Сравнительное исследование культурального масла, используемого на эмбриологическом этапе программ лечения методами вспомогательных репродуктивных технологий

Цель: В рамках программ экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) определить влияние типа минерального масла, оказываемое на развитие эмбрионов человека при культивировании in vitro.
Материалы и методы: Исследование было проведено на зиготах/эмбрионах-сибсах (1198 эмбрионов), полученных от 84 пациенток, проходящих лечение бесплодия методами ЭКО в Клинике репродукции человека «АльтраВита». После оплодотворения эмбрионы-сибсы каждой пациентки культивировались в течение 5–6 дней в микрокаплях среды под слоем либо минерального, либо парафинового масла. Оценивались следующие показатели: частота оплодотворения и дробления эмбрионов, частота образования бластоцист и бластоцист хорошего качества, частота имплантации эмбрионов и наступления клинической беременности.
Результаты: Общее количество бластоцист и частота образования бластоцист хорошего качества были значимо выше в группе эмбрионов, где использовалось парафиновое масло, по сравнению с эмбрионами, которые культивировались под слоем минерального масла. Частота оплодотворения и дробления эмбрионов, частота имплантации и наступления клинической беременности между двумя группами статистически не различались. 
Заключение: Использование парафинового масла для покрытия капель со средой при культивировании эмбрионов in vitro повышает эффективность эмбриологического этапа по сравнению с использованием для тех же целей минерального масла.

Вклад авторов: Скорлупкина Н.Н., Апрышко В.П., Яковенко С.А. – концепция и дизайн исследования; Скорлупкина Н.Н., Лебедева Е.Б., Кириенко К.В., Миронова А.Г. – сбор и обработка материала; Скорлупкина Н.Н. – статистическая обработка данных; Скорлупкина Н.Н., Кириенко К.В. – написание текста; Кириенко К.В. – редактирование. 
Конфликт интересов: Все авторы заявили об отсутствии конфликта интересов. 
Финансирование: Настоящая работа была проведена без участия спонсорской помощи.
Одобрение Этического комитета: Исследование было выполнено в соответствии со стандартами надлежащей клинической практики (Good Clinical Practice) и принципами Хельсинкской Декларации. Протокол исследования был одобрен Этическим комитетом клиники репродукции человека «АльтраВита», ООО «ЭКО ЦЕНТР». 
Согласие пациентов на публикацию: Пациенты подписали информированное согласие на публикацию своих данных.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Скорлупкина Н.Н., Апрышко В.П., Лебедева Е.Б., Кириенко К.В., Миронова А.Г., Яковенко С.А. Сравнительное исследование культурального масла, используемого на эмбриологическом этапе программ лечения методами вспомогательных репродуктивных технологий. 
Акушерство и гинекология. 2024; 8: 121-126
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2024.123

Покрытие маслом культуральной среды (именуемой в дальнейшем «среда») в чашках, где культивируются эмбрионы, является методом, используемым в эмбриологии еще с 1960-х гг. [1, 2]. Масло предотвращает повреждение ооцитов и эмбрионов, которое может возникнуть во время культивирования в СО2-инкубаторе или при рутинных манипуляциях вне инкубатора [3, 4]. Кроме того, среда, покрытая маслом, меньше подвержена загрязнению частицами из внешней среды и лучше защищена от контаминации микроорганизмами [2, 5]. Стандартная методика поддержания влажности, используемая в СО2-инкубаторах, может приводить к испарению сред и изменению их осмолярности [5]. Поэтому важным позитивным эффектом от использования масла при культивировании эмбрионов in vitro является защита среды от изменения осмолярности [3].

Культивирование эмбрионов в отдельных каплях является одним из стандартных методов в современных лабораториях экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) [1, 6]. Несмотря на то что эмбрионы млекопитающих толерантны в большом диапазоне осмолярности, для эмбрионов человека необходима постоянная осмолярность среды при культивировании [2, 3]. Ее значение является критическим для процесса формирования бластоцист [2]. Отклонение параметра pH в средах может влиять на метаболизм эмбрионов, а осмотический стресс оказывать негативное влияние на их жизнеспособность [2, 3].

С другой стороны, использование масла при культивировании эмбрионов может оказывать не только положительное влияние на их развитие [4, 7]. Во время производства, транспортировки и хранения масла возможна его контаминация веществами, которые могут оказать токсичное воздействие на ооциты и эмбрионы [7–9]. Такие соединения могут аккумулироваться в масле [8, 9]. В ряде исследований на мышиных, коровьих и человеческих эмбрионах было показано, что токсичные вещества могут экстрагироваться из масла в культуральную среду [3, 8–10]. В связи с этим может быть рекомендована «отмывка» масла перед его использованием для культивирования, то есть эквилибрация масла в течение 24 ч и более с водой и/или средой, в которой впоследствии будут культивироваться эмбрионы [8].

Минеральное масло разных производителей может отличаться по вязкости, плотности и качественному составу [4, 9]. Более того, различные лоты масла одного и того же производителя могут отличаться по своим физико-химическим свойствам и оказывать, таким образом, различное влияние на жизнеспособность эмбрионов при культивировании in vitro. Поэтому перед использованием масла как элемента в системе культивирования эмбрионов, его желательно тестировать с использованием биологической пробы.

Целью настоящего исследования было сравнение двух вариантов коммерчески доступного масла, которое предназначено для культивирования эмбрионов in vitro.

Материалы и методы

Исследование по культивированию эмбрионов-сибсов с использованием минерального и парафинового масла проводилось в клинике репродукции человека «АльтраВита». В исследовании приняли участие 84 пары, проходящие лечение бесплодия методами ЭКО, у которых в результате индукции суперовуляции было получено более 10 зрелых ооцитов MII. Пациенты, дополнительно использующие предимплантационное генетическое тестирование, исключались из исследования.

Данное исследование было одобрено этическим комитетом Клиники репродукции человека «АльтраВита». Все пациенты, включенные в исследование, были информированы о нем до пункции яичников и подписали информированное согласие.

Индукцию суперовуляции проводили в коротком протоколе с использованием антагонистов гонадотропин-рилизинг-гормона. Со 2–3-го дня менструального цикла назначались рекомбинантные и/или мочевые гонадотропины в суточной дозе 150–300 МЕ. Овуляцию инициировали введением хориониче...

Скорлупкина Н.Н., Апрышко В.П., Лебедева Е.Б., Кириенко К.В., Миронова А.Г., Яковенко С.А.