Состояние локального иммунитета при хроническом рецидивирующем вульвовагинальном кандидозе

Цель исследования. Изучение профиля экспрессии мРНК генов цитокинов в вагинальных мазках методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в режиме реального времени.
Материал и методы. Обследовано 76 женщин репродуктивного возраста, из них хронический рецидивирующий вульвовагинальный кандидоз (ХРВК) верифицирован у 34 пациенток. Для количественной оценки уровня экспрессии мРНК генов использован метод сравнения индикаторных циклов (метод Δ∆Cq) с нормировкой по пяти референсным генам.
Результаты исследования. Показано, что ХРВК сопровождается повышением уровня экспрессии мРНК провоспалительных цитокинов (TNF‑α, IL‑1β, IL‑6, IL‑8, IFN‑γ), а также IL‑10 и снижением уровня экспрессии мРНК генов IL‑18 и IL‑12α/p35.
Заключение. Полученные результаты позволяют полагать, что в развитии воспалительного процесса при ХРВК существенную роль играют цитокины IL‑1β, TNF‑α, IL‑8, IL‑18, IL‑12α/p35, IL‑10, IFN‑γ и CD45.

Вульвовагинальный кандидоз (ВВК) занимает одно из ведущих мест в ряду инфекционных заболеваний нижнего отдела репродуктивной системы женщин. По меньшей мере 75% женщин хотя бы раз в течение жизни предъявляют жалобы, характерные для ВВК [4,6,10]. По различным оценкам, у 5—10% женщин с ВВК заболевание приобретает хроническое рецидивирующее течение с 4 и более обострениями в течение года [10].

Ключевую роль в иммунном ответе при кандидозе играют макрофаги и нейтрофилы, обеспечивающие фагоцитоз и уничтожение возбудителя непосредственно на слизистых оболочках нижних отделов репродуктивной системы. Фагоцитоз сопровождается синтезом в макрофагах ряда цитокинов (TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8 и др.), сигнализирующих о внедрении патогенов и обеспечивающих привлечение клеток иммунной системы в очаг воспаления. Эффективность фагоцитоза обеспечивается вовлечением в данный процесс CD4+-Т-хелперов 1-го типа (Th1), которые вырабатывают IFN-γ , тем самым усиливая фагоцитирующие функции макрофагов.

Клетки слизистой оболочки влагалища не только создают механический барьер для инфекционных агентов, но также принимают участие в процессинге и презентации чужеродных антигенов, а также вырабатывают множество медиаторов иммунной системы (хемокины, интерлейкины и др.), которые непосредственно осуществляют и регулируют как врожденный, так и адаптивный иммунитет [3]. В связи с важностью установления причин возникновения хронической кандидозной инфекции актуальным является изучение спектра цитокинов при данной инфекции.

Определение уровня белков цитокинов методом иммуноферментного анализа до недавнего времени было единственным способом изучения функционирования и значения цитокинов при разных патологических состояниях, в том числе и при кандидозной инфекции. С разработкой ПЦР-технологий использования флюоресцентномеченных проб и детекции результатов в режиме реального времени появилась возможность полноценной количественной оценки уровня мРНК генов цитокинов.

Несмотря на огромное число публикаций, посвященных проблеме ВВК, мы не нашли работ по количественному определению мРНК генов цитокинов непосредственно в клетках вагинального отделяемого у пациенток с кандидозной инфекцией, поэтому настоящее исследование посвящено изучению профиля экспрессии мРНК генов цитокинов методом ОТ-ПЦР.

Материал и методы исследования

Обследовано 76 женщин репродуктивного возраста — от 19 до 46 лет, из них у 34 был верифицирован хронический рецидивирующий вульвовагинальный кандидоз (ХРВК). У 19 женщин ВВК был выявлен в виде моноинфекции, у 15 — в сочетании с бактериальным вагинозом (БВ). Все женщины с ХРВК были обследованы в период обострения заболевания. Контрольную группу составили 23 клинически здоровые женщины. В группу сравнения были включены 19 женщин с классическим БВ.

Для постановки диагноза ХРВК и БВ проводили клиническое и гинекологическое обследование: сбор анамнестических данных, жалоб пациентки, осмотр вульвы, слизистых влагалища и шейки матки в зеркалах, бимануальное гинекологическое исследование.

Микробиологическая диагностика основывалась на оценке состояния микроценоза влагали-ща по результатам комплексного исследования: микроскопии вагинальных мазков, окрашенных по Граму, и культурального исследования влагалищного содержимого.

Для исследования микрофлоры влагалища методом ПЦР взятие материала (вагинальные соскобы с заднебоковых стенок влагалища) осуществляли в пробирки с физиологическим раствором. При исследовании состава микробиоты влагалища использовали наборы «Проба ГС» и «Фемофлор» («ДНК-Технология», Россия) согласно инструкции. При количественной оценке биоценоза учитывали общую бактериальную массу, массу Lactobacillus spp. и 14 основных групп микроорганизмов, представляющих условно-патогенную флору, включая Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Gardnerella vaginalis, Fusobacterium spp., Atopobium vaginae, Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp., Candida spp. и др. Также было проведено обследование женщин методом ПЦР на наличие абсолютных патогенов.

мРНК генов цитокинов (IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, IL-18, IL-12α/p35, IL-10, IFN-γ, TGF-β1, LIF, а также общий лейкоцитарный антиген CD45) определяли с помощью метода ОТ-ПЦР.

Во избежание деградации РНК взятие материала (вагинальные соскобы) осуществляли в пробирки с раствором гуанидинтиоционата. В работе использовали коммерческие реактивы («ДНК-Технология», Россия) согласно инструкции.

Для количественной оценки уро...

Бурменская О.В., Байрамова Г.Р., Непша О.С., Трофимов Д.Ю., Муллабаева C.М., Донников А.Е., Екимов А.Н.