Прогнозирование риска развития и прогрессирования цервикальных интраэпителиальных неоплазий, ассоциированных с папилломавирусной инфекцией

Цель исследования. Выявить особенности изменения уровня экспрессии мРНК генов человека у пациенток с ВПЧ (вирус папилломы человека)-ассоциированными заболеваниями шейки матки для прогнозирования риска развития и прогрессирования цервикальных интраэпителиальных неоплазий (CIN).
Материал и методы. В проспективное исследование были включены 225 женщин в возрасте от 18 до 60 лет. Обследование включало: сбор жалоб, анамнеза, гинекологический статус, расширенную кольпоскопию, морфологические и молекулярно-биологические методы исследования – мультиплексная ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени для количественного определения и типирования ВПЧ 21 типа и определение экспрессии мРНК генов MKI 67 (KI67), CTSL2, CDKN2A (P16), ESR1, PGR, BCL2, BAX, BAG1, CD68, SCUBE2, PTEN.
Результаты. Были сформированы 5 групп: 45 (20%) – ВПЧ-негативные (I группа – контрольная), 180 (80%) – ВПЧ-позитивные, разделены на 4 группы: II группа – 56 (24,9%) с латентной и субклиническими формами папилломавирусной инфекцией, III группа – 50 (22,2%) с LSIL, IV группа – 55 (24,4%) с HSIL, V группа – 19 (8,5%) с раком шейки матки (РШМ).
Заключение. Результаты проведенного исследования показали различия в уровне экспрессии мРНК потенциальных онкомаркеров в эпителии шейки матки у пациенток с CIN различной степени тяжести, РШМ и здоровых женщин. Повышение экспрессии мРНК генов MKI67 (KI67), CDKN2A (P16), снижение экспрессии PGR, BCL2 в сочетании с высоко онкогенными типами ВПЧ, ненормальной кольпоскопической картиной, коррелируют с исходами LSIL и могут рассматриваться как возможные биомаркеры прогнозирования течения уже развившейся неоплазии; при ВПЧ-носительстве – как возможные биомаркеры прогнозирования развития неопластической трансформации эпителия шейки матки. Комплексный анализ клинико-анамнестических параметров и определение молекулярно-генетических маркеров повышает определение риска прогрессирования заболевания.

Рак шейки матки (РШМ), вызванный высоко онкогенными типами вируса папилломы человека (ВПЧ), продолжает занимать второе место среди злокачественных опухолей репродуктивной системы у женщин [1]. Значительная вариабельность заболеваемости и смертности от РШМ отмечается не только в различных странах мира, но и в различных областях одной и той же страны. Ежегодно в мире регистрируются 470 000 новых случаев РШМ, 233 000 заканчиваются смертельным исходом (15% приходится на женщин от 20 до 34 лет) [2].

Предраковым поражением, которое можно эффективно лечить, для предупреждения развития РШМ является цервикальная интраэпителиальная неоплазия (CIN). CIN I обычно наблюдают без лечения. Однако в 10% случаев CIN I может прогрессировать до CIN III или РШМ; у пациенток с CIN II, 20% прогрессирует в CIN III или РШМ и 40% CIN II спонтанно регрессирует [3, 4]. Для многих гинекологов ведение пациентов с CIN I является спорным: наблюдать пациентов до спонтанной регрессии или лечить их с использованием деструктивных методов? Лечение может быть целесообразным для пациентов, которые относятся к группе высокого риска по прогрессированию заболевания. В отношении пациентов с низким риском (спонтанная регрессия), можно выбрать тактику динамического наблюдения. В этой связи, существует необходимость определения эффективных специфичных биомаркеров, которые бы служили надежным предиктором исходов и могли бы внести существенный вклад в диагностику, прогноз и лечение ВПЧ-ассоциированных заболеваний шейки матки.

Цель исследования: выявить особенности изменения уровня экспрессии мРНК генов человека у пациенток с ВПЧ-ассоциированными заболеваниями шейки матки для прогнозирования риска развития и прогрессирования CIN.

Материал и методы исследования

В исследование были включены 225 женщин, в возрасте от 18 до 60 лет (средний возраст 31,6±0,5 года). Критерии включения: ВПЧ позитивные женщины, CIN различной степени тяжести, РШМ. Критерии исключения: беременность, отсутствие возможного следования протоколу. Длительность наблюдения за пациентами составила 12,4±5 месяцев.

Обследование женщин включало: сбор жалоб, анамнеза, гинекологический статус, расширенную кольпоскопию, молекулярно-биологические методы исследования, цитологическое исследование, гистологическое исследование биопсийного материала (по показаниям).

Молекулярно-биологические методы исследования включали проведение метода мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией результатов в режиме реального времени для определения 21 типа ВПЧ (6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44(55), 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82) с определением вирусной нагрузки (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).

Экспрессию мРНК генов MKI 67 (KI67), CTSL2, CDKN2A (P16), ESR1, PGR, BCL2, BAX, BAG1, CD68, SCUBE2, PTEN определяли при первичном обращении с использованием метода количественной ПЦР с обратной транскрипцией в режиме реального времени (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). Для количественной оценки уровня экспрессии мРНК генов использовался метод ∆ΔСq c нормировкой по 3 референсным генам TBP, B2M и GUSB. За 1 было принято значение уровня экспрессии в контрольной группе.

В качестве меры центральной тенденции всех количественных показателей использовали медиану (Me), в качестве интервальной оценки – нижний Q1 (0,25) и верхний Q3 (0,75) квартили.

Достоверность межгрупповых различий количественных показателей определяли с помощью критерия Манна–Уитни, качественных показателей –χ2-критерия с поправкой Йетса для малых выборок.

Для оценки вероятности риска развития и прогрессирования заболевания был использован метод регрессионного анализа (бинарная логистическая регрессия). Вероятность события определялась по формуле:

р=1/(1+e-z)*100 (1), где

p – вероятность принадлежности к одной из анализируемых групп классификации

z – регрессионная функция, имеющая вид:

z = b1×X1 + b2×Х2+ ...+ bn×Хn+ а(2);

Х1 ... Хn – уровень экспрессии мРНК генов;

b1 ... bn – регрессионные коэффициенты

а – константа.

Бурменская О.В., Назарова Н.М., Прилепская В.Н., Мзарелуа Г.М., Бестаева Н.В, Трофимов Д.Ю., Сухих Г.Т.