Рецептивность эндометрия в программе экстракорпорального оплодотворения в зависимости от концентрации прогестерона в день введения триггера овуляции

DOI: https://dx.doi.org/10.18565/aig.2016.1.56-62

27.01.2016
818

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва
Цель исследования. Оценить влияние концентраций сывороточного прогестерона (Р) в день введения триггера овуляции на рецептивность эндометрия в программе ЭКО. Материал и методы исследования. Обследовано 274 пациентки с трубно-перитонеальным и/или мужским факторами бесплодия и 19 доноров ооцитов, которым проведена программа ЭКО. Аспирационная пайпель-биопсия эндометрия выполнена в день забора ооцитов у 36 женщин, которым был отменен перенос эмбрионов. Проведено гистологическое (датирование эндометрия по критериям Noyes, определение пиноподий), иммуногистохимическое (экспрессия эстрогеновых (ЭР)α и прогестероновых рецепторов (ПР)-А, LIF) и молекулярно-генетическое (экспрессия мРНК генов IL1В, IL2, LIF, LIFR, IL8, IL15, IL18, HBEGF, IGFBP1, IGF1, VEGFА, VEGFА изоформа 189, TNFА, MMP11, PTGS2, CD56, CD 68, ESR1, PGR, MSX1(HOX7), HOXA10, HOXA11) исследования. Для верификации преждевременной лютеинизации (ПЛ) использовали пороговый уровень сывороточного Р в день введения триггера овуляции ≥4,77 нмоль/л. В зависимости от концентрации преовуляторного Р пациентки были разделены: 1 группа (n=16) – Р≥4,77 нмоль/л; 2 группа (n=20) – Р<4,77 нмоль/л. Результаты исследования. При развитии ПЛ наблюдалось более существенное опережение развития эндометрия, чем в группе с нормальным уровнем Р (3,9±0,6 и 2,3±0,3 дня; р=0,048); зрелые пиноподии выявлялись с одинаковой частотой у пациенток с нормальным и повышенным уровнем преовуляторного Р (95 и 93,7%; р=0,918), при этом их количество было существенно выше у пациенток с ПЛ (Ме 25 и 15%; р=0,026). Отмечена статистически значимая разница экспрессии ПР в железах и строме; экспрессия ЭРα как в железах, так и строме была сопоставима между группами. Экспрессия LIF в строме эндометрия была существенно выше у пациенток в повышенным уровнем Р (3,2±0,5 и 1,6±0,4 балла; р=0,05). Экспрессия мРНК гена TNFА была снижена в 1,4 раза (р=0,042). При опережении развития эндометрия более чем на 3 дня существенно снижалась экспрессия мРНК ключевых генов маркеров имплантации: HOXA11 – в 1,8 раз (р=0,022), IGFBP1 – в 5 раз (р=0,028), CD68 – в 1,7 раза (р=0,043). Заключение. У пациенток с ПЛ наблюдается опережение созревания эндометрия в среднем на 3,9±0,6 дня, ранняя экспрессия LIF преимущественно в строме эндометрия, умеренная экспрессия ПР в железах и строме, появление зрелых пиноподий более чем на 20% поверхности эпителия, изменение профиля экспрессии мРНК генов маркеров имплантации, что является подтверждением нарушения рецептивности эндометрия и прогностическими факторами неудач имплантации в программе ЭКО.

Повышение эффективности методов вспомогательных репродуктивных технологий является актуальной задачей современной репродуктивной медицины [1]. Известно, что эффективность программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) во многом зависит от функциональной зрелости и готовности эндометрия к имплантации, а также от синхронизации с развитием эмбриона. В работах последних лет обсуждается неблагоприятное воздействие овариальной стимуляции в программе ЭКО на имплантационный потенциал эндометрия, что проявляется преждевременной секреторной трансформацией и дискоординацией созревания эндометрия, нарушением рецептивности в «окно имплантации», и как следствие – к неудачам имплантации даже при переносе эмбрионов высокого качества [2, 3].

В последние годы предметом активного обсуждения исследователей является феномен преждевременной лютеинизации (ПЛ) – повышение концентраций сывороточного прогестерона (Р) в день введения триггера овуляции) и механизмы его влияния на рецептивность эндометрия в циклах овариальной стимуляции. ПЛ потенцирует негативное влияние овариальной стимуляции на эндометрий и усугубляет нарушение его рецептивности [4]. Ряд исследований свидетельствуют об отсутствии имплантации эмбрионов при опережении развития эндометрия более, чем на 3 дня согласно критериям Noyes [5, 6]. Прямые доказательства негативного влияния повышенных концентраций преовуляторного Р на эндометрий были показаны лишь в единичных исследованиях при анализе профиля экспрессии мРНК генов маркеров рецептивности [3, 6, 7], что требует продолжения исследований.

Цель исследования: оценить влияние концентраций сывороточного Р в день введения триггера овуляции на рецептивность эндометрия в программе ЭКО.

Материал и методы исследования

В исследование включены 293 пациентки, обратившиеся для проведения программы ЭКО в 1-ое гинекологическое отделение ФГБУ НЦАГиП им. В.И. Кулакова Минздрава России в период с октября 2011 г. по май 2014 г.

Стимуляцию суперовуляции проводили по стандартному длинному протоколу с использованием препаратов рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона и человеческого менопаузального гонадотропина. В день введения овуляторной дозы хорионического гонадотропина человека 10000 МЕ определяли сывороточную концентрацию Р. Для верификации ПЛ использовали пороговый уровень сывороточного Р≥4,77 нмоль/л (1,5 нг/мл; коэффициент пересчета 3,18) [8].

Группу исследования для изучения состояния эндометрия составили 36 женщин, из них 17 пациенток с трубно – перитонеальным и/или мужским (субфертильная сперма) факторами бесплодия, которым был отменен перенос эмбрионов, и 19 доноров ооцитов. Аспирационная пайпель – биопсия эндометрия проводилась из области дна матки с помощью аспирационной кюретки Pipelle de Cornier (Laboratoire C.C.D., Франция) в день трансвагинальной пункции яичников. В зависимости от уровня р в день введения триггера овуляции пациентки были разделены: 1-я группа (n=16) – Р≥4,77 нмоль/л; 2-я группа (n=20) – Р

Проведено морфологическое, иммуногистохимическое (ИГХ) и молекулярно – генетическое исследования эндометрия. Материалы биоптатов фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение 24 ч. Образцы были обработаны по общепринятой стандартной методике и заключены в парафин. Срезы толщиной 4 мкм готовили на роторных микротомах и окрашивали гематоксилином и эозином. Исследование гистологических препаратов проводилось в световом микроскопе при увеличении от х50 до х600. Гистологическое датирование эндометрия, оценку процента клеток поверхностного эпителия с наличием зрелых пиноподий осуществляли в световом микроскопе при увеличении х400 в 5 полях зрения. ИГХ реакции проводили на серийных депарафинированных срезах толщиной 3–4 мкм по общепринятым методикам (DAKO protocols).

Определение стероидных рецепторов проводили с использованием мышиных моноклональных антител к эстрогеновым (ЭР)α (клон 1D5 RTU «DAKO», Дания) и прогестероновым рецепторам (ПР)-А (клон 636 RTU«DAKO», Дания). Для выявления экспрессии лейкемия ингибирующего фактора (LIF) использовали первичные антитела к LIF (R@DSystems, USA, clone: 9824, 1:100).

Анализ результатов ИГХ реакций для ЭРα и ПР-А проводили с учетом количества окрашенных клеток и интенсивности окраски в железах и строме эндометрия, используя метод гистологического счета Н-score по формуле: HS=1a±2b±3c, где а – процент слабо окрашенных клеток, b–процент умеренно окрашенных клеток, с – процен...

Список литературы

1. Kupka M.S., Ferraretti A.P., de Mouzon J., Erb K., D'Hooghe T., Castilla J.A. et al. Assisted reproductive technology in Europe, 2010: results generated from European registers by ESHRE. Hum. Reprod. 2014; 29 (10): 2009-113.

2. Shapiro B.S., Daneshmand S.T., Garner F.C., Aguirre M., Hudson C., Shyni T. Evidence of impaired endometrial receptivity after ovarian stimulation for in vitro fertilization: a prospective randomized trial comparing fresh and frozen-thawed embryo transfer in normal responders. Fertil. Steril. 2011; 96(2): 344-8.

3. Labarta E., Martinz-Conejero J.A., Alama P., Horcajadas J.A., Pellicer A., Simón C., Bosch E. Endometrial receptivity is affected in woman with high circulating progesterone levels at the end of the follicular phase: a functional genomics analysis. Hum. Reprod. 2011; 26(7): 1813-25.

4. Huang C.C., Lien Y.R., Chen H.F., Chen M.J., Shieh C.J., Yao Y.L. et al. The duration of pre-ovulatory serum progesterone elevation before hCG administration affects the outcome of IVF/ICSI cycles. Hum. Reprod. 2012; 27(7): 2036-45.

5. Tavaniotou A., Smitz J., Bourgain C., Devroey P. Ovulation induction disrupts phase function. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2001; 943: 55-63.

6. Van Vaerenbergh I., Fatemi H.M., Blockeel C., Van Lommel L., In't Veld P., Schuit F. et al. Progesterone rise on HCG day in GnRH antagonist/rFSH stimulated cycles affects endometrial gene expression. Reprod. Biomed. Online. 2011; 22(3): 263-71.

7. Li R., Qiao J., Wang L., Li L., Zhen X., Liu P., Zheng X. MicroRNA and microarray evaluation of endometrial receptivity in patients with high serum progesterone levels on the day of hCG administration. Reprod. Biol. Endocrinol. 2011; 9: 29.

8. Bosch E., Labarta E., Crespo J., Simón C., Remohí J., Jenkins J., Pellicer A. Circulation progesterone levels and ongoing pregnancy rates in controlled ovarian stimulation cycles for in vitro fertilization: analysis of over 4000 cycles. Hum. Reprod. 2010; 25(8): 2092-100.

9. Noyes R.W., Hertig A.J., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Fertil. Steril. 1950; 1: 3-25.

10. Ubaldi F., Bourgain C., Tournaye H., Smitz J., Van Steirteghem A., Devroey P. Endometrial evaluation by aspiration biopsy on the day of oocyte retrival in the embryo transfer cycle in patients with serum progesterone rise during the follicular phase. Fertil. Steril. 1997; 67(3): 521-6.

11. Kolibianakis E., Bourgain C., Albano C., Osmanagaoglu K., Smitz J., Van Steirteghem A. et al. Effect of ovarian stimulation with recombinant follicle-stimulating hormone, gonadotropin releasing hormone antagonist, and human chorionic gonadotropin on endometrial maturation on the day of oocyte pick-up. Fertil. Steril. 2002; 78(5): 1025-9.

12. Van Vaerenbergh I., Van Lommel L., Ghislain V., In't Veld P., Schuit F., Fatemi H.M. et al. In GnRH antagonist/rec-FSH stimulated cycles, advanced endometrial maturation on the day of oocyte retrieval correlates with altered expression. Hum. Reprod. 2009; 24(5): 1085-91.

13. Papanikolaou E.G., Bourgain C., Kolibianakis E., Tournaye H., Devroey P. Steroid receptor expression in late follicular phase endometrium in GnRH antagonist IVF cycles is already altered, indicating initiation of early luteal phase transformation in the absence of secretory changes. Hum. Reprod. 2005; 20(6): 1541-7.

14. Chai J., Lee K.F., Ng E.H., Yeung W.S., Ho P.C. Ovarian stimulation modulates steroid receptor expression and spheroid attachment in peri-implantation endometria: studies on natural and stimulated cycles. Fertil. Steril. 2011; 96(3): 764-8.

15. Boomsma C.M., Kavelaars A., Eijkemans M.J., Lentjes E.G., Fauser B.C., Heijnen C.J., Macklon N.S. Endometrial secretion analysis identifies a cytokine profile predictive of pregnancy in IVF. Hum. Reprod. 2009; 24(6): 1427-35.

16. Szostek A.Z., Adamowski M., Galvão A.M., Ferreira-Dias G.M., Skarzynski D. Ovarian steroid-dependent tumor necrosis factor α production and its action on the equine endometrium in vitro. Cytokine. 2014; 67(2): 85-91.

17. Haouzi D., Assou S., Mahmoud K., Tondeur S., Rème T., Hedon B. et al. Gene expression profile of human endometrial receptivity: comparison between natural and stimulated cycles for the same patients. Hum. Reprod. 2009; 24(6): 1436-45.

18. Vitiello D., Kodaman P.H., Taylor H.S. HOX genes in implantation. Semin. Reprod. Med. 2007; 25(6): 431-6.

19. Taylor H.S., Daftery G.S., Selam B. Endometrial HOXA 10 expression after controlled ovarian hyperstimulation with recombinant follicle-stimulating hormone. Fertil. Steril. 2003; 80(2): 839-43.

20. Rackow B.W., Kliman H.J., Taylor H.S. GnRH antagonists may affect endometrial receptivity. Fertil. Steril. 2008; 89(5): 1234-9.

21. Sirayapiwat P., Triratanachat S., Tantbirojn P., Ruangvejvorachai P., Suwajanakorn S. HOXA 10 protein expression in the endometrium of normally menstruating women after receiving GnRH antagonist. Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 2013; 169(2): 321-5.

22. Douglas N.C., Thornton M.H., Nurudeen S.K., Bucur M., Lobo R.A., Sauer M.V. Differential expression of serum glycodelin and insulin-like growth factor binding protein-1 in early pregnancy. J. Reprod. Sci. 2013; 20(11): 1376-81.

23. Haouzi D., Bissonnette L., Gala A., Assou S., Entezami F., Perrochia H. et al. Endometrial receptivity profile in patients with premature progesterone elevation on the day of hCG administration. Biomed. Res. Int. 2014; 2014: 951937. Available at: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4022194/

Поступила 19.10.2015
Принята в печать 27.10.2015

Об авторах / Для корреспонденции

Митюрина Елена Викторовна, врач 1-го гинекологического ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (964) 796-74-65. E-mail: mity-elena@yandex.ru
Перминова Светлана Григорьевна, д.м.н., в.н.с. 1-го гинекологического отделения ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (916) 202-16-87. E-mail: perisvet@list.ru
Демура Татьяна Александровна, д.м.н., с.н.с. 1-патологоанатомического отделения ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-23-11. E-mail: demura-t@yandex.ru
Бурменская Ольга Владимировна, д.б.н., с.н.с. лаборатории молекулярно-генетических методов ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (916) 753-17-09. E-mail: bourmenska@mail.ru
Таболова Виктория Кимовна, аспирант 1-го гинекологического отделения ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (918) 827-58-58. E-mail: tabol93@rambler.ru
Корнеева Ирина Евгеньевна, д.м.н., в.н.с. 1-го гинекологического отделения ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (903) 593-97-48. E-mail: irina.korneeva@inbox.ru
Абубакиров Айдар Назимович, к.м.н., руководитель 1-го гинекологического отделения ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (916) 552-49-91. E-mail: a_abubakirov@oparina4.ru

Для цитирования: Митюрина Е.В., Перминова С.Г., Демура Т.А., Бурменская О.В., Таболова В.К., Корнеева И.Е., Абубакиров А.Н. Рецептивность эндометрия в программе экстракорпорального оплодотворения в зависимости от концентрации прогестерона в день введения триггера овуляции. Акушерство и гинекология. 2016; 1: 56-62.
http://dx.doi.org/10.18565/aig.2016.1.56-62

Полный текст публикаций доступен только подписчикам

Нет комментариев

Комментариев: 0

Вы не можете оставлять комментарии
Пожалуйста, авторизуйтесь