Протеомный анализ цервиковагиналь­ной жидкости при применении активированной гли­цир­ризиновой кислоты у пациенток с ВПЧ-ассо­циированными поражениями шейки матки

Цель: Определение особенностей протеома цервиковагинальной жидкости (ЦВЖ) при ВПЧ-ассоциированных поражениях шейки матки с применением активированной глицирризиновой кислоты (АГК).
Материалы и методы: В исследование были включены 80 ВПЧ-позитивных пациенток в возрасте от 18 до 49 лет с результатами цитологии: NILM, хронический цервицит (группа I, n=40) и LSIL (группа II, n=40). Все пациентки получали препарат с действующим веществом АГК («Эпиген Интим» спрей 0,1%) в течение 18 месяцев по протоколу. Протеомный состав ЦВЖ анализировался методом ВЭЖХ-МС/МС в четырех временных точках (до начала терапии, через 6, 12 и 18 месяцев).
Результаты: В протеомном исследовании нами было проведено сравнение двух групп образцов ЦВЖ от 10 пациенток после применения АГК: 1-я группа (n=5) – «положительная динамика» (элиминация ВПЧ); 2-я группа (n=5) – «без динамики» (персистенция ВПЧ). При сравнении протеомного состава образцов ЦВЖ в динамике было выявлено изменение 48 белков, уровень 27 белков повышался в группе с положительной динамикой, в то время как уровень 21 белка снижался относительно группы «без динамики». Аннотация белков, увеличивающих свой уровень, выявила их участие в процессах иммунной системы (MPO, AZU1, LYZ, RNASE7, PPL, TXN, CD59, UBA52, CRISP3, ELANE), в частности, во врожденном иммунном ответе (MPO, AZU1, LYZ, RNASE7, TXN, CD59, UBA52, CRISP3, ELANE), а также в процессе дегрануляции нейтрофилов (MPO, AZU1, LYZ, CD59, CRISP3, ELANE), антимикробной активности (AZU1, ELANE).
Заключение: Результаты данного исследования свидетельствуют о влиянии длительного местного применения АГК на уровень белков ЦВЖ при «малых» поражениях шейки матки, в частности, на снижение провоспалительных белков при элиминации ВПЧ.

Рак шейки матки (РШМ) является быстро­прогрессирующим заболеванием, которое поражает женщин в различные периоды жизни, включая репродуктивный возраст. Основными этиологическими факторами развития РШМ являются высоко­онкогенные типы вируса папилломы человека (ВПЧ) (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 56, 52, 59, 68) [1]. Персистенция ВПЧ высокого онкогенного риска (ВПЧ ВР) первоначально вызывает плоскоклеточные интраэпителиальные поражения низкой степени (LSIL), которые обусловлены репликацией вируса и обычно устраняются иммунной системой в течение 1 года. Персистенция вируса высокого канцерогенного риска более 24 месяцев может приводить к развитию цервикальной интраэпителиальной неоплазии (CIN). При дальнейшей персистенции ВПЧ-инфекции риск прогрессии заболевания до CIN III в течение 5 лет составляет: при нормальных результатах цитологического заключения (NILM) – 5–7,4%, при ASCUS – 8–10%, при LSIL – 15–17% [2].

Персистенция вируса с длительной активной экспрессией вирусных онкобелков инициирует многостадийный процесс, в результате которого клетки эпителия шейки матки претерпевают изменения, способствующие опухолевой прогрессии [3, 4]. Важную роль в развитии РШМ играют онкобелки Е6 и Е7, которые необходимы для поддержания вирусного генома в клетке. Персистенция является следствием снижения клеточного имму­нитета, дефицита местного и общего интерферонов. По данным V. Colmenares et al. [5], ВПЧ спосо­бен ингибировать секрецию гамма-интерферона (IFN-γ) и экспрессию некоторых рецепторов иммунных врожденных клеток. Иммуноглобулиноподобный транскрипт 2 (immunoglobulin-like transcript 2, ILT2) является регуляторным рецептором, который, возможно, участвует в патогенезе вирусной инфекции. Индукция иммуносупрессивных цитокинов (IL-10 или TGF-b) является дополнительным механизмом, с помощью которого инфицированные ВПЧ клетки могут избежать иммуноопосредованной элиминации. Значимым фактором является то, что ВПЧ инактивирует опухолевый супрессор p53, играющий одну из ведущих ролей в предотвращении развития рака. Ранее, в исследованиях Гусакова К.И. и соавт., продемонстрированы статистически значимые различия экспрессии 9 белков цервиковагинальной жидкости (ЦВЖ), непосредственно участвующих в реализации иммунного ответа (APOB, FABP5, GRN, HP, MUC5AC, OLFM4, PKP1, QSOX1, S100A8) у вакцинированных от ВПЧ женщин [6–10]. Понимание роли персистенции ВПЧ является ключом к поиску и разработке эффективных иммунных средств, которые могли бы полностью устранять вирусную инфекцию.

Глицирризинат аммония (AMGZ, Glycyram, аммониевая соль глицирризина, аммониевая соль глицирризиновой кислоты) – это вещество, содержащееся в корне солодки. Его можно получить в форме глицирризина аммония и глицирризина моноаммония при экстракции из растения. Глицирризиновую кислоту получают из технического сухого экстракта солодки с содержанием глицирризиновой кислоты 26–28% путем экстрагирования ацетоном, содержащим 0,1% серную кислоту, при комнатной температуре с получением трикалиевой соли гликозида и переводом ее в однокалиевую соль путем перекристаллизации последней из водного этанола дважды при соотношении, соответственно равном (5:1, V/V), и далее переводом в глицирризиновую кислоту путем обработки однокалиевой соли 1% раствором серной кислоты при 98–100°C и хлороформом при комнатной температуре. Глицирризинат аммония обладает широким спектром фармакологической и биологической активности, он является ингибитором HMGB1 белка, а также обладает противовоспалительным, противоопухолевым и антидиабетическим действиями. В частности, введение глицирризината аммония и доксорубицина позволило уменьшить кардиотоксичность, вызванную введением доксорубицина, за счет усиления эндогенной антиоксидантной активности. Глицирризинат аммония обладает антиоксидативным свойством, он способен блокировать экспрессию генов, участвующих в апоптозе (GDF15, ATF3, TNFRSF10A, NALP1), в том числе индуцированном окислительным стрессом (HMOX1). Противовирусное действие АГК было продемонстрировано на примере вируса гепатита. Было показано, что терапия с использованием глицирризина усиливает пролиферацию лимфоцитов через 4 дня после начала лечения.

A. Farooqui et al. изучали влияние глицирризина на линию раковых клеток шейки матки HeLa [11]. Анализ жизнеспособности клеток показал, что воздействие глицирризина на клетки HeLa значительно снижало жизнеспособность раковых клеток шейки матки в зависимости от времени и ...

Франкевич В.Е., Назарова Н.М., Довлетханова Э.Р., Гусаков К.И., Кононихин А.С., Бугрова А.Е., Бржозовский А.Г., Прилепская В.Н., Стародубцева Н.Л., Сухих Г.Т.