55.
  8. Boomsma C.M., Kavelaars A., Eijkemans M.J., Lentjes E.G., Fauser B.C., Heijnen C.J., Macklon N.S. Endometrial secretion analysis identifies a cytokine profile predictive of pregnancy in IVF. Hum. Reprod. 2009; 24(6): 1427-35.
  9. Jee B.C., Suh C.S., Kim K.C., Lee W.D., Kim H., Kim S.H. et al. Expression of vascular endothelial growth factor-A and its receptor-1 in a luteal endometrium in patients with repeated in vitro fertilization failure. Fertil. Steril. 2009; 91(2): 528-34.
  10. Singh M., Chaudhry P., Asselin E. Bridging endometrial receptivity and implantation: network of hormones, cytokines, and growth factors. J. Endocrinol. 2011; 210(1): 5-14.
  11. Mor G., Cardenas I., Abrahams V., Guller S. Inflammation and pregnancy: the role of the immune system at the implantation site. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2011; 1221: 80-7.
  12. Okada H., Tsuzuki T., Shindoh H., Nishigaki A., Yasuda K., Kanzaki H. Regulation of decidualization and angiogenesis in the human endometrium: mini review. J. Obstet. Gynaecol. Res. 2014; 40(5): 1180-7.
  13. Granot I., Gnainsky Y., Dekel N. Endometrial inflammation and effect on implantation improvement and pregnancy outcome. Reproduction. 2012; 144 (6): 661-8.
  14. Shibuya M. Differential roles of vascular endothelial growth factor receptor-1 and receptor-2 in angiogenesis. J. Biochem. Mol. Biol. 2006; 39(5): 469-78.
  15. Tsuzuki T., Okada H., Cho H., Tsuji S., Nishigaki A., Yasuda K., Kanzaki H. Hypoxic stress simultaneously stimulates vascular endothelial growth factor via hypoxia-inducible factor-1α and inhibits stromal cell-derived factor-1 in human endometrial stromal cells. Hum. Reprod. 2012; 27(2): 523-30.
  16. Lockwood C.J., Oner C., Uz Y.H., Kayisli U.A., Huang S.J., Buchwalder L.F. et al. Matrix metalloproteinase 9 (MMP9) expression in preeclamptic decidua and MMP9 induction by tumor necrosis factor alpha and interleukin 1beta in human first trimester decidual cells. Biol. Reprod. 2008; 78(6): 1064-72.
  17. Александрова Н.В., Баев О.Р. Ранние этапы становления системы мать-плацента-плод. Акушерство и гинекология. 2011; 8: 4-10.
  18. Митюрина Е.В., Перминова С.Г., Демура Т.А., Галлямова Е.М. Рецептивность эндометрия в программе экстракорпорального оплодотворения. Акушерство и гинекология. 2014; 2: 14-20.

Об авторах / Для корреспонденции

Маслова Майя Анатольевна, аспирант отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (985) 242-08-40. E-mail: mayay2012@mail.ru
Смольникова Вероника Юрьевна, д.м.н., в.н.с. отделения вспомогательных репродуктивных технологий в лечении бесплодия ФГБУ НЦАГиП
им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (903) 723-08-47. E-mail: centr.eko@mail.ru
Донников Андрей Евгеньевич, к.м.н., с.н.с. лаборатории молекулярно-генетических исследований ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России.
Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-11-83. E-mail: donnikov@dna-technology.ru
Бурменская Ольга Владимировна, к.б.н., н.с. лаборатории молекулярно-генетических исследований ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-11-83. E-mail: bourmenska@mail.ru
Демура Татьяна Александровна, к.м.н., с.н.с. 1-го патологоанатомического отделения ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России.
Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (926) 342-91-97. E-mail:demura-t@yandex.ru
Таболова Виктория Кимовна, аспирант отделения сохранения и восстановления репродуктивной функции ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (918) 827-58-28. E-mail: tabol93@rambler.ru
Корнеева Ирина Евгеньевна, д.м.н., в.н.с. отделения сохранения и восстановления репродуктивной функции ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (903) 593-97-48. E-mail: irina.korneeva@inbox.ru

Полный текст публикаций доступен только подписчикам

Нет комментариев

Комментариев: 0

Вы не можете оставлять комментарии
Пожалуйста, авторизуйтесь