Эпидемиология и Инфекционные болезни. Актуальные вопросы №2 / 2015
Разработка диагностической системы в формате ОТ-ПЦР в реальном времени для выявления РНК вируса Эбола Заир
1Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва; 2НИИ медицины труда РАН, Москва; 3Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Новосибирск
В феврале 2014 г. на территории Республики Гвинея возникла вспышка лихорадки Эбола, распространившаяся затем на ряд соседних стран с общим количеством населения около 25 млн человек. Для предотвращения распространения этого опасного заболевания на территорию Российской Федерации разработана диагностическая система в формате ОТ-ПЦР в реальном времени для выявления РНК вируса Эбола Заир в биологических образцах. Аналитическая чувствительность системы составила 1–2 x 103 ГЭ/мл. Высокая специфичность системы показана на репрезентативной выборке генетического материала вирусного и бактериального происхождения, а также на образцах от клинически здоровых людей.
В настоящее время к роду Ebolavirus, входящему в семейство Filoviridae, относят 5 видов вирусов: Заир (EBOV), Судан (SUDV), Рестон (RESTV), Бундибуджио (BDBV) и вирус леса Таи (TAFV) [1]. Из них 3 (EBOV, SUDV и BDBV) являются возбудителями острых лихорадок людей – лихорадок Эбола, летальность которых при отсутствии должного лечения варьирует, по разным оценкам, от 65–75% для EBOV до 55–58% для SUDV и BDBV [2–7]. Впервые человечество столкнулось с лихорадкой Эбола в 1976 г., когда сначала в Судане, а затем и в Республике Заир (ныне Демократическая Республика Конго) разразились вспышки, вызванные вирусами SUDV и EBOV. Наибольшее количество пострадавших было зарегистрировано в Республике Заир. Оно составило 318 человек [4]. В последующие годы спорадические вспышки лихорадки Эбола происходили на территории Центральной Африки, однако вспышка 1976 г. до недавнего времени считалась крупнейшей.
В феврале 2014 г. на территории Республики Гвинея возникла вспышка лихорадки Эбола, вызванная вирусом Заир (EBOV), которая распространилась на 5 стран, включая Гвинею, Либерию, Нигерию, Сенегал и Сьерра-Леоне [8]. Особенностью данной вспышки, переросшей в эпидемию, стало то обстоятельство, что территорией распространения инфекции стала Западная Африка, где ранее циркуляции вирусов рода Эбола не наблюдалось. По этой причине и в силу плохого оснащения лабораторной службы выявление возбудителя произошло с большой задержкой, что привело к запаздыванию соответствующих противоэпидемических мероприятий и распространению инфекции из сельской местности на городские территории с общим количеством населения около 25 млн человек. Поэтому, несмотря на то, что лихорадка Эбола считается природно-очаговым зоонозом, в настоящее время сложились условия, при которых данное заболевание распространяется в человеческой популяции без участия природного резервуара.
Несмотря на усилия мирового сообщества, число случаев заболевания лихорадкой Эбола в Западной Африке продолжает расти. По данным на 07.01.2015, общее число заболевших составило 20 747 человек, из них 8235 случаев закончились смертельным исходом [9]. Параллельно в Демократической Республике Конго возникла эндемическая вспышка лихорадки Эбола, также вызванная вирусом Заир (EBOV), который, однако, генетически отличен от изолятов, циркулирующих в Западной Африке [10].
Тяжелая эпидемическая ситуация на Африканском континенте повышает вероятность завоза данного инфекционного агента на территорию Российской Федерации, что требует от компетентных служб выработки стратегии по недопущению распространения вируса Эбола Заир на территорию нашей страны. Одним из компонентов успешной реализации данной стратегии, безусловно, является наличие современных высокочувствительных и специфичных диагностических систем, позволяющих в сжатые сроки достоверно подтвердить наличие либо отсутствие вируса Эбола Заир в образцах от пациентов с подозрением на лихорадку Эбола. На сегодняшний день наиболее чувствительными, специфичными и требующими наименьших временных затрат при проведении анализа являются диагностические системы, принцип действия которых основан на методе ПЦР в реальном времени.
Цель работы – разработка диагностической системы в формате ОТ-ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией сигнала для выявления РНК вируса Эбола Заир в биологических ...
