Роль toll-like рецепторов 2, 4, 9-го типов в патогенезе хронического эндометрита

27.12.2015
893

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва
Цель исследования. Изучение экспрессии Toll-like рецепторов (TLRs) 2, 4, 9-го типов в эндометрии при хроническом эндометрите (ХЭ). Материал и методы. В исследование включены 60 пациенток репродуктивного возраста (средний возраст 32,1±5,2 года). Всем пациенткам выполнено морфологическое и микробиологическое исследования биоптатов эндометрия. Изучение экспрессии TLRs 2, 4, 9 проводилось с помощью метода иммуногистохимии (ИГХ) и реакции обратной транскрипции полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОТ-ПЦР). На основе результатов морфологического исследования эндометрия пациентки были разделены на 2 группы: I (n=45) – женщины с морфологически подтвержденным ХЭ, II (n=15) – условно здоровые женщины (эндометрий стадии пролиферации). При статистической обработке использовали U-критерий Манна–Уитни, корреляционный анализ методом Спирмена. Для всех видов анализа статистически значимым считали значения р<0,05. Результаты исследования. В I группе выявлено достоверное повышение экспрессии TLRs в эндометрии по сравнению со II группой (р<0,05). При сравнительном анализе экспрессии TLRs у женщин с ХЭ при наличии и отсутствии инфекционных агентов в биоптатах эндометрия достоверной статистической разницы не отмечено. Установлены слабые прямые корреляционные связи: экспрессии TLR2 между эпителиальными клетками эндометрия методом ИГХ и эндометрия в целом методом ОТ-ПЦР (r=0,3, p=0,024); экспрессии TLR9 между стромальными клетками, сосудами эндометрия методом ИГХ и эндометрия в целом методом ОТ-ПЦР (r=0,3, p=0,028; r=0,3, p=0,023, соответственно). Заключение. Изучение экспрессии TLRs 2, 4, 9 в эндометрии позволило уточнить, что для предотвращения хронизации воспалительного процесса в эндометрии необходимы: быстрая элиминация возбудителя, предупреждение его персистенции, восстановление нормальной архитектоники слизистой оболочки полости матки и подавление гиперпродукции экспрессии TLRs, предрасполагающей к формированию «порочного» патогенетического круга. На основании полученных данных подана заявка на патент № 2015122377 «Способ диагностики и прогнозирования развития хронического эндометрита у женщин репродуктивного возраста по экспрессии Toll-like рецепторов в эндометрии».

«Первая линия» защиты от инфицирования осуществляется эффекторами врожденного иммунитета, обеспечивающими своевременное выявление чужеродных инфекционных агентов и их быструю элиминацию за счет формирования локальной воспалительной реакции с последующей репарацией поврежденной ткани, что необходимо для предотвращения генерализации инфекции [1].

Среди сигнальных рецепторов врожденного иммунитета Toll-like рецепторы (TLRs) являются наиболее древними, генетически детерминированными структурами (трансмембранными белками, содержащими множество остатков лейцина во внеклеточной части). TLRs играют центральную роль в инициации врожденного иммунного ответа, осуществляя непосредственное взаимодействие рецептора с паттернами микробных агентов (липополисахаридами, белками бактериальных жгутиков, вирусной двухцепочечной РНК и др.) [2, 3]. TLRs экспрессируются на поверхности макрофагов, нейтрофилов, естественных киллеров, дендритных клеток, покровного эпителия, эндотелия сосудов и др. [1, 4], и, связываясь с различными лигандами, индуцируют экспрессию цитокинового каскада, формируя воспалительную реакцию, направленную на эрадикацию инфекционного агента [1–3, 5].

Открытие TLRs удостоено многочисленных признаний. В 2010 году Р. Меджитов и J. Hoffmann получили «Премию Розенстилаза» за разъяснение механизмов врожденного иммунитета, в 2011 году C. Janeway и Р. Меджитов – «Премию Шао» за революционную идею о ведущей роли TLRs в активации адаптивного иммунного ответа. Итогом этих инновационных исследований явилось присуждение в 2011 году «Иммунологической Нобелевской премии» по физиологии и медицине B. Beutler и J. Hoffmann за открытия активаторов врожденного иммунитета и R. Steinman за изучение роли дендритных клеток в механизмах приобретенного иммунитета [6].

Открытие TLRs послужило основанием для пересмотра устоявшихся воззрений на некоторые патогенетические механизмы развития хронического эндометрита (ХЭ) и возникновения на его фоне привычного невынашивания беременности, преждевременных родов и внутриутробной задержки развития плода [7]. Представленность TLRs в разных отделах репродуктивного тракта строго специфична [8]: эпителиальные клетки влагалища и эндоцервикса экспрессируют TLR 1-3, TLR5 и TLR6 [9], эндометриальные клетки – TLRs 1–10-го типов, что обусловлено необходимостью ответа на широкий диапазон микробных агентов [10].

Из всех идентифицированных TLRs наиболее широким спектром специфичности обладает TLR2, который располагается на поверхности клетки и связывается с различными лигандами бактерий, вирусов, грибов, простейших [10]. TLR4 также экспрессируется преимущественно на поверхности клетки и распознает, помимо паттернов микроорганизмов, белки теплового шока 60 и 70, полисахаридные фрагменты гепарина сульфата, гиалуроновую кислоту, фибриноген и фибронектин хозяина [10]. TLR9, располагаясь внутриклеточно на поверхности эндосом, распознает неметилированные повторы CpG ДНК бактерий, вирусов, простейших, гемозоин простейших, комплекс хроматина и иммуноглобулин G хозяина [8, 10, 11].

Цель исследования: изучение экспрессии TLRs 2, 4, 9-го типов в эндометрии при ХЭ.

Материал и методы исследования

В исследование включены 60 пациенток репродуктивного возраста (средний возраст 32,1±5,2 года), обратившихся в Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова с различными жалобами (табл. 1). На 7–10-й день менструального цикла 35 пациенткам произведена гистероскопия, диагностическое выскабливание слизистой оболочки полости матки, а 25 – аспирационная биопсия эндометрия с помощью кюретки Pipelle de Cornie. Для изучения врожденного локального иммунного ответа в эндометрии были выбраны 3 рецептора (TLRs 2, 4, 9). Изучение экспрессии TLRs проводилось методом иммуногистохимии (ИГХ) (n=60) и с помощью реакции обратной транскрипции полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОТ-ПЦР) (n=60).

Морфологическое исследование эндометрия (n=60) включало верификацию ХЭ на основе следующих морфофункциональных его характеристик: наличие воспалительных лимфоплазмоклеточных инфильтратов и очагового фиброза в строме эндометрия, склеротических изменений стенок спиральных сосудов слизистой оболочки полости матки.

На основе результатов гистологического исследования эндометрия пациентки были разделены на 2 группы: I (n=45) – женщины с морфологически подтвержденным ХЭ, II (n=15) – группа сравнения, условно здоровые женщины (эндометрий ранней, средней и поздней стадий пролиферации). При этом I группа пациенток на основании морфологической характеристики эндометрия и обязательного наличия клинических проявления ХЭ (аномальные маточные кровотечения и/или нарушения репродуктивной функции) была разделена на 3 подгруппы. Iа подгруппа (n=15) – полный симптомокомплекс ХЭ, который верифицировался при одновременном выявлении воспалительных ли...

Список литературы

  1. Janeway C.A. Jr., Medzhitov R. Innate immune recognition. Annu. Rev. Immunol. 2002; 20:197-216.
  2. Gordon S. Pattern recognition receptors: doubling up for the innate immune response. Cell. 2002; 111(7): 927-30.
  3. Takeuchi O., Sato S., Horiuchi T., Hoshino K., Takeda K., Dong Z. et al. Cutting edge: role of Toll-like receptor 1 in mediating immune response to microbial lipoproteins. J. Immunol. 2002; 169(1): 10-4.
  4. Ковальчук Л.В., Хорева М.В., Варивода А.С. Врожденные компоненты иммунитета: Toll-подобные рецепторы в норме и при патологии. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005; 4: 96-104.
  5. Hirata T., Osuga Y., Hamasaki K., Hirota Y., Nose E., Morimoto C. et al. Expression of toll-like receptors 2, 3, 4, and 9 genes in the human endometrium during the menstrual cycle. J. Reprod. Immunol. 2007; 74(1-2): 53-60.
  6. The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2011. Bruce A. Beutler, Jules A. Hoffmann, Ralph M. Steinman. Available at: http://www.nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/2011/press.html
  7. Girling J.E., Hedger M.P. Toll-like receptors in the gonads and reproductive tract: emerging roles in reproductive physiology and pathology. Immunol. Cell Biol. 2007; 85(6): 481-9.
  8. Horne A.W., Stock S.J., King A.E. Innate immunity and disorders of the female reproductive tract. Reproduction. 2008; 135(6): 739-49.
  9. Fichorova R.N., Cronin A.O., Lien E., Anderson D.J., Ingalls R.R. Response to Neisseria gonorrhoeae by cervicovaginal epithelial cells occurs in the absence of toll-like receptor 4-mediated signaling. J. Immunol. 2002; 168(5): 2424-32.
  10. Aflatoonian R., Fazeli A. Toll-like receptors in female reproductive tract and their menstrual cycle dependent expression. J. Reprod. Immunol. 2008; 77(1): 7-13.
  11. Nasu K., Nahara H. Pattern recognition via the toll-like receptor system in the human female genital tract. Mediators Inflamm. 2010; 2010: 976024.
  12. Сухих Г.Т., Шуршалина А.В. Хронический эндометрит. Руководство. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2010. 64с.
  13. Ковальчук Л.В., Свитич О.А., Ганковская Л.В., Мироншиченкова А.М., Ганковский В.А. Роль Toll-полобных рецепторов в патогенезе инфекционных заболеваний человека. Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». 2012; 2: 147-53
  14. Maeshima N., Fernandez R.C. Recognition of lipid A variants by the TLR4-MD-2 receptor complex. Front. Cell. Infect. Microbiol. 2013; 3: 3.
  15. Cronin J.G., Turner M.L., Goetze L., Bryant C.E., Sheldon I.M. Toll-like receptor 4 and MYD88-dependent signaling mechanisms of the innate immune system are essential for the response to lipopolysaccharide by epithelial and stromal cells of the bovine endometrium. Biol. Reprod. 2012; 86(2): 51.
  16. Hogaboam C.M., Trujillo G., Martinez F.J. Aberrant innate immune sensing leads to the rapid progression of idiopathic pulmonary fibrosis. Fibrogenesis Tissue Repair. 2012; 5(Suppl.1): S3.
  17. Bhan U., Lukacs N.W., Osterholzer J.J., Newstead M.W., Zeng X., Moore T.A. et al. TLR9 is required for protective innate immunity in Gram-negative bacterial pneumonia: role of dendritic cells. J. Immunol. 2007; 179(6): 3937-46.
  18. Унанян А.Л., Коссович Ю.М. Хронический эндометрит: этиопатогенез, диагностика, клиника и лечение. Роль антифиброзирующей терапии. Лечащий врач. 2012; 11: 35-40.

Поступила 18.06.2015
Принята в печать 26.06.2015

Об авторах / Для корреспонденции

Коган Евгения Александровна, д.м.н., профессор, зав. 1-м патологоанатомическим отделением ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-23-77. E-mail: koganevg@gmail.com, e_kogan@oparina4.ru
Гомболевская Наталья Александровна, аспирант ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (926)-589-90-45. E-mail: gombolevskaya@yandex.ru, belcha@mail.ru
Демура Татьяна Александровна, д.м.н., с.н.с. 1-го патологоанатомического отделения ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-23-11. E-mail: uursula90@gmail.com, t_demura@oparina4.ru
Марченко Лариса Андреевна, д.м.н., профессор, в.н.с. отделения гинекологической эндокринологии ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-85-40, 8 (903)-547-60-58. E-mail: l.a.marchenko@yandex.ru
Бурменская Ольга Владимировна, д.б.н., научный сотрудник лаборатории молекулярно-генетических методов ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-22-92. E-mail: bourmenska@mail.ru
Файзуллина Нафиса Мунаваровна, к.х.н., с.н.с. 1-го патологоанатомического отделения ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-23-11. E-mail: nafisa.fayzullina@gmail.com
Муравьева Вера Васильевна, к.б.н., с.н.с. лаборатории микробиологии ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-25-33. E-mail: v_muravieva@oparina4.ru

Для цитирования: Коган Е.А., Гомболевская Н.А., Демура Т.А., Марченко Л.А., Бурменская О.В., Файзуллина Н.М., Муравьева В.В. Роль toll-like рецепторов 2-го, 4-го, 9-го типов в патогенезе хронического эндометрита. Акушерство и гинекология. 2015; 12: 81-88.

Полный текст публикаций доступен только подписчикам

Нет комментариев

Комментариев: 0

Вы не можете оставлять комментарии
Пожалуйста, авторизуйтесь