Роль активности теломеразы в неинвазивной диагностике рака мочевого пузыря

Цель исследования. Оценить возможность применения определения активности теломеразы (АТ) в клеточном материале мочи для неинвазивной диагностики рака мочевого пузыря (РМП).
Материалы и методы. Оценка АТ проведена в моче 48 больных РМП (основная группа) до и после трансуретральной резекции стенки мочевого пузыря (n=38), открытой резекции мочевого пузыря (n=4), цистэктомии (n=6). Также АТ была оценена в 48 образцах опухолевой ткани, полученной от этих пациентов в ходе оперативного удаления опухоли мочевого пузыря. Каждый образец опухолевой ткани был разделен на две части, одна из которых была подвергнута гистологическому исследованию, вторая использована для определения активности теломеразы. Диагноз РМП был подтвержден морфологически во всех наблюдениях. Определение АТ в образцах проводили с помощью модифицированного TRAP-метода (telomerase repeat amplification protocol), ОТ-ПЦР, ПЦР; электрофореза. В качестве контроля исследовали клеточный материал мочи и ткани 12 пациентов с хроническим циститом.
Результаты. Перед операцией АТ была выявлена в 45 (93,75%) из 48 образцов клеточного материала мочи больных с подозрением на РМП. У всех больных данной группы был гистологически верифицирован РМП. Ни в одном из 48 образцов клеточного материала мочи пациентов с РМП в послеоперационном периоде АТ не определена. В контрольной группе пациентов с гистологически верифицированным циститом слабая АТ отмечена лишь в одном образце клеточного материала мочи. Проведенный анализ указывает на статистически значимое преобладание больных РМП при наличии в моче АТ (р=0,001). Активность теломеразы была обнаружена во всех образцах опухолевой ткани. Также мы проанализировали зависимость уровня АТ в моче и ткани от степени дифференцировки РМП. В клеточных материалах мочи больных высокодифференцированным РМП (n=15) средняя АТ составила 0,61%, умереннодифференцированным РМП (n=23) – 0,95%, низкодифференцированным РМП (n=10) – 1,33%, т.е. имело место повышение уровня АТ в моче по мере снижения степени дифференцировки. Это может использоваться в возможности прогнозирования течения заболевания на основании определения уровня АТ у данной группы пациентов.
Выводы. Предварительные данные свидетельствуют о возможности применения определения АТ клеточного материала мочи в диагностике и контроле рецидивирования РМП.

Введение. Рак мочевого пузыря (РМП) является распространенным онкологическим заболеванием, встречается в 15 из 100 тыс. случаев и занимает второе место после рака простаты среди онкозаболеваний мочеполовой системы [1, 2]. По данным официальной статистики за 2010 г., в РФ было зарегистрировано 13 562 случая РМП, при этом в России на долю данного вида рака приходится 4,5% всех злокачественных новообразований.

Диагностика РМП и оценка степени распространенности опухолевого процесса основываются на использовании лабораторных, ультразвуковых, рентгенологических (КТ, МРТ), эндоскопических методов. «Золотым» стандартом диагностики РМП остается цистоскопия. С помощью цистоскопии с последующей ТУР-биопсией стенки мочевого пузыря можно установить не только диагноз, но и стадию РМП. Данный метод диагностики является высокоинформативным, но инвазивным. Цитологическое исследование мочи – неинвазивный метод диагностики РМП, однако его чувствительность и специфичность не очень высоки и составляют, по разным данным, 44 и 98% соответственно[3, 4].

Как известно, РМП характеризуется высоким риском рецидивирования. Цистоскопия при РМП является наиболее часто используемым методом для обнаружения возможного рецидива РМП. Обследование должно проводиться каждые 3 мес в течение 2 лет после лечения, через каждые 6 мес в следующие 2 года и далее 1 раз в год. При обнаружении рецидива протокол возобновляется. Ввиду инвазивности цистоскопии больной может не соблюдать предписанной выше схемы обследования, что может стать причиной несвоевременного выявления рецидива РМП, а значит, обусловить неблагоприятный исход болезни. В связи с этим большой интерес представляет внедрение неинвазивных методов диагностики, в частности исследование онкомаркеров РМП в клеточном материале мочи.

Выявление рецидива РМП на ранней стадии считается важным условием успешности лечения, в связи с этим актуальной задачей современной онкологии является поиск онкомаркера, позволяющий рано диагностировать рецидив заболевания [6]. Определение онкомаркеров в клеточном материале мочи, возможно, приведет к сокращению числа контрольных цистоскопий, что позволит повысить качество жизни пациентов, находящихся под наблюдением [5, 6]. Одним из таких онкомаркеров является теломераза.

Ключевым признаком опухолевой клетки является способность к неограниченному делению, что делает ее условно бессмертной [7]. Пролиферативный потенциал опухолевых клеток тесно связан с наличием в них активной теломеразы. Теломераза – фермент, синтезирующий теломерные повторы ДНК (ТТАGGG у млекопитающих) на 3’-концах хромосом. Функционально теломераза является холоферментом, состоящим из двух главных субъединиц: РНК-компонента hTR и каталитической белковой субъединицы hTERT. В большинстве здоровых тканей hTR экспрессируется конститутивно, а экспрессия hTERT, необходимая для проявления активности теломеразы (АТ), индуцирована [8]. Экспрессия hTERT непосредственно связана с регуляцией активности фермента, в то время как экспрессия hTR осуществляется независимо от АТ [9]. Многие авторы считают, что информация об АТ может иметь большое значение в диагностике рака [8–10]. Возможность использования теломеразы в диагностических тестах довольно велика, так как позитивный результат может быть получен при наличии в образце всего лишь нескольких опухолевых клеток, при этом важно, что для диагностики могут оказаться пригодными образцы, полученные неинвазивными и минимально инвазивными способами. Согласно данным литературы, АТ присутствует в большинстве злокачественных опухолей [16, 17], в том числе и в клетках РМП [18].

Например, АT в случае карциномы МП была обнаружена в эксфолиативных раковых клетках мочи и промывной жидкости [11, 12]. Чувствительность определения АТ в клеточном материале мочи у больных РМП составляет 70–94%, специфичность – 88–99% [13]. Предполагают, что кроме диагностики АT может найти применение и в прогнозировании исхода болезни. Как показывают результаты экспериментов, для некоторых видов опухолей существует корреляция между АT и определенными клинико-патологическими показателями. Диагностический и прогностический потенциал теломеразы требует дальнейшего изучения с привлечением большего числа больных с более длительными сроками наблюдения. Для этих целей также необходимо усовершенствование методов количественного определения АT.

Цель исследования: оценить возможность применения определения АТ в клеточном материале мочи для неинвазивной диагностики РМП.

Материалы и методы. Обследованы 60 пациентов, среди них 48 (80%) мужч...

П.В. Глыбочко, Ю.Г. Аляев, Н.В. Потолдыкова, К.А. Поляковский, А.З. Винаров, А.И. Глухов, С.А. Гордеев