Особенности профилей транскрипции генов при фиброзно-кистозной болезни молочной железы

Цель: Определение транскрипционных профилей генов и выявление дифференциальных различий в экспрессии генов в зависимости от формы фиброзно-кистозной болезни (ФКБ).
Материалы и методы: Исследовано 128 образцов фиксированных в формалине парафинизированных тканей молочной железы, полученных в результате хирургического вмешательства, с установленными по гистологии: непролиферативной формой ФКБ, протоковой гиперплазией без атипии, атипичной протоковой гиперплазией, протоковой карциномой in situ и нормальной тканью. Методом количественной ПЦР в режиме реального времени выполнено исследование экспрессионного профиля 46 генов-кандидатов.
Результаты: В зависимости от гистологического типа образца установлены общие закономерности экспрессии мРНК исследованных генов при различных формах ФКБ и спектры дифференциально экспрессируемых генов при пролиферативных с атипией формах ФКБ (18 генов) и непролиферативных формах ФКБ (14 генов).
Заключение: Пролиферативная с атипией форма ФКБ, обладающая наибольшим риском развития рака молочной железы, характеризуется статистически значимым повышением экспрессии мРНК генов MKI67, CCNB1, KIF14, PTTG1, ANLN, TMEM45B, TPX2, PRLR, FGFR4, MMP11, GATA3, EXO1, TYMS, NAT1 и снижением экспрессии мРНК генов MYC, RANK, TNFA, MMP9.

Вклад авторов: Ашрафян Л.А., Родионов В.В., Сухих Г.Т. – концепция и дизайн исследования; Кометова В.В., Бурменская О.В. – подбор и обработка материала; Трофимов Д.Ю. – организация и проведение ПЦР-исследования; Бурменская О.В. – статистическая обработка данных; Бурменская О.В., Сметник А.А. – написание текста; Родионов В.В. – редактирование.
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии возможных конфликтов интересов.
Финансирование: Работа выполнена при частичной финансовой поддержке научных исследований в рамках Государственного задания «Оценка индивидуального риска рака молочной железы у женщин с доброкачественными заболеваниями (фиброзно-кистозной болезнью) молочных желез» (номер государственного учета НИОКТР 121040600432-9).
Одобрение Этического комитета: Исследование было одобрено локальным Этическим комитетом ФГБУ НМИЦ АГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России.
Согласие пациентов на публикацию: Пациенты подписали информированное согласие на публикацию своих данных.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Бурменская О.В., Кометова В.В., Сметник А.А., Родионов В.В., Трофимов Д.Ю., Ашрафян Л.А., Сухих Г.Т. Особенности профилей транскрипции генов при фиброзно-кистозной болезни молочной железы.
Акушерство и гинекология. 2023; 7: 55-65
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2023.77

По определению ВОЗ (1984), мастопатия представлена как фиброзно-кистозная болезнь (ФКБ), характеризующаяся нарушением соотношения эпителиального и соединительнотканного компонентов, широким спектром пролиферативных и регрессивных изменений тканей молочной железы [1].

Статистический учет ФКБ не ведется, но, по оценкам ряда авторов, ее частота в женской популяции составляет 50%, что позволяет обоснованно считать – именно эта группа заболеваний является самой распространенной патологией молочных желез [2–4].

В целом ФКБ не рассматривается как предраковое заболевание, однако многие ее формы существенно повышают риск развития рака молочной железы (РМЖ). У женщин с доброкачественными опухолями и высокой маммографической плотностью молочной железы риск развития РМЖ в 3 раза выше по сравнению с женщинами с умеренной маммографической плотностью и без доброкачественных опухолей молочной железы [5]. По-разному оцениваются риски развития РМЖ в зависимости от выявленных при биопсии молочной железы морфологических изменений. По различным оценкам, риск РМЖ незначительно повышен или равен популяционному при непролиферативной форме заболевания и повышен в 1,5–3,5 или в 2–10 раз по сравнению с популяционным при пролиферативных формах заболевания без атипии и с атипией соответственно [6, 7].

В связи с актуальностью оценки рисков РМЖ при ФКБ целесообразно было определить особенности экспрессионных профилей генов, которые принимают или могут принимать участие в неопластической трансформации. Более подробно функции этих генов и их роль в патогенезе заболеваний молочной железы будут рассмотрены при описании и обсуждении полученных результатов.

Цель настоящего исследования состояла в определении транскрипционных профилей генов и выявлении дифференциальных различий в экспрессии генов в зависимости от формы ФКБ.

Материалы и методы

Для реализации поставленной цели исследовано 128 образцов фиксированных в формалине парафинизированных (FFPE) тканей молочной железы, полученных в результате хирургического вмешательства в отделении патологии молочной железы ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России. Из них: 21 образец непролиферативной формы ФКБ, 40 образцов протоковой гиперплазии без атипии (typical ductal hyperplasia, TDH), 20 образцов атипичной протоковой гиперплазии (atypical ductal hyperplasia, ADH), 22 образца протоковой карциномы in situ (ductal carcinoma in situ, DCIS), а также 25 образцов нормальной ткани (табл. 1).

Образцы нормальных тканей у пациенток без рака были получены после редукционной (уменьшающей) маммопластики, когда по данным патоморфологического исследования операционного материала не были описаны какие-либо патологические изменения со стороны ткани молочной железы. Образцы тканей с типичной и атипичной пролиферацией у пациенток без рака были получены после выполнения инцизионной или core-биопсии при ФКБ. Образцы нормальной ткани, TDH, ADH, DCIS у больных РМЖ были получены из операционного материала на расстоянии от опухолевого узла.

Методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции исследован широкий спектр генов, представленный в таблице 2. Реакцию ставили в двух повторах для каждого маркера, рассчитывали среднее значение Сt. Исследования проведены в соответствии с методикой, опубликованной нами ранее [8].

В соответствии с традиционным методом определения уровня экспрессии гена [9] по завершении амплификации уровень представленности транскриптов рассчитывали методом сравнения индикаторных циклов (метод ∆∆Ct) с нормировкой относительно нормировочного фактора, рассчитанного по референсным генам B2M, GUSB, и относительно значения медианы (Ме) уровня экспрессии маркера в группе образцов нормальной ткани в качестве референсного уровня. При такой нормировке медиана значения уровня экспрессии в нормальной ткани соответствует единице, относительно этого значения рассчитываются показатели экспрессии в образцах.

Статистический анализ

Статистический анализ данных осуществляли с помощью пакета программ IBM SPSS Statistics 17.0. В связи с несоответствием исследованных показателей нормальному распределению для оценки значимости межгрупповых различий применялся непараметрический U-критерий Манна–Уитни. Статистически значимыми считали различия при уровне р<0,05. В качестве меры центральной тенденции в группах исследования рассчитывали медиану (Me), учитывали также интерквартильный размах (Q1–Q5). Данные по группам исследования представлены в виде Me [Q1; Q3].

Результаты и обсуждение

По результатам исследования мРНК исследуемых генов при сравнении с нормальной тканью определены два принципиально разных транскрипционных профиля: с низкой (непролиферативная форма ФКБ) и высокой пролиферативной активностью (DCIS, ADH, TDH).

При непролиферативной форме ФКБ выявлены следующие статистически значимые изменения в экспрессии ге...

Бурменская О.В., Кометова В.В., Сметник А.А., Родионов В.В., Трофимов Д.Ю., Ашрафян Л.А., Сухих Г.Т.