Роль тромбоцитарно-моноцитарных комплексов периферической крови в репродуктивных процессах и методы их исследования

Настоящей обзор посвящен анализу и обобщению результатов исследований, характеризующих взаимодействия тромбоцитов и моноцитов периферической крови, проводимых с целью определения их роли в различных физиологических и патофизиологических процессах. При этом особое внимание было уделено репродуктивно значимым процессам. В связи с тем, что выраженность, направленность и последствия взаимодействий между этими типами клеток в наибольшей степени характеризуется количеством, иммуноморфологическими особенностями и функциональной активностью образующихся в результате таких взаимодействий тромбоцитарно-моноцитарных комплексов (ТМК), особое внимание было уделено изучению данных, полученных при исследовании этих структурных образований. В частности, рассматриваются результаты изучения механизмов взаимодействия между тромбоцитами и моноцитами, приводящих не только к формированию, но и стабилизации этих структур. Описываются мембраносвязанные молекулы и молекулярные комплексы, обеспечивающие образование ТМК, а также растворимые факторы, способствующие развитию механизмов комплексообразования на ауто- юкста- и паракринном уровнях регуляции. В обзоре содержатся характеристики методов выделения и идентификации ТМК, таких как дифференциальное и градиентное центрифугирование, иммуномагнитная сепарация, электронная микроскопия, световая и флуоресцентная микроскопия, проточная цитометрия и проточная цитометрия с визуализацией. Их преимущества и недостатки анализируются с точки зрения адекватности, технологичности и клинико-диагностической информативности проведенных исследований. Оцениваются данные литературы по изучению роли ТМК в репродуктивных патологиях.
Заключение. Контактное взаимодействие тромбоцитов и моноцитов играет важную роль в различных физиологических и патофизиологических процессах. Возможность эффективно выделять и идентифицировать ТМК с помощью современных технологий создало предпосылки для использования измерения концентрации ТМК в качестве диагностического и прогностического показателя при заболеваниях, сопровождающихся нарушениями гемостаза. С точки зрения репродуктивных процессов, безусловный интерес представляет изучение влияния ТМК на клетки эндометрия и трофобласта. Перспективным представляется подход, основанный на создании клеточных моделей, использующих линии клеток соответствующего происхождения.

Взаимодействие тромбоцитов с другими типами клеток, в том числе с лейкоцитами во многом определяет их роль в регуляции гомеостаза. По современным представлениям, ключевым звеном этого взаимодействия является образование тромбоцитарно-лейкоцитарных комплексов [1].

Определяющая роль тромбоцитов в процессе свертывания крови, необходимого для репарации повреждений кровеносных сосудов, была описана еще в конце XIX в. Bizzozero G. [2]. В дальнейшем было показано, что тромбоциты вовлекаются и во многие другие физиологические процессы. При этом в не меньшей степени изучена роль тромбоцитов в реализации репродуктивной функции, в частности, в процессе формирования и функционирования плаценты. На самых ранних этапах ее развития, в процессе инвазии, внутрисосудистый цитотрофобласт проникает в просветы спиральных артерий и формирует там плотные конгломераты [3], так называемые цитотрофобластические «пробки». Данные образования имеют неравномерную плотность, а в областях с разряженной плотностью могут формироваться каналы [4]. Несмотря на то что материнский кровоток в маточных спиральных артериях затрудняется «пробками» инвазировавшего цитотрофобласта, плазма и тромбоциты материнской крови могут проходить через узкие межклеточные промежутки, в то время как эритроциты и лейкоциты задерживаются и не попадают в межворсинчатое пространство. Из-за своих малых размеров (2–4 мкм) тромбоциты могут быть первыми среди материнских клеток крови, которые проникают в межворсинчатое пространство еще до полного установления маточно-плацентарного кровотока, определяя, таким образом, иммунологические материнско-фетальные взаимоотношения на самом раннем этапе репродуктивного процесса. При этом следует учитывать, что на поверхности тромбоцитов представлены антигены HLA I класса и другие аллоантигены, что, безусловно, делает их активными участниками материнско-фетальных иммунных взаимодействий.

Тромбоциты и содержимое их гранул выполняют важную регуляторную роль на ранних этапах развития плаценты. В частности, Moser G. et al. [5] продемонстрировали, что материнские тромбоциты локализуются не только на поверхности плацентарных ворсин, но также в якорных зонах трофобластических клеточных колонн. В настоящее время неизвестно, влияют ли различные факторы тромбоцитарного происхождения на функционирование различных субпопуляций трофобласта. Тем не менее, накопление тромбоцитов в межклеточных пространствах дистальных частей трофобластических колонн может свидетельствовать о возможном их вкладе в формирование инвазивного фенотипа клеток трофобласта. Кроме того, адгезия материнских тромбоцитов к поверхности ворсин и дегрануляция их содержимого может влиять на физиологию трофобласта, включая транспорт от матери к плоду и эндокринную активность.

В литературе накапливаются данные о роли негемостатических функций тромбоцитов в процессе плацентации [6]. Это может быть связано с участием тромбоцитов в инвазии трофобласта. В исследовании Sato Y. et al. была показана адгезия тромбоцитов CD41+ к клеткам CD146+ вневорсинчатого трофобласта, а также экспрессия P-селектина на поверхности большинства тромбоцитов, что говорит об их активированном состоянии. Результаты экспериментального исследования по изучению эффекта совместного культивирования клеток трофобласта и тромбоцитов позволяет предположить, что факторы, высвобождаемые тромбоцитами, могут индуцировать дифференцировку вневорсинчатого трофобласта с образованием внутрисосудистого фенотипа [7].

Важная роль тромбоцитов на ранних постимплантационных этапах репродуктивного процесса нашла свое отражение в эмпирическом использовании обогащенной тромбоцитами плазмы для орошения полости матки пациенток перед процедурой ЭКО.

Помимо этого, доказано участие тромбоцитов в регулировании реакций врожденного и приобретения иммунного ответа за счет взаимодействия с иммунокомпетентными клетками. Вовлеченность тромбоцитов в процесс асептического воспаления представляет особую важность для функционирования трофобласта. Материнские тромбоциты активируются при прохождении через межворсинчатое пространство за счет локального стаза, турбулентности и повреждения синцитиотрофобласта. Активация материнских тромбоцитов происходит под воздействием прокоагулянтных внеклеточных везикул, поступающих из синцитиотрофобласта, что ведет к высвобождению из тромбоцитов аденозинтрифосфата (АТФ) и активации инфламмасом в трофобластических клетках [8]. В результате в плаценте формируется провоспалительный профиль, который, возможно, приумножается до системного эффекта, включающего почечную и эндотелиальную дисфункцию, которая обусловливает такие гестационные сосудистые осложнения, как преэклампсия (ПЭ) и HELLP-синдром [9].

При изучении тромбоцитарно-лейкоцитарных взаимодействий анализируют изменения морфологии и функциональной активности тромбоцитов и лейкоцитов, вызванные ауто- и паракринным действием биологически активных веществ (хемокины, интерлейкины и т.п.), а также особенности формирования и функционирован...

Селютин А.В., Чепанов С.В., Павлов О.В., Корнюшина Е.А., Сельков С.А.