Фарматека №3 (316) / 2016
Оксидативный стресс и экспрессия генов ферментов антиоксидантной защиты в плаценте при преэклампсии
ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва
Представлены результаты исследования по определению уровня окислительного стресса и экспрессии генов ферментов антиоксидантной защиты при преэклампсии (ПЭ) с участием 31 беременной женщины. Все пациентки были разделены на 2 группы: I (основную группу) составили 11 беременных с ПЭ, II (группа сравнения) – 20 здоровых беременных. Показано, что ПЭ сопровождается повышением уровня оксидативного стресса и экспрессии генов глутатионпероксидазы1 и глутатионредуктазы в плаценте.
Окислительный стресс (ОС) обеспечивает иммунологическую толерантность во время беременности. Однако чрезмерно высокий уровень активных форм кислорода (AФК) или недостаток ферментов антиоксидантной защиты может вызывать неизбирательное повреждение биологических молекул, нарушать функции или приводить к клеточной смерти [1]. Так, при преэклампсии (ПЭ) уровень ОС и системного воспаления при ПЭ может изменяться в отличие физиологической беременности [2]. По данным L. Myatt и X. Cui [3], G.J. Burton и соавт. [4], ОС развивается на ранних этапах формирования ПЭ.
Глутатион и ферменты его метаболизма – одна из важнейших антиоксидантных систем, защищающих ткани от воспаления различной природы [5]. Увеличение ОС вызывает значительное усиление экспрессии генов глутатионпероксидазы-1 (ГПО1) и глутатионредуктазы (ГР) [6]. Нехватка ГПО1 во время беременности может вызывать значительное увеличение перекисей липидов, вызывать эндотелиальную дисфункцию и развитие ПЭ [7, 9]. Таким образом, актуально исследование ОС и уровня антиоксидантной защиты в развитии ПЭ.
Материал и методы
В исследование была включена 31 пациентка. Все пациентки были разделены на 2 группы: I (основную группу) составили 11 беременных с ПЭ, II (группа сравнения) – 20 условно здоровых пациенток. Проведены исследования уровня АФК и антиоксидантной защиты с помощью прибора FORM 3000 (Каллегари, Италия) с использованием тестов FORT, FORD соответственно и экспрессии генов методом qPCR.
Критерием включения в исследование для основной группы служила одноплодная беременность, наступившая в естественном цикле, осложненная ПЭ, для группы сравнения – неосложненное течение данной одноплодной беременности, наступившей в естественном цикле.
Критерии исключения были общими: многоплодная беременность, острые воспалительные заболевания, тяжелая экстрагенитальная патология, аутоиммунные и онкологические заболевания.
Выделение и анализ мРНК. Из каждой плаценты было взято по два фрагмента (из средней части, исключая поверхностные слои) для дальнейшего выделения РНК. Ткань помещали в раствор RNAlater для стабилизации РНК и замораживали при -80°С. Перед лизированием образцы нарезали на криостате для обеспечения равномерного лизиса как трофобласта, так и стромальных клеток. Выделение РНК проводили с использованием набора Синтол (ЕХ-515-50), согласно рекомендациям производителя. Обратную транскрипцию для получения кодирующей ДНК ставили при помощи набора Синтол, согласно рекомендациям производителя (Синтол, «ОТ-1»). В исследованиях использовали праймеры к мРНК транскрипта...
