Акушерство и Гинекология №9 / 2014
Особенности полиморфизма генов MMP1, ММP3, PAI1 у больных с пролапсом тазовых органов и стрессовым недержанием мочи
ФГБУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта СЗО РАМН, Санкт-Петербург, Россия
Цель исследования. Оценка связи между полиморфизмом генов MMP1(rs1799750), MMP3, (rs3025058), гена PAI (rs1799768) и риском возникновения пролапса тазовых органов (ПТО) и стрессового недержания мочи (СНМ).
Материал и методы. Исследуемые группы состояли из пациенток с ПТО 1–4-й стадии по POP -Q шкале (n=63) и пациенток с ПТО и СНМ (n=65). Женщины без ПТО и без жалоб на недержание мочи были включены в контрольную группу (n=117). Образцы ДНК были выделены из цельной крови. Тип полиморфизма был определен методом ПЦР – ПДРФ.
Результаты. Выявлены статистически значимые различия в распределении частот полиморфизмов MMP1 (rs1799750), MMP3(rs3025058), PAI (rs1799768) у женщин исследуемых групп и контрольной группы. Генотип 1G/1G по гену ММР-1 повышает вероятность ПТО в 2,1 раза (OR=2,1 95% CI: 1,05-4,38), генотип 5G/5G по гену MMP3 – развитие ПТО в 3,4 раза (OR=3,38 95% CI: 1,64-6,99), а ПТО+СНМ – в 3,3 раза (OR=3,29 CI: 1,43-7,57). Генотип 5G/5G PAI повышает вероятность развития ПТО в 3,2 раза (OR=3,16 95% CI: 1,6-6,2), сочетания ПТО и СНМ в 5,3 раза (OR=5,3 95% CI: 2,7-10,7).
Заключение. Полиморфизм генов MMP1 (rs1799750), MMP3(rs3025058), PAI(rs1799768) играет роль в этиологии и патогенезе ПТО и СНМ.
Проблемы недержания мочи у женщин с пролапсом тазовых органов (ПТО) заставляют их прибегать к оперативному лечению, так как приводят к серьезной социальной дезадаптации, снижают трудоспособность, сексуальную активность, влияют на качество жизни.
Эндогенные патогенетические механизмы декомпенсации эластических свойств тканей тазового дна при ПТО и стрессовом недержании мочи (СНМ) остаются недостаточно изученными. Известно, что подверженность человека различным заболеваниям может определяться так называемыми «генами предрасположенности» [1]. Некоторые данные современных исследований позволяют связывать полиморфизм генов, определяющих синтез коллагена, ферментов деградации коллагена, в частности семейства металлопротеиназ (ММР-1, MMP-2, MMP-9) с риском развития ПТО и СНМ [2–5]. Также известно, что активация прометаллопротеиназ таких, как про-ММР-1,-3-9,-10,-13, непосредственно осуществляется ферментом плазмином, тогда как ингибитор активатора плазминогена (PAI 1) препятствует превращению плазминогена в плазмин и, следовательно, нарушает активацию ММР, замедляя, таким образом, деградацию соединительной ткани [6]. Поиск и исследование генов – кандидатов ПТО и СНМ является важным аспектом изучения патогенеза заболевания, открывает новые возможности для выявления женщин групп риска по развитию данной патологии, прогнозирования клинического течения заболевания, а также для выбора методов профилактики и оперативного лечения.
Цель исследования: выяснить особенности полиморфизма генов MMP1 (матриксная металлопротеиназа-1), MMP3 (матриксная металлопротеиназа-3), PAI (ингибитор активатора плазминогена) у больных с ПТО и СНМ.
Материал и методы исследования
Обследованы 128 пациенток: 63 женщины с ПТО и 65 женщин с ПТО и СНМ, жителей Северо-Западного региона России, представителей европеоидной расы. От каждой женщины в установленном порядке получено информированное согласие на проведение данного исследования. Средний возраст пациенток в указанных группах составил 65,3±5,4 и 66,5±6,7 года соответственно. Результаты объективного обследования состояния тазового дна пациенток представлены на рисунке.
Группа сравнения (n=117) представляла собой популяционную выборку женщин, не имеющих на момент исследования клинических признаков ПТО и недержания мочи и проживающих в Северо-Западном регионе России.
Образцы ДНК, полученные стандартным методом из лимфоцитов периферической крови, были использованы для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) и ПЦР-ПДРФ – анализа (анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов) генов MMP1, ММP3, PAI1. Cмесь для амплификации обьемом 25 мкл включала 15 нМ каждого праймера, 67 мМ трис-HCl, рН 8.8, 16,6 мМ сульфата аммония, 6,7 мМ MgCl2, 6,7 мкМ ЭДТА, 10 мМ меркаптоэтанола, 170 мкг BSA, 1,0 мМ каждого dNTP и 1U Taq-ДНК-полимеразы. Для проведения ПЦР использовали следующие олигонуклеотидные праймеры:
MMP1 (1G/2G)- F TGACTTTTAAAACATAGTCTATGTTCA
R TCTTGGATTGATTTGAGATAAGTCATAGC
MMP3 (5A/6A)- F TTCTCCATTCCTTTGATGGGGGGAAAGA
R TTCCTGGAATTCACATCACTGCCACCACT
PAI (4G/5G) – F CACAGAGAGA GTCTGGCCACTT
R GGCCCAACAGAGGACTCTTG
Для амплификации использовали программируемый термоциклер «ДНК-технология» (Москва). Для проведения ПЦР использовали следующие условия: после денатурации (94...
