Семейная гиперхолестеринемия, вызванная новой мутацией c.1327 T>C (p.W433R) в гене рецептора липопротеинов низкой плотности человека

В процессе исследования молекулярной природы семейной гиперхолестеринемии (СГХС) в когорте пациентов в Петрозаводске нами была обнаружена мутация в гене рецептора липопротеинов низкой плотности (ЛНП), обозначенная c.1327 T>C (W443R [W422R]). Предсказанным эффектом этой мутации является замена остатка аминокислотного остатка триптофана на остаток аргинина в чрезвычайно консервативном домене рецептора ЛНП, так называемом β-пропеллере. Наследование мутации было прослежено в четырех поколениях и убедительно показана косегрегация мутации и СГХС в родословной. Несмотря на предсказанный патогенный эффект мутации и выраженную гиперхолестеринемию, ишемическая болезнь сердца была диагностирована только у одного члена семьи из 6 обследованных в форме стабильной стенокардии второго функционального класса. Мы считаем идентификацию мутации важным шагом для корректировки терапии членам семьи, в первую очередь препаратами группы статинов.

Гиперхолестеринемия — один из недооцененных факторов риска развития сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) в России, в том числе за счет неизученной распространенности моногенной семейной гиперхолестеринемии (СГХС) в стране. Действительно, в настоящее время в России СГХС преимущественно не диагностируется, в результате истинное число пациентов, не получающих лечение, неизвестно. СГХС характеризуется чрезвычайной генетической гетерогенностью: в мире описано более 1000 мутаций гена рецептора липопротеина низкой плотности (ЛНП), а в России — более 60 [1—3]. При этом каждая этническая группа имеет свои особенности [4—6]. На практике врачи, по-видимому, значительно чаще встречаются с СГХС, чем они предполагают, так как, несмотря на имеющиеся зарубежные и отечественные публикации, это заболевание в России плохо диагностируют и неадекватно лечат или вовсе не лечат даже при наличии классической симптоматики [2, 7].

Материал и методы

Скрининговые обследования для выявления мутаций в гене рецептора ЛНП были проведены среди больных с клиническими признаками СГХС, наблюдавшихся на базе кафедры факультетской терапии, фтизиатрии, инфекционных болезней и эпидемиологии ФГБОУ ВО Петрозаводского государственного университета. Обследовано 273 пациента, генетический анализ выполнен у 110. У всех обследованных анализировали липидный состав крови, уровень глюкозы в крови, электрокардиограммы (ЭКГ), выполняли холтеровское мониторирование ЭКГ, эхокардиографию (ЭхоКГ), триплексное сканирование брахиоцефальных артерий (ТС БЦА). Большинство обследованных были русской национальности, проживали в Петрозаводске или в других населенных пунктах Республики Карелия. Диагноз СГХС устанавливали на основании следующих критериев: уровень общего холестерина (ОХС) более 7,8 ммоль/л, холестерина (ХС) ЛНП выше 4,9 ммоль/л (в исследование включали пациентов со IIA и IIB типом гиперлипидемий по Fredrickson), наличие сухожильных ксантом у обследуемого или родственников первой степени родства и отсутствие заболеваний, приводящих к развитию вторичной гиперлипопротеинемии, таких как сахарный диабет, гипотиреоз, нефротический синдром. Использовали систему оценки вероятности СГХС, разработанной The Dutch Lipid Clinic Network [4].

Анализ липидов крови проводили на анализаторе Cobas Integra 400+. ОХС, ХС ЛНП, триглицериды (ТГ) определяли ферментативным колориметрическим методом. ХС липопротеинов высокой плотности (ЛВП) определяли ферментативным колориметрическим методом без предварительной преципитации (прямым методом). Уровень липопротеина (а) (ЛП(а)) оценивали методом иммунотурбодиметрии. Нормальным считали уровень менее 0,3 г/л.

Анализ ДНК. В качестве материала для анализа использовали замороженную периферическую (венозную) кровь больных с антикоагулянтом (ЭДТА), которую на льду перевезли в Санкт-Петербург. Для выделения ДНК из лейкоцитов использовали метод Л. Кюнкеля и соавт. [8] в модификации Белла [9] для небольших количеств крови. Для получения ДНК использовали 700—1000 мкл замороженной крови.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили в микропробирках емкостью 0,5 мл на аппарате «Терцик». Для амплификации всех экзонов гена использовали праймеры по последовательностям [10].

Количество и специфичность продуктов ПЦР перед дальнейшим анализом проверяли электрофоретически в поли-акриламидном геле с последующим окрашиванием ДНК серебром или бромистым этидием. Анализ конформационного полиморфизма однонитевых фрагментов ДНК проводили на гелевом секвенаторе ALFExpress-2 с использованием программы ALFWIN Sequence Analyzer.

Секвенирование было осуществлено сотрудниками ресурсного центра «Развитие молекулярных и клето...

Корнева В.А., Кузнецова Т.Ю., Муртазина Р.З., Дидио А.В., Богословская Т.Ю., Мандельштам М.Ю., Васильев В.Б.