Фарматека №20 (213) / 2010
Перспективы использования аполипопротеинов крови для транспорта лекарственных веществ через гематоэнцефалический барьер с целью расширения возможностей фармакотерапии
Гематоэнцефалический барьер препятствует проникновению лекарственных веществ (ЛС) в центральную нервную систему, что ограничивает возможности терапии многих заболеваний. Таким образом, транспорт ЛС через гематоэнцефалический барьер остается актуальной задачей современной фармакологии. Множество существующих систем доставки ЛС являются высокотоксичными. В данном исследовании изучалась возможность использования аполипопротеинов крови для повышения транспорта через гематоэнцефалический барьер даларгина – ЛС с высоким терапевтическим потенциалом. На белых беспородных мышах по методике отдергивания хвоста исследовали антиноцицептивную активность даларгина (7,5 мг/кг), сорбированного на наночастицах с разным покрытием. Показано, что наиболее эффективно и безопасно увеличивает доставку даларгина в мозг покрытие наночастиц аполипопротеином Е.
Гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) является труднопреодолимым для большинства лекарственных веществ [1, 2]. Это обусловлено наличием гликопротеина-Р, осуществляющего выброс (выкачивание) вещества из цитоплазмы эндотелиоцитов, а также наличием плотных контактов (tight junction) между эндотелиоцитами капилляров головного мозга, их малой фенестрацией, что затрудняет фильтрацию [3]. Одним из способов облегчения транспорта лекарственных веществ через ГЭБ является их сорбция на альбуминовых и поли(бутил)цианоакрилатных наночастицах (ПБЦА-НЧ), покрытых полисорбатом-80 (ПС-80) [4–10, 16, 17].
Материал и методы
Опыты проводились на белых беспородных мышах массой 18–22 г. Животных содержали в клетках по 10 особей в условиях 12-часового светового дня при температуре 20–22 °С при свободном доступе к пище и воде. С учетом специфики суточных ритмов мышей и целью уменьшения их влияния на результаты исследования анальгезиметрические исследования проводились в одно и то же время суток (14 часов).
Приготовление лекарственных форм на основе ПБЦА-НЧ
ПБЦА-НЧ получали и лиофилизировали, как описано в протоколе [4].
Суспензия ПБЦА-НЦ с сорбированным даларгином. НЧ ресуспендировали в фосфатном буфере при постоянном помешивании и 5-минутном “озвучивании” (при помощи ультразвукового диспергатора УЗДН). Это производилось с таким расчетом, чтобы концентрация ПБЦА-НЧ составляла 20 мг/мл. Затем к суспензии добавляли раствор даларгина (0,75–1 мг/мл) и инкубировали в течение 4 часов при периодическом перемешивании.
Суспензия ПБЦА-НЧ с сорбированным даларгином, покрытых ПС-80. Суспензию ПБЦА-НЧ с сорбированным даларгином готовили, как описано выше. Затем к суспензии добавляли 1 %-ный раствор ПС-80 и инкубировали при постоянном перемешивании в течение 30 минут.
Суспензия ПБЦА-НЧ с сорбированным даларгином, покрытых аполипопротеинами. Суспензию ПБЦА-НЧ с сорбированным даларгином готовили, как описано выше. Затем к суспензии добавляли растворы аполипопротеинов (Аро): АроА-II (12,5 мкг/мл), АроВ (12,5 мкг/мл), АроС-II (12,5 мкг/мл), АроЕ (12,5 мкг/кг), АроJ (12,5 мкг/кг), и инкубировали при постоянном перемешивании в течение 60 минут.
Суспензия ПБЦА-НЧ с сорбированным даларгином, покрытых ПС-80 с суперпокрытием Апо. Суспензию ПБЦА-НЧ с сорбированным даларгином, покрытых ПС-80, готовили, как описано выше. С целью суперпокрытия добавляли растворы АроА-II, АроВ, АроС-II, АроЕ или АроJ (в концентрациях 12,5 мкг/кг) и инкубировали в течение 60 минут.
Методика проведения анальгезиметрических исследований
Антиноцицептивное действие даларгина (в разных лекарственных формах) изучали в тесте “отдергивания хвоста” (tail-flick test) с использованием прибора Iitic-Inc., mod. 33, “Tail flick analgesia-meter”, как описывалось ранее [4]. При этом на дистальную треть хвоста животного наносится термическое кожное болевое раздражение пучком сфокусированных линзой световых лучей от лампы накаливания. Таким образом, кожноболевое раздражение наносится бесконтактным способом и тем самым снижается вероятность реагирован...
