Прогнозирование риска развития и прогрессирования цервикальных интраэпителиальных неоплазий, ассоциированных с папилломавирусной инфекцией

DOI: https://dx.doi.org/10.18565/aig.2016.2.92-98

27.02.2016
609

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва

Цель исследования. Выявить особенности изменения уровня экспрессии мРНК генов человека у пациенток с ВПЧ (вирус папилломы человека)-ассоциированными заболеваниями шейки матки для прогнозирования риска развития и прогрессирования цервикальных интраэпителиальных неоплазий (CIN).
Материал и методы. В проспективное исследование были включены 225 женщин в возрасте от 18 до 60 лет. Обследование включало: сбор жалоб, анамнеза, гинекологический статус, расширенную кольпоскопию, морфологические и молекулярно-биологические методы исследования – мультиплексная ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени для количественного определения и типирования ВПЧ 21 типа и определение экспрессии мРНК генов MKI 67 (KI67), CTSL2, CDKN2A (P16), ESR1, PGR, BCL2, BAX, BAG1, CD68, SCUBE2, PTEN.
Результаты. Были сформированы 5 групп: 45 (20%) – ВПЧ-негативные (I группа – контрольная), 180 (80%) – ВПЧ-позитивные, разделены на 4 группы: II группа – 56 (24,9%) с латентной и субклиническими формами папилломавирусной инфекцией, III группа – 50 (22,2%) с LSIL, IV группа – 55 (24,4%) с HSIL, V группа – 19 (8,5%) с раком шейки матки (РШМ).
Заключение. Результаты проведенного исследования показали различия в уровне экспрессии мРНК потенциальных онкомаркеров в эпителии шейки матки у пациенток с CIN различной степени тяжести, РШМ и здоровых женщин. Повышение экспрессии мРНК генов MKI67 (KI67), CDKN2A (P16), снижение экспрессии PGR, BCL2 в сочетании с высоко онкогенными типами ВПЧ, ненормальной кольпоскопической картиной, коррелируют с исходами LSIL и могут рассматриваться как возможные биомаркеры прогнозирования течения уже развившейся неоплазии; при ВПЧ-носительстве – как возможные биомаркеры прогнозирования развития неопластической трансформации эпителия шейки матки. Комплексный анализ клинико-анамнестических параметров и определение молекулярно-генетических маркеров повышает определение риска прогрессирования заболевания.

Рак шейки матки (РШМ), вызванный высоко онкогенными типами вируса папилломы человека (ВПЧ), продолжает занимать второе место среди злокачественных опухолей репродуктивной системы у женщин [1]. Значительная вариабельность заболеваемости и смертности от РШМ отмечается не только в различных странах мира, но и в различных областях одной и той же страны. Ежегодно в мире регистрируются 470 000 новых случаев РШМ, 233 000 заканчиваются смертельным исходом (15% приходится на женщин от 20 до 34 лет) [2].

Предраковым поражением, которое можно эффективно лечить, для предупреждения развития РШМ является цервикальная интраэпителиальная неоплазия (CIN). CIN I обычно наблюдают без лечения. Однако в 10% случаев CIN I может прогрессировать до CIN III или РШМ; у пациенток с CIN II, 20% прогрессирует в CIN III или РШМ и 40% CIN II спонтанно регрессирует [3, 4]. Для многих гинекологов ведение пациентов с CIN I является спорным: наблюдать пациентов до спонтанной регрессии или лечить их с использованием деструктивных методов? Лечение может быть целесообразным для пациентов, которые относятся к группе высокого риска по прогрессированию заболевания. В отношении пациентов с низким риском (спонтанная регрессия), можно выбрать тактику динамического наблюдения. В этой связи, существует необходимость определения эффективных специфичных биомаркеров, которые бы служили надежным предиктором исходов и могли бы внести существенный вклад в диагностику, прогноз и лечение ВПЧ-ассоциированных заболеваний шейки матки.

Цель исследования: выявить особенности изменения уровня экспрессии мРНК генов человека у пациенток с ВПЧ-ассоциированными заболеваниями шейки матки для прогнозирования риска развития и прогрессирования CIN.

Материал и методы исследования

В исследование были включены 225 женщин, в возрасте от 18 до 60 лет (средний возраст 31,6±0,5 года). Критерии включения: ВПЧ позитивные женщины, CIN различной степени тяжести, РШМ. Критерии исключения: беременность, отсутствие возможного следования протоколу. Длительность наблюдения за пациентами составила 12,4±5 месяцев.

Обследование женщин включало: сбор жалоб, анамнеза, гинекологический статус, расширенную кольпоскопию, молекулярно-биологические методы исследования, цитологическое исследование, гистологическое исследование биопсийного материала (по показаниям).

Молекулярно-биологические методы исследования включали проведение метода мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией результатов в режиме реального времени для определения 21 типа ВПЧ (6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44(55), 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82) с определением вирусной нагрузки (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).

Экспрессию мРНК генов MKI 67 (KI67), CTSL2, CDKN2A (P16), ESR1, PGR, BCL2, BAX, BAG1, CD68, SCUBE2, PTEN определяли при первичном обращении с использованием метода количественной ПЦР с обратной транскрипцией в режиме реального времени (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). Для количественной оценки уровня экспрессии мРНК генов использовался метод ∆ΔСq c нормировкой по 3 референсным генам TBP, B2M и GUSB. За 1 было принято значение уровня экспрессии в контрольной группе.

В качестве меры центральной тенденции всех количественных показателей использовали медиану (Me), в качестве интервальной оценки – нижний Q1 (0,25) и верхний Q3 (0,75) квартили.

Достоверность межгрупповых различий количественных показателей определяли с помощью критерия Манна–Уитни, качественных показателей –χ2-критерия с поправкой Йетса для малых выборок.

Для оценки вероятности риска развития и прогрессирования заболевания был использован метод регрессионного анализа (бинарная логистическая регрессия). Вероятность события определялась по формуле:

р=1/(1+e-z)*100 (1), где

p – вероятность принадлежности к одной из анализируемых групп классификации

z – регрессионная функция, имеющая вид:

z = b1×X1 + b2×Х2+ ...+ bn×Хn+ а(2);

Х1 ... Хn – уровень экспрессии мРНК генов;

b1 ... bn – регрессионные коэффициенты

а – константа.

Выбор наи...

Список литературы

1. Parkin D.M., Bray F., Ferlay J., Pisani P. Global cancer statistics, 2002. CA Cancer J. Clin. 2005; 55(2): 74-108.

2. Available at: http://www.cancer.org/cancer/cervicalcancer/detailedguide/cervical-cancer-key-statistics

3. Ostor A.G. Natural history of cervical intraepithelial neoplasia: a critical review. Int. J. Gynecol. Pathol. 1993; 12(2): 186-92.

4. Nishio S., Fujii T., Nishio H., Kameyama K., Saito M., Iwata T. et al. P16(INK4a) immunohistochemistry is a promising biomarker to predict the outcome of low grade cervical intraepithelial neoplasia: comparison study with HPV genotypin. J. Gynecol. Oncol. 2013; 24(3): 215-21.

5. Solomon D., Nayar R., eds. The Bethesda system for reporting cervical cytology: definitions, criteria and explanatory notes. 2nd ed. New York, NY: Springer; 2004: 169-75.

6. Сухих Г.Т., Прилепская В.Н., ред. Профилактика рака шейки матки. Руководство для врачей. 3-е изд. М.: МЕДпресс-информ; 2012.192с.

7. Роговская С.И. Папилломавирусная инфекция у женщин и патология шейки матки. В помощь практикующему врачу. 2-е изд. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2008.192с.

8. Boyle P., Autier P., Bartelink H., Baselga J., Boffetta P., Burn J. et al. European Code Against Cancer and scientific justification: third version (2003). Ann. Oncol. 2003; 14(7): 973-1005.

9. Munakata S., Watanabe O., Ohashi K., Morino H. Expression of Fas ligand and bcl-2 in cervical carcinoma and their prognostic significance. Am. J. Clin. Pathol. 2005; 123(6): 879-85.

10. zur Hausen H. Papillomaviruses causing cancer: evasion from host-cell control in early events in carcinogenesis. J. Natl. Cancer Inst. 2000; 92(9): 690-8.

Поступила 19.06.2015
Принята в печать 26.06.2015

Об авторах / Для корреспонденции

Бурменская Ольга Владимировна, научный сотрудник лаборатории молекулярно-генетических методов ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-22-92. E-mail: o_bourmenskaya@oparina4.ru
Назарова Нисо Мирзоевна, д.м.н., в.н.с. ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-14-03. E-mail: grab2@yandex.ru
Прилепская Вера Николаевна, д.м.н., профессор, зам. директора ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-69-34. E-mail: VPrilepskaya@mail.ru
Мзарелуа Гуранда Мерабовна, аспирант ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-14-03. E-mail: mzareluag@mail.ru
Бестаева Нонна Владиславовна, аспирант НПО ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-14-03. E-mail: nonnabestaeva@mail.ru
Трофимов Дмитрий Юрьевич, д.б.н., зав. лабораторией молекулярно-генетических методов ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-22-92. E-mail: d.trofimov@dna-tech.ru
Сухих Геннадий Тихонович, академик РАН, д.м.н., профессор, директор ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-18-00. E-mail: g_sukhikh@oparina4.ru

Для цитирования: Бурменская О.В., Назарова Н.М., Прилепская В.Н., Мзарелуа Г.М., Бестаева Н.В, Трофимов Д.Ю., Сухих Г.Т. Прогнозирование риска развития и прогрессирования цервикальных интраэпителиальных неоплазий, ассоциированных с папилломавирусной инфекцией. Акушерство и гинекология. 2016; 2: 92-98.
http://dx.doi.org/10.18565/aig.2016.2.92-98

Полный текст публикаций доступен только подписчикам

Нет комментариев

Комментариев: 0

Вы не можете оставлять комментарии
Пожалуйста, авторизуйтесь