Акушерство и Гинекология №7-2 / 2011
Профиль экспрессии мРНК генов цитокинов в вагинальных мазках женщин репродуктивного возраста при неспецифическом вагините и бактериальном вагинозе
ФГУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздравсоцразвития России, Москва
Цель исследования. Изучение профиля экспрессии мРНК генов цитокинов в отделяемом влагалища у пациенток с неспецифическим вагинитом (НВ) и бактериальным вагинозом (БВ).
Материал и методы. Обследованы 126 пациенток в возрасте от 19 до 45 лет. Экспрессию мРНК генов цитокинов определяли методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) в режиме реального времени.
Результаты исследования. Показано, что НВ сопровождается достоверным увеличением уровня экспрессии мРНК генов IL-1b, IL-6, IL-8, IL-10, TNF, IFNG, LIF, СD45 и снижением уровня IL-12a, IL-18 по сравнению со здоровыми женщинами. У пациенток с БВ выявлено достоверное повышение уровня экспрессии мРНК генов IL-6, IL-8, IL-10, LIF и снижение уровня IL-12a, IL-18 по сравнению с контрольной группой.
Заключение. Существенную роль при НВ и БВ играют следующие цитокины: IL-1b, IL-6, IL-8, IL-10, TNF, IFNG, LIF, IL-12a, IL-18, а также СD45. Величина отношения уровня экспрессии мРНК генов IL-10 и IL-18 является значимым диагностическим критерием дисбиотических процессов во влагалище.
В норме у женщин репродуктивного возраста в составе микрофлоры влагалища доминируют лактобактерии (90–95%). Сдвиг баланса в сторону условно-патогенных микроорганизмов (УПМ) приводит к дисбиотическим состояниям. Дисбиозы могут протекать как без видимых клинических проявлений, так и сопровождаться рядом симптомов, в частности, зудом, жжением, диспареунией, обильными выделениями и неприятным запахом из половых путей. В настоящее время среди дисбиотических состояний принято выделять бактериальный вагиноз (БВ) и неспецифический вагинит (НВ), принципиальной разницей между которыми является наличие воспалительной реакции влагалища и шейки матки.
НВ обусловлены УПМ, такими как грибы, стрептококки, стафилококки, кишечная палочка и др. В последние годы все чаще появляются публикации, в которых БВ рассматривается как одна из причин вагинитов [7, 10, 12]. По данным M.R Anderson, в 30% случаев причина воспаления слизистой оболочки влагалища остается невыясненной [5]. Поэтому идентификация инфекционных агентов при дисбиотических процессах в микробиоценозе влагалища является актуальной задачей клинической лабораторной диагностики.
Тем не менее отсутствие однозначной ассоциации определенных групп УПМ с вагинитом или БВ, позволяет предположить, что существенную роль в развитии того или иного патологического процесса играют особенности локального иммунитета пациентки.
Цель исследования: изучение профиля экспрессии мРНК генов цитокинов в отделяемом влагалища у пациенток с НВ и БВ.
Материал и методы исследования
Проведено клинико-лабораторное обследование 126 женщин в возрасте от 19 до 45 лет (медиана – Ме=29 [25–33]). Методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) исключали наличие абсолютных патогенов (Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis). Пациентки были разделены на группы по следующим критериям:
БВ (n=14): снижение доли лактобактерий менее 80% и увеличение доли облигатно-анаэробных
микроорганизмов свыше 20% по результатам исследования методом «Фемофлор»; выявление
ключевых клеток при микроскопии окрашенного мазка; число лейкоцитов в мазке менее 10 в поле зрения; отсутствие выраженных признаков воспаления слизистой оболочки влагалища и шейки матки при влагалищном исследовании; обильные выделения из половых путей.
НВ (n=86): число лейкоцитов в мазке более 10 в поле зрения; воспалительная реакция со стороны слизистой оболочки влагалища и шейки матки при влагалищном исследовании; наличие хотя бы одной из следующих жалоб: обильные выделения из половых путей, зуд, жжение во влагалище, диспареуния, дизурические расстройства.
Среди пациенток с НВ дополнительно выделяли подгруппы по наиболее вероятной этиологии вагинита: ассоциированный с облигатноанаэробным дисбиозом (n=10); с грибами рода Candida более 103,5 геном-эквивалент – гэ/мл (n=29); смешанной этиологии (облигатно-анаэробный дисбиоз и наличие грибов рода Candida в количестве более 103,5 гэ/мл, (n=18); с факультативно-анаэробным дисбиозом (n=9); без дисбиотических нарушений (n=20).
Группу контроля составили практически здоровые женщины, не предъявлявшие жалоб и не имевшие клинических признаков дисбиотических процессов во влагалище (n=26). Всем пациенткам проводили микроскопию вагинальных мазков, окрашенных по Граму. Взятие биологического материала для ПЦР
(соскобы с заднебоковых стенок влагалища) осуществляли в пробирки с физиологическим раствором. Для исследования состава микробиоты влагалища использовали наборы «Проба ГС» и «Фемофлор» (ДНК-Технология, Россия) согласно инструкции. При количественной оценке биоценоза влагалища учитывали общую бактериальную массу, массу Lactobacillus spp. и 14 основных групп микроорганизмов, представляющих условно-патогенную флору.
Профиль мРНК генов цитокинов в вагинальных мазках исследовали методом ОТ-ПЦР (IL-1b, TNF, IL-8, IL-18, IL-12a, IL-10, IFNG, TGFB1, LIF, а также общий лейкоцитарный антиген CD45). В работе использовались реактивы «Проба НК» и Наборы для обратной транскрипции и амплификации генов цитокинов методом ПЦР в режиме реального времени (ДНК-Технология, Россия) согласно инструкции. Нормировка осуществялась по пяти референсным генам HPRT1, TBP, B2M, GUSB, ABL методом сравнения индикаторных циклов (метод ΔΔCq). За единицу было принято значение Ме в контрольной группе.
При статистической обработке данных в качестве меры центральной тенденции количественных признаков выбрана медиана (Me), а в качестве ...
