Акушерство и Гинекология №7 / 2017
Различные методики оплодотворения ооцитов и их взаимосвязь c результативностью программ вспомогательных репродуктивных технологий при лечении бесплодия
ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва
Цель исследования. Определить связь между типом оплодотворения ооцитов, эмбриологическими параметрами, клиническими исходами в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) с применением различных методик оплодотворения.
Материал и методы. В ходе проспективного исследования случай-контроль обследованы 196 супружеских пар, разделеных на 3 группы в зависимости от типа оплодотворения: I группа – 32 пары, которым производилось стандартное ЭКО, II группа – 105 пар, которым производилась интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида в ооцит (ИКСИ), III группа – 59 пар, которым производилась интрацитоплазматическая инъекция в ооцит сперматозоида, отобранного по способности связывания с гиалуроновой кислотой (ПИКСИ). Были оценены эмбриологические параметры (процент оплодотворения ооцитов; процент бластуляции) и клинические исходы в программах ВРТ.
Результаты. В сравниваемых группах отмечена статистически значимая ассоциация между типом оплодотворения ооцитов пациентки и процентом имплантации. Имелись достоверные различия по частоте имплантации между II и III группами (по критерию χ2=6,0; P=0,014). В первой группе процент имплантации составил 40,5%, во второй – 33,1%, в третьей – 50%. По частоте наступления клинической беременности также выявлена статистически значимая разница. В группе ПИКСИ частота наступления клинической беременности была выше и составила 59,3% (35 пациенток), в I группе (стандарное ЭКО) – 40,6% (13 пациенток), во II группе (ИКСИ) – 38,1% (40 пациенток). Статистически значимых различий между процентом оплодотворения ооцитов и бластуляции не выявлено. Однако доля неразвивающихся беременностей в I группе пациентов (стандартное ЭКО) составила 7,7%, тогда как в группах ИКСИ и ПИКСИ – 31 и 11% соответственно, что подтверждает принципиальную роль физиологического отбора сперматозоидов при стандарном оплодотворении (ЭКО) и использовании гиалуроновой кислоты как «селектора» гамет (ПИКСИ). Также были обнаружены значимые различия по проценту живорождения на количество наступивших беременностей после проведения программ ВРТ в пользу I группы с использованием стандарного ЭКО и III группы с применением методики «физиологический» селекции мужских гамет для ИКСИ по сравнению со
II группой, где проводилось ИКСИ. Кроме того, в сравниваемых группах отмечалось статистически значимое различие относительно процента живорождения на перенос эмбриона в полость матки: в
I группе (стандартное ЭКО) – 36,4% из расчета на 1 эмбрион, тогда как во II группе (ИКСИ) – 27,6%, а в III группе (ПИКСИ) – 53,30%.
Заключение. Накопленные на сегодня данные подтверждают перспективность изучения значимости различных современных методик селекции мужских половых клеток в целях дифференциального подхода к лечению супружеских пар. Проведенные исследования демонстрируют обнадеживающие результаты, которые могут быть применены в клинической практике не только для оптимизации выбора методики оплодотворения, но и для расширения объема обследования перед проведением программы ЭКО.
Бесплодие, по данным ВОЗ, занимает пятое место (после алкоголизма, депрессии, травм и нарушений зрения) среди заболеваний у населения в возрасте до 60 лет [1]. Мужской фактор является причиной бесплодного брака практически в 50% случаев [2, 3] как в сочетанном, так и в изолированном виде [4]. В России частота первичного бесплодия составляет от 2 до 3%, вторичного – более 13% в популяции. За последние 20 лет выявляемость мужского бесплодия увеличилась с 30 до 50% бесплодных браков, и по различным прогнозам, к 2019 гг. мужское бесплодие вырастет на 6,6% [5, 6], что отрицательно повлияет на демографическую ситуацию. Непрерывное совершенствование методов вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) позволило значительно расширить возможности лечения различных форм как женского, так и мужского бесплодия. Так как успех оплодотворения и последующего развития эмбриона зависит от параметров ядерной и цитоплазматической компетентности как женской, так и мужской половой клетки, при проведении программы ЭКО необходим тщательный отбор гамет. С внедрением методики оплодотворения ооцитов методом ИКСИ (интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида в ооцит) появилась перспектива решения проблемы мужского бесплодия. Однако визуальная оценка лишь по таким критериям, как морфология и подвижность может допустить отбор единичного сперматозоида, несущего разного рода патологии, что подчеркивает особую важность селекции сперматозоидов для ИКСИ.
Метод селекции сперматозоидов по способности связываться с гиалуроновой кислотой (ГК) – основным компонентом ооцит-кумулюсного комплекса (физиологическая ИКСИ, ПИКСИ) является современной модификацией ИКСИ.
ГК в качестве «физиологического селектора», применима на практике in vitro и может служить для улучшения вклада отцовского генома в развитие эмбриона при искусственном оплодотворении и, таким образом, оказать положительное влияние на клинические исходы при лечении бесплодия.
В ряде крупных исследований отмечена положительная тенденция в отношении качества полученных эмбрионов [7, 8] и частоты наступления беременности. Имеются публикации, которые демонстрируют статистически значимое снижение частоты самопроизвольных абортов после ИКСИ связанными с ГК сперматозоидами в сравнении с теми, что были отобраны лишь посредством визуальной оценки. Данные клинические результаты подтверждают выводы, полученные в проведенных ранее исследованиях биохимических и молекулярных маркеров функциональной зрелости сперматозоидов человека [8].
Кроме того, использование для ИКСИ сперматозоидов, отобранных при помощи ГК, увеличивает показатель частоты имплантаций [7].
Эти результаты свидетельствуют об отсутствии негативных последствий, оказываемых на ооциты-реципиенты и преимплантационный эмбриогенез при использовании ГК для отбора сперматозоидов в циклах ИКСИ. Улучшение качественных характеристик сперматозоидов, способных связываться с ГК, подтверждено рядом исследований. Так, было продемонстрировано отсутствие фрагментации ДНК в ядре сперматозоидов, связавшихся с ГК [9]. Кроме того, была доказана эффективность селекции сперматозоидов, связывающихся с ГК, в снижении частоты анеуплоидий как при олигозооспермии, так и при нормальной концентрации половых клеток. При этом наблюдается существенное уменьшение частоты дисомий и диплоидий хромосом [10].
Благодаря полному отсутствию токсичности ГК, а также возможности снижать частоту возникновения генетических осложнений, применение методики ПИКСИ в качестве альтернативы традиционному ИКСИ позволит существенно улучшить характеристики преимплантационного эмбриогенеза и, в конечном счете, увеличить количество благоприятных исходов ВРТ.
Жизненно важная роль передачи генетически полноценного материала заставила ученых сосредоточиться на исследовании эффективности различных методик селекции мужских половых клеток для оплодотворения in vitro [11–17].
На сегодняшний день в нашей стране определение значимости «физиологической» селекции сперматозоидов в исходах программы ЭКО и отработка показаний к ее использованию представляется актуальным и перспективным.
Цель исследования: определить связь между различными методиками отбора сперматозоидов перед проведением программы ЭКО, эмбриологическими параметрами (процент оплодотворения ооцитов, процент бластуляции) и клиническими исходами в программах ВРТ.
Материал и методы исследования
На базе отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия и лаборатории цитологии ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России проведено проспективное исследование случай-контроль.
В процессе лечения были применены различные методики оплодотворения ооцитов (стандартное ЭКО, ИКСИ, ПИКСИ), были оценены эмбриологические параметры (процент оплодотворения ооцитов; процент бластуляции, процент имплантации), клинические и...
