Результаты предимплантационной диаг­ностики FISH-методом супружеских пар с нормальным кариотипом

Предымплантационная диагностика (ПД) с использованием молекулярно-цитогенетического FISH-метода проведена у 37 супружеских пар, страдающих бесплодием, в 41 цикле стимуляции суперовуляции. Частота анеуплоидии у эмбрионов по хромосомам 13, 21 составила 38,2%, при исследовании хромосом X, Y, 21—30,4%. Установлено, что при одновременной анеуплоидии различных хромосом несоответствие по морфологическому строению отмечается чаще, чем при анеуплоидии одной хромосомы: от 37,5% (при исследовании хромосом X, Y, 21) до 40% (при исследовании хромосом 13,21) против соответственно 16,7 и 35%. Использованный метод ПД является высокоэффективным для профилактики рождения генетически больного потомства.

Предымплантационная диагностика (ПД) направлена на выбор генетически здоровых эмбрионов in vitro и их перенос в полость матки женщины в рамках программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Изначально ПД стала применяться для супружеских пар, имеющих высокий риск рождения ребенка с X-сцепленными заболеваниями и включенных в программу ЭКО [2, 3].

Дальнейшее развитие методов ПД позволило использовать ее не только для определения пола, но и для выявления анеуплоидий, хромосомных транслокаций, генных мутаций [1, 4, 7]. Перенос эмбрионов без хромосомных нарушений может повысить эффективность программ ЭКО и предупредить рождение больных детей в этой группе пациентов.

Цель исследования — определить частоту анеуплоидий хромосом 13 и 21, X, Y, 21 у эмбрионов супружеских пар с нормальным кариотипом, включенных в программы вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).

Материал и методы исследования

Исследование проведено на эмбрионах 37 супружеских пар с бесплодием в 41 цикле стимуляции суперовуляции.

У 15 супружеских пар ПД эмбрионов была проведена с исследованием хромосом 13, 21 в 19 циклах ВРТ. У одной супружеской пары было проведено 3 цикла ВРТ, у одной — 2. Средний возраст пациенток в этой группе составил 36 лет. Показаниями к проведению диагностики были возраст супругов и в ряде случаев желание самих пациенток (1-я группа).

У 22 супружеских пар в 22 циклах ВРТ была проведена ПД с исследованием хромосом Х, Y и21. Средний возраст пациенток в этой группе составил 34,7 года (2-я группа). Доля женщин в возрасте старше 35 лет в 1-й группе составила 50,4%, во 2-й группе — 34,9%.

Биопсию бластомеров проводили на 3-й день развития эмбриона in vitro. Для диагностики и последующего переноса выбирали эмбрионы, имеющие 6-10 бластомеров и фрагментацию не более 50%. Эмбрионы с фрагментацией бластомеров более 50% в ряде случаев подвергали биопсии по просьбе пациентов.

В качестве основы подготовки ядра и гибридизации in situ служил протокол, рекомендуемый фирмой-производителем. В ходе исследования данный протокол нами был оптимизирован.

Для идентификации хромосом в ядрах бластомеров применяли зонды фирмы «ABBOTТ» (Vysis, каталожные номера: 05J38-010, 32-131023, 32-132024, 32-190002). Микроскопический анализ проводили при увеличении 100×10 с использованием флюоресцентного микроскопа Axioplan 2 фирмы «Zeiss», оборудованного соответствующим набором фильтров фирмы «ABBOTТ» (Vysis) и системой автоматического анализа изображения ISIS, разработанной фирмой «Metasystems».

Результаты исследовани...

Лебедева О.Е., Глинкина Ж.И., Иконников М.В., Романова Н.В.