Применение молекулярно-генетических методов для диагностики и прогноза развития дисплазии тяжелой степени и рака шейки матки

Цель: Разработка способа определения «тяжелых» ассоциированных с вирусом папилломы человека (ВПЧ) поражений шейки матки и риска прогрессии «малых» форм поражений с использованием молекулярно-генетических методов.
Материалы и методы: В исследование включено 466 пациенток в возрасте от 20 до 49 лет, обратившихся в научно-поликлиническое отделение ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова». Проведены цитологическое исследование, ВПЧ-тестирование, кольпоскопия, биопсия шейки матки (по показаниям), гистологическое исследование, определение экспрессионного профиля мРНК 11 генов методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Под динамическим наблюдением (без терапии) находились 90 пациенток с «малыми» формами поражения эпителия шейки матки с обследованием каждые 6 месяцев в течение 24 месяцев.
Результаты: Разработан способ выявления дисплазии тяжелой степени, рака шейки матки (РШМ) и определения риска прогрессии «малых» форм ВПЧ-ассоциированных заболеваний. С помощью регрессионной модели, учитывающей уровень экспрессии мРНК генов MKI67, CDKN2A, CCNB1, MYBL2, EXO, ANLN, UBE2T, PGR, ESR1, BAG1, BCL2 и наличие ВПЧ высокого онкогенного риска предложен алгоритм расчета индекса риска (ИР) поражений шейки матки. С использованием ИР выявлено 88,3% HSIL и 100% случаев РШМ. Для «малых» поражений шейки матки неблагоприятный и благоприятный прогнозы подтверждены в 81,5 и в 84,1% случаев.
Заключение: В перспективе разработанная модель подлежит дальнейшей апробации и, вероятно, может быть использована в клинической практике при скрининге и профилактике РШМ в качестве дополнительного метода для сортировки образцов с «тяжелыми» поражениями и риском прогрессии патологического процесса, а также отбора пациенток для проведения кольпоскопии и биопсии по показаниям.

Рак шейки матки (РШМ) является одной из наиболее распространенных опухолей и занимает четвертое место в структуре онкологических заболеваний. В 2020 г. зарегистрировано 604 127 новых случаев заболевания, смертность составила 341 831 случай [1]. С целью предотвращения и профилактики заболевания во всех странах мира предусмотрено проведение скрининга РШМ.

В России скрининг РШМ осуществляется цитологическим методом и предусмотрен в возрасте 21–29 лет 1 раз в 3 года, в возрасте от 30 до 65 лет проводится ко-тестирование (цитология и определение вируса папилломы человека (ВПЧ) высокого онкогенного риска) 1 раз в 5 лет [2]. Длительное время скрининг включал только цитологическое исследование (Пап-тест или жидкостную цитологию). При высокой специфичности недостатками данного метода являются недостаточная чувствительность, которая составляет 53,0% (30–87%), а также большое число дискордантных результатов при проведении исследования разными патологоанатомами и при сопоставлении результатов с гистологическим исследованием [3–5]. Корреляция цитологии и гистологии (cytology histology correlation (CHC)) является одним из важных критериев оценки качества скрининга РШМ [6]. Так, при сопоставлении результатов цитологического и гистологического исследований у 415 пациенток с заболеваниями шейки матки соответствие диагноза было достигнуто у 194 (46,7%) пациенток. Общее число незначительного несоответствия составило 192 (46,4%) случая, а общее число значительного несоответствия цитологического и гистологического заключений составило 29 (6,9%) случаев [7]. Bergeron C., von Knebel Doeberitz M. было обнаружено, что тестирование на ВПЧ показало более раннее обнаружение плоскоклеточных интраэпителиальных поражений высокой степени (HSIL) по сравнению с цитологическим исследованием [8].

В связи с более высокой чувствительностью (96,1%) ВПЧ-тестирование было включено в скрининговые программы РШМ, в том числе в некоторых странах в качестве первичного теста. Однако данный метод имеет низкую специфичность из-за широкого распространения ВПЧ-инфекции, которая, по различным оценкам, составляет от 16 до 24% [9–10]. В большинстве случаев наблюдается транзиторное течение папилломавирусной инфекции (ПВИ), элиминация вируса происходит в течение последующих 12–18 месяцев. Персистенция вируса высокого канцерогенного риска более 24 месяцев может приводить к развитию цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN). При дальнейшей персистенции ВПЧ-инфекции риск прогрессии заболевания до CIN3 в течение 5 лет составляет: при нормальных результатах цитологического заключения (NILM) – 5–7,4%, при ASCUS – 8–10%, при LSIL – 15–17% [11]. Вместе с тем большинство женщин с дисплазией легкой степени подвержены инвазивным манипуляциям на шейке матки, которых можно было избежать при низком риске прогрессии заболевания.

В связи с этим чрезвычайно актуальной является задача выявления в когорте ВПЧ-инфицированных женщин пациенток с «тяжелыми» поражениями шейки матки (HSIL, РШМ) и быстрой прогрессией заболевания при «малых» поражениях. Молекулярно-генетические методы являются хорошим подспорьем в решении данной задачи. В публикации Мельниковой Н.В. и соавт. продемонстрирована возможность проведения дифференцировки пациенток с цервикальной интраэпителиальной неоплазией CIN2 и ≤CIN1 на основе экспрессии 21-генной панели мРНК методом количественной полимеразной цепной реакции [12].

Цель настоящего исследования состояла в разработке способа определения «тяжелых» ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки и риска прогрессии «малых» форм поражений с использованием молекулярно-генетических методов.

Материалы и методы

В исследование включены 466 пациенток в возрасте от 20 до 49 лет, обратившихся в научно-поликлиническое отделение ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» с декабря 2015 г. по март 2019 г. Критерии включения: репродуктивный возраст от 20 до 49 лет; регулярный менструальный цикл; для групп исследования: цитологическое и/или гистологическое заключение NILM, ASCUS, LSIL, HSIL или РШМ и наличие ВПЧ канцерогенного риска, для контрольной группы: отсутствие ВПЧ-инфекции и цитологическое заключение NILM; способность выполнять требования протокола; подписанное информированное согласие на участие в исследовании. Критерии исключения: беременность; послеродовый период и лактация; прием гормональных препаратов; наличие острых воспалительных заболеваний (специфической и неспецифической этиологии); отсутствие возможного следования протоколу.

Помимо этого, 90 женщин с «малыми» формами поражения эпителия шейки матки были включены в проспективное обсервационн...

Бурменская О.В., Назарова Н.М., Сычева Е.Г., Прилепская В.Н., Трофимов Д.Ю., Сухих Г.Т.