Рецептивность эндометрия в программе экстракорпорального оплодотворения в зависимости от концентрации прогестерона в день введения триггера овуляции

Цель исследования. Оценить влияние концентраций сывороточного прогестерона (Р) в день введения триггера овуляции на рецептивность эндометрия в программе ЭКО. Материал и методы исследования. Обследовано 274 пациентки с трубно-перитонеальным и/или мужским факторами бесплодия и 19 доноров ооцитов, которым проведена программа ЭКО. Аспирационная пайпель-биопсия эндометрия выполнена в день забора ооцитов у 36 женщин, которым был отменен перенос эмбрионов. Проведено гистологическое (датирование эндометрия по критериям Noyes, определение пиноподий), иммуногистохимическое (экспрессия эстрогеновых (ЭР)α и прогестероновых рецепторов (ПР)-А, LIF) и молекулярно-генетическое (экспрессия мРНК генов IL1В, IL2, LIF, LIFR, IL8, IL15, IL18, HBEGF, IGFBP1, IGF1, VEGFА, VEGFА изоформа 189, TNFА, MMP11, PTGS2, CD56, CD 68, ESR1, PGR, MSX1(HOX7), HOXA10, HOXA11) исследования. Для верификации преждевременной лютеинизации (ПЛ) использовали пороговый уровень сывороточного Р в день введения триггера овуляции ≥4,77 нмоль/л. В зависимости от концентрации преовуляторного Р пациентки были разделены: 1 группа (n=16) – Р≥4,77 нмоль/л; 2 группа (n=20) – Р<4,77 нмоль/л. Результаты исследования. При развитии ПЛ наблюдалось более существенное опережение развития эндометрия, чем в группе с нормальным уровнем Р (3,9±0,6 и 2,3±0,3 дня; р=0,048); зрелые пиноподии выявлялись с одинаковой частотой у пациенток с нормальным и повышенным уровнем преовуляторного Р (95 и 93,7%; р=0,918), при этом их количество было существенно выше у пациенток с ПЛ (Ме 25 и 15%; р=0,026). Отмечена статистически значимая разница экспрессии ПР в железах и строме; экспрессия ЭРα как в железах, так и строме была сопоставима между группами. Экспрессия LIF в строме эндометрия была существенно выше у пациенток в повышенным уровнем Р (3,2±0,5 и 1,6±0,4 балла; р=0,05). Экспрессия мРНК гена TNFА была снижена в 1,4 раза (р=0,042). При опережении развития эндометрия более чем на 3 дня существенно снижалась экспрессия мРНК ключевых генов маркеров имплантации: HOXA11 – в 1,8 раз (р=0,022), IGFBP1 – в 5 раз (р=0,028), CD68 – в 1,7 раза (р=0,043). Заключение. У пациенток с ПЛ наблюдается опережение созревания эндометрия в среднем на 3,9±0,6 дня, ранняя экспрессия LIF преимущественно в строме эндометрия, умеренная экспрессия ПР в железах и строме, появление зрелых пиноподий более чем на 20% поверхности эпителия, изменение профиля экспрессии мРНК генов маркеров имплантации, что является подтверждением нарушения рецептивности эндометрия и прогностическими факторами неудач имплантации в программе ЭКО.

Повышение эффективности методов вспомогательных репродуктивных технологий является актуальной задачей современной репродуктивной медицины [1]. Известно, что эффективность программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) во многом зависит от функциональной зрелости и готовности эндометрия к имплантации, а также от синхронизации с развитием эмбриона. В работах последних лет обсуждается неблагоприятное воздействие овариальной стимуляции в программе ЭКО на имплантационный потенциал эндометрия, что проявляется преждевременной секреторной трансформацией и дискоординацией созревания эндометрия, нарушением рецептивности в «окно имплантации», и как следствие – к неудачам имплантации даже при переносе эмбрионов высокого качества [2, 3].

В последние годы предметом активного обсуждения исследователей является феномен преждевременной лютеинизации (ПЛ) – повышение концентраций сывороточного прогестерона (Р) в день введения триггера овуляции) и механизмы его влияния на рецептивность эндометрия в циклах овариальной стимуляции. ПЛ потенцирует негативное влияние овариальной стимуляции на эндометрий и усугубляет нарушение его рецептивности [4]. Ряд исследований свидетельствуют об отсутствии имплантации эмбрионов при опережении развития эндометрия более, чем на 3 дня согласно критериям Noyes [5, 6]. Прямые доказательства негативного влияния повышенных концентраций преовуляторного Р на эндометрий были показаны лишь в единичных исследованиях при анализе профиля экспрессии мРНК генов маркеров рецептивности [3, 6, 7], что требует продолжения исследований.

Цель исследования: оценить влияние концентраций сывороточного Р в день введения триггера овуляции на рецептивность эндометрия в программе ЭКО.

Материал и методы исследования

В исследование включены 293 пациентки, обратившиеся для проведения программы ЭКО в 1-ое гинекологическое отделение ФГБУ НЦАГиП им. В.И. Кулакова Минздрава России в период с октября 2011 г. по май 2014 г.

Стимуляцию суперовуляции проводили по стандартному длинному протоколу с использованием препаратов рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона и человеческого менопаузального гонадотропина. В день введения овуляторной дозы хорионического гонадотропина человека 10000 МЕ определяли сывороточную концентрацию Р. Для верификации ПЛ использовали пороговый уровень сывороточного Р≥4,77 нмоль/л (1,5 нг/мл; коэффициент пересчета 3,18) [8].

Группу исследования для изучения состояния эндометрия составили 36 женщин, из них 17 пациенток с трубно – перитонеальным и/или мужским (субфертильная сперма) факторами бесплодия, которым был отменен перенос эмбрионов, и 19 доноров ооцитов. Аспирационная пайпель – биопсия эндометрия проводилась из области дна матки с помощью аспирационной кюретки Pipelle de Cornier (Laboratoire C.C.D., Франция) в день трансвагинальной пункции яичников. В зависимости от уровня р в день введения триггера овуляции пациентки были разделены: 1-я группа (n=16) – Р≥4,77 нмоль/л; 2-я группа (n=20) – Р<4,77 нмоль/л.

Проведено морфологическое, иммуногистохимическое (ИГХ) и молекулярно – генетическое исследования эндометрия. Материалы биоптатов фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение 24 ч. Образцы были обработаны по общепринятой стандартной методике и заключены в парафин. Срезы толщиной 4 мкм готовили на роторных микротомах и окрашивали гематоксилином и эозином. Исследование гистологических препаратов проводилось в световом микроскопе при увеличении от х50 до х600. Гистологическое датирование эндометрия, оценку процента клеток поверхностного эпителия с наличием зрелых пиноподий осуществляли в световом микроскопе при увеличении х400 в 5 полях зрения. ИГХ реакции проводили на серийных депарафинированных срезах толщиной 3–4 мкм по общепринятым методикам (DAKO protocols).

Определение стероидных рецепторов проводили с использованием мышиных моноклональных антител к эстрогеновым (ЭР)α (клон 1D5 RTU «DAKO», Дания) и прогестероновым рецепторам (ПР)-А (клон 636 RTU«DAKO», Дания). Для выявления экспрессии лейкемия ингибирующего фактора (LIF) использовали первичные антитела к LIF (R@DSystems, USA, clone: 9824, 1:100).

Анализ результатов ИГХ реакций для ЭРα и ПР-А проводили с учетом количества окрашенных клеток и интенсивности окраски в железах и строме эндометрия, используя метод гистологического счета Н-score по формуле: HS=1a±2b±3c, где а – процент слабо окрашенных клеток, b–...

Митюрина Е.В., Перминова С.Г., Демура Т.А., Бурменская О.В., Таболова В.К., Корнеева И.Е., Абубакиров А.Н.