Кардиология №4 / 2012
Полиморфизм гена CYP2C19 у больных инфарктом миокарда, применяющих клопидогрел
Казанский государственный медицинский университет; 420012, Казань, ул. Бутлерова, д. 49; Межрегиональный клинико-диагностический центр, Казань, Россия
Одной из основ современного лечения инфаркта миокарда (ИМ) является комбинированная антиагрегантная терапия, состоящая из ацетилсалициловой кислоты (АСК) и клопидогрела. Фармакодинамические и клинические исследования продемонстрировали, что полиморфизм гена CYP2C19 (аллель CYP2C19*2) связан со сниженным антиагрегантным эффектом клопидогрела и увеличением частоты развития тяжелых сердечно-сосудистых осложнений. В исследование были включены 97 пациентов с ИМ. Всем были проведены коронарография и стандартное лечение ИМ, включая стентирование инфаркт-связанной коронарной артерии. Полиморфизм гена CYP2C19 определяли методом полимеразной цепной реакции. Через 6 мес определяли исходы. Частота аллеля CYP2C19*2 составила 22,7%. Выявлены статистически незначимые различия по распространенности полиморфизма гена CYP2C19 при разных формах ИМ. В отличие от авторов, опубликовавших ранее данные по влиянию полиморфизма гена CYP2C19 на сердечно-сосудистые осложнения, мы не нашли различий в зависимости от генотипа. Полиморфизм гена CYP2C19 не влияет на прогноз в течение последующих 6 мес при соблюдении пациентом врачебных рекомендаций, включая регулярный прием клопидогрела.
Одной из основ современного лечения инфаркта миокарда (ИМ) является комбинированная антиагрегантная терапия, состоящая из ацетилсалициловой кислоты (АСК) и клопидогрела. В соответствии с современными руководствами комбинация АСК и клопидогрела рекомендуется для профилактики повторных ишемических осложнений [1,2].
Продемонстрировано, что у больных ИМ, особенно с проведением стентирования коронарных артерий,
добавление клопидогрела к АСК обеспечивает дополнительную пользу [3]. Вместе с тем в ряде исследований продемонстрирована широкая межиндивидуальная вариабельность антиагрегантного эффекта клопидогрела [4—10].
У пациентов с неадекватным ответом на клопидогрел повышен риск развития сердечно-сосудистых осложнений (ССО) [11]. Клопидогрел (неактивное пролекарство) после всасывания в кишечнике
превращается в печени с помощью системы цитохромов P450 (CYP) в активный метаболит, который необратимо связывает пуринергические рецепторы P2Y12 тромбоцитов и ингибирует АДФ-инду цированную активацию тромбоцитов и их агрегацию [12, 13].
В биоактивации клопидогрела участвуют различные изоферменты CYP, включая CYP2C19, 3A4/5, 1A2, 2B6 и 2C9 [14, 15].
Фармакодинамические и клинические исследования продемонстрировали, что полиморфизм гена CYP2C19 (аллель CYP2C19*2) связан со сниженным антиагрегантным эффектом клопидогрела и увеличением частоты развития тяжелых ССО [16—18].
В настоящее время идет активная дискуссия по поводу использования генотипирования при применении клопидогрела [19—21]. Отечественных исследований по генотипированию при применении клопидогрела у больных с ИМ крайне мало.
Материал и методы
В наше исследование были включены 97 пациентов (24,7% женщины) в возрасте от 41 до 79 лет с верифицированным диагнозом ИМ. Диагноз устанавливали на основании клинических проявлений, типичных изменений на электрокардиограмме (ЭКГ), динамики маркеров некроза миокарда (тропонин I). Всем больным была проведена коронарография. Осуществляли стандартное лечение ИМ, включая стентирование инфаркт-связанной коронарной артерии.
Для молекулярно-генетического анализа использовали образцы ДНК испытуемых, выделенные из венозной крови сорбентным методом в соответствии с прилагаемой инструкцией по применению к комплекту «Проба-ГС» («ДНК-технология», Россия).
Полиморфизм G681A (rs4244285 или *1/*2) гена CYP2C19 определяли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием двухпраймерной системы (прямой праймер: 5'-AATTACAACCAGAGCTTGGC-3', обратный праймер: 5'-TATCACTTTCCATAAAAGCAAG-3') [22].
Реакционная смесь для ПЦР состояла из следующих компонентов: деионизированная вода — 6,3 мкл; буфер 10-кратный — 1,25 мкл; dNTP (5мМ) — 1,25 мкл; прямой праймер — 0,5 мкл (4 пМ); обратный праймер — 0,5 мкл (4 пМ); Taq-полимераза— 0,2 мкл (1 ед). Для амплификации фрагмента гена CYP2C19 в реакционную смесь добавляли около 100 нг (2—3 мкл) ДНК и использовали следующий температурный режим ПЦР на термоциклере «Терцик» («ДНК-Технология», Россия): 1 цикл — 94˚С (5 мин); 35 циклов — 94˚С (1 мин), 53˚С (1 мин), 72˚С (1 мин); 1 цикл — 72˚С (10 мин). Рестрикцию ампликонов длиной 169 пар оснований (п.о.) проводили с использованием фермента SmaI. Анализ длин рестрикционных продуктов проводили электрофоретическим разделением в 8% полиакриламидном геле с последующей окраской бромистым этидием и визуализацией в проходящем ультрафиолетовом свете...
