Роль генетических и аутоиммунных нарушений в развитии преждевременной недостаточности яичников.

Цель исследования. Выявление связи длин CGG-повторов в гене FMR1 с генезом преждевременной недостаточности яичников (ПНЯ). Материал и методы. В исследование включены 78 пациенток с ПНЯ, которым было проведено молекулярно-генетическое обследование и аутоиммунный скрининг. Пациентки были распределены в 3 группы: группа А – носители менее 26 повторов, группа В – женщины, у которых оба аллеля имели нормальный диапазон повторов (26–34), группа С – женщины, имеющие более 34 CGG-повторов. Определяли генез заболевания во всех 3 группах. Результаты исследования. Сравнительный межгрупповой анализ показал, что аутоиммунный генез ПНЯ статистически значимо чаще встречался у женщин с нормальными длинами CGG-повторов по сравнению с носительницами бóльшего и мéньшего числа CGG-повторов (71,8% – в группе В, 8,32% – в группе А и 4,54% – в группе С, р=0,002). Доля больных с нормальной длиной повторов среди пациенток с аутоиммунным генезом составила 88,4%. При проведении сравнительного анализа гормональных показателей было установлено, что у 26 пациенток с аутоиммунным генезом ПНЯ уровень антимюллерового гормона в среднем составил 0,13±0,03 нг/мл по сравнению с 0,06±0,01 нг/мл (р<0,05) у пациенток с другими причинами заболевания, что указывает на некоторую сохранность примордиального пула при аутоиммунных поражениях. Заключение. Наличие нормальной длины CGG-повторов в гене FMR1 у пациенток с ПНЯ может указывать на наличие аутоиммунной формы ПНЯ, т.к. в ее развитии в бóльшей степени задействованы не молекулярно-генетические причины, а аутоиммунные детерминанты. В то же время аномальная длина CGG-повторов может являться ранним прогностическим критерием формирования молекулярно-генетической формы ПНЯ.

Преждевременная недостаточность яичников (ПНЯ) представляет собой одно из наиболее загадочных заболеваний репродуктивной системы и требует мультидисциплинарного подхода. Эта патология встречается у 1–2% женщин и проявляется вторичной гипергонадотропной аменореей в возрасте до 40 лет [20]. В настоящее время не разработаны критерии, на основании которых можно было бы прогнозировать развитие этой патологии. Гормональные и биохимические тесты не позволяют предсказать скорость ежемесячной потери фолликулов и установить истинный биологический возраст яичников [9]. Все выше представленное требует поиска новых адекватных молекулярно-биологических маркеров оценки скорости старения яичников, которые в ряде случаев позволят прогнозировать их преждевременное истощение.

В качестве причин ПНЯ в настоящее время рассматриваются различные молекулярно-генетические, а также эпигенетические (неслучайная инактивация Х хромосомы) изменения Х хромосомы. К ним относится также премутация в гене FMR1 (число CGG-повторов 54–200), которая долгое время относилась к ведущему фактору риска развития ПНЯ [5, 8, 19, 21]. В последние годы было показано, что нормальное число CGG-повторов, находящееся в пределах 26–34 (в среднем 30), косвенно позволяет судить о нормальной функции яичников и прогнозировать их своевременное выключение [6, 14]. В том случае, если число тринуклеотидных повторов ниже или выше этих значений, существует риск развития ПНЯ [12, 17].

Ранее нами было показано, что у 45% пациенток с ПНЯ на фоне выключенной функции яичников
число CGG-повторов в гене FMR1 соответствовало нормальному диапазону, что, по-видимому, исключает молекулярно-генетические нарушения как ведущую причину преждевременного истощения у них примордиального пула [4]. Все вышеизложенное явилось основанием для углубленного клинико-лабораторного обследования этой группы больных с целью уточнения генеза преждевременного старения яичников. Целью исследования явилось изучение связи длин CGG-повторов в гене FMR1 с генезом ПНЯ.

Материал и методы исследования

Были обследованы 78 пациенток с диагнозом ПНЯ, который был подтвержден на основании следующих клинико-лабораторных критериев. Уровень фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) составил 101,71±38,09 МЕ/л, лютеинизирующего гормона(ЛГ) – 59,35±39,82 МЕ/л, антимюллерового гормона (АМГ) – 0,2±0,03 нг/мл, концентрация эстрадиола (Е2) – 87,33±70,25 пмоль/л. По данным ультразвукового исследования, объемы яичников в среднем составили 2,52±1,92 см3 для правого яичника и 2,34±1,86 см3 – для левого.

Основной жалобой у всех больных было нарушение менструального цикла в виде вторичной аменореи и бесплодие (100%). «Приливы» жара отмечали 52 (66,6%) пациентки. На головные боли жаловались 15 (19,2%) пациенток, на повышенную утомляемость и снижение работоспособности – 37 (47,4%), на депрессию – 30 (38,5%), сухость во влагалище – 24 (30,8%) пациентки.

Дизайн исследования: одномоментное в параллельных группах. Группы формировались на основании выявления числа CGG-повторов в аллелях гена FMR1: аллель 1 – с мéньшим числом повторов, 2 – с бóльшим (согласно данным Y.H. Fu и N. Gleicher и соавт.) [14, 12]:
· группа А (аллель 1 <26 триплетных повторов) включала женщин с мéньшим числом CGG-
триплетов, n=24;
· группа В (аллель 1 ≥26 и аллель 2 ≤34) включала женщин с нормальным числом повторов, n=32;
· группа С (аллель 2 >34) состояла из женщин с бóльшим числом триплетных CGG-повторов, n=22.

Функциональное состояние гипоталамогипофизарно-надпочечниково-яичниковой и тиреоидной систем оценивали по результатам определения уровня гипофизарных (ФСГ, ЛГ, тиреотропного гормона – ТТГ), стероидных (Е2, тестостерона – Т, дегидроэпиандростерона – DHEA), АМГ и тиреоидных гормонов (свободного тироксина – Т4св). Эхографию органов малого таза осуществляли с использованием трансабдоминального и эндовагинального конвексных датчиков частотой 3,5, 5 и 7,5 Мгц.

Генетическое тестирование включало оценку наличия неслучайной инактивации Х-хромосомы и числа CGG нуклеотидных повторов в гене FMR1 и производилось в лаборатории молекулярной биологии человека на генетическом анализаторе АВI3100. Определение неслучайной инактивации Х-хромосомы (SXCI) при пороге 80% проводили с помощью метил чувствительного количественного флуоресцентного ПЦР (полимеразная цепная реакция) анализа CAG-повтора в 1 экзоне гена AR.
Исследование полиморфизма гена FMR1 включало определение числа CGG-повторов в 5’-нетранслирующемся районе 1 экзона гена.

Учитывая, что ПНЯ может быть одной из составляющих аутоиммунного полигландулярного синдрома, мы провели исследование яичниковых антител, а также уровней специфических аутоантител к другим органам (щитовидной железе) и неспецифических антител к фосфолипидам, к ядрам клеток и митохондриям. В литературе эта пан...

Шамилова Н.Н., Марченко Л.А., Долгушина Н.В., Кузнецова Е.Б., Залетаев Д.В.